急性髓系白血病伴异常高表达CD7骨髓流式散点图及形态学特征研究

赵 海 军

(河北省三河市医院,河北 三河 065200)



急性髓系白血病伴异常高表达CD7骨髓流式散点图及形态学特征研究

赵 海 军

(河北省三河市医院,河北 三河 065200)

目的 研究异常高表达CD7的急性髓系白血病(AML)骨髓流式散点图及形态学特征。方法 采用流式细胞仪对确诊的AML患者白血病细胞进行免疫学表型分析，观察其骨髓流式散点图和形态学特征。

结果 9例CD7+AML患者中5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6。其抗原表达由高到低为CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%),CD7+AML与CD7-AML在形态学上也有显著不同。结论 在AML中不同FAB分型均可有CD7异常高表达，CD7+AML在流式细胞术、骨髓形态学等方面具有特殊之处。

急性髓系白血病；骨髓流式散点图；CD7；流式细胞术

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是髓细胞系起源的白血病细胞在血液、骨髓和其他组织中克隆性增殖的白血病。AML的正确分型对白血病的诊断、治疗方案的制订、疗效与预后的判断十分重要。由于白血病细胞存在抗原表达异质性这一显著特征，常出现某些抗原过弱表达、过度表达、不同系列抗原交叉表达及抗原跨阶段表达等情况[1]，因此，单纯依靠骨髓形态学特征诊断标准对白血病进行分型已经不能满足临床需求，应在此基础上结合免疫学分型，使白血病诊断和分类更加精确。我们采用流式细胞术(FCM)对我院收治的9例AML患者进行免疫学分型，观察CD7在AML中的表达情况，并分析CD7阳性患者骨髓流式散点图及其形态学特征。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013-01—2014-12月三河市医院血液内科收治AML初诊住院患者42例，经骨髓细胞免疫分析检测，确诊9例CD7+AML，其中男3例，女6例；年龄31～69岁，中位年龄47岁。所有患者抽骨髓及外周血涂片经瑞氏染色后分类计数，按FAB分型标准进行细胞形态学分型。所有病例最终根据患者的临床表现、骨髓细胞形态学、细胞化学染色及免疫分型确诊。

1.2 仪器与试剂

流式细胞仪:FACS-Calibur型，购自美国BD(Becton Dickinson)公司，功率15 MW，激光光源主要采用氩离子气体激光器，2个激光光源波长分别为488 nm及635 nm。

单克隆抗体：美国BD公司产品，所选用单克隆抗体有CD5、CD7、CD3、CD19、CD14、CD64、CD34、CD38、HLA-DR、CD13、CD71、CD33、CD16、CD11b、CD61、CD62b、CD15、CD117、MPO、CD4、CD8、CD10、CD25、CD79a。

相关试剂：美国BD公司产品，所用荧光包括FITC(异硫氰酸荧光素)、PE(藻红蛋白荧光素)和PerCP(叶绿素蛋白)。

1.3 荧光标记染色

采用直接免疫荧光标记法，所有病例于治疗前抽取骨髓2.0～3.0 mL，EDTA抗凝，标记流式专用试管，每管加入FITC、PE和PercP标记的抗体，同时设定阴性对照(IgGl与IgG2)，各管加入抗凝骨髓，避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解红细胞10 min，离心、弃上清，PBS洗涤2次，加PBS液，上机检测。胞浆抗原的检测：标记膜抗原后加破膜剂10 min，PBS洗涤，加胞浆抗体，避光孵育15 min，PBS洗涤2次，加PBS液，上机检测。

1.4 检测与分析

标准荧光微球校准仪器，Cellquest软件设置获取条件，依次上样获取数据，每管获取细胞数50 000个，以CD45/SSC双参数二维散点图设置方法进行免疫表型分析，计算幼稚细胞群中白血病细胞的表面标记量，抗原表达量≥20%判定为阳性。

1.5 骨髓细胞形态分析

采集初诊患者骨髓穿刺液涂片，经瑞氏-姬姆萨混合染色液染色，光学显微镜下进行细胞分类计数。

1.6 统计学方法

采用PEMS 3.1 for windows统计学软件分析数据，计数资料采用χ2检验。

2 结 果

2.1 CD7+AML和CD7-AML患者一般情况比较

CD7+AML和CD7-AML患者年龄、性别、白细胞计数、血小板计数及骨髓原始细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2 FAB分型结果

9例CD7+AML患者中，5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6(图1)。与同期确诊的CD7-AML患者差异无统计学意义(P<0.05)。

R2为白细胞裂孔细胞，横、纵坐标分别表示细胞群相应抗体的荧光强度。

图1 CD7+AML-M3患者免疫分型

2.3 免疫分型结果

9例CD7+AML患者抗原表达由高到低为CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%)(表1)。

表1 CD7+AML患者FCM检测免疫表性结果(n=9)

3 讨 论

细胞表面抗原标志随着细胞分化的不同时期可以有序地获得或消失，使细胞表型呈现时相性特征。所以，各个发育阶段细胞的抗原表达特点已成为细胞分类及亚群划分和研究细胞分化成熟的有力指征[2]。CD7抗原是T细胞发育过程中的一个特征性标志，并用于T淋巴细胞白血病的诊断及其亚型的区分。随着研究的深入，人们对CD7抗原有了新的认识，目前认为CD7抗原并非T淋巴细胞的特异性标志抗原，具有多项分化潜能的造血干细胞阶段也可表达此抗原[3]。FCM免疫分型是应用单克隆抗体荧光标记技术对各种白血病细胞内外的特异性抗原进行精细的检测和判定，具有很高的敏感性、特异性和稳定性，且能在短时间内对大量细胞进行定量分析，因而提高了白血病分型的准确率，弥补了FAB形态学分型的不足[4]。

检索PubMed及万方数据库，目前尚无CD7+AML-M3报道，其余FAB各分型均有CD7+AML病例报道，提示细胞分化程度越低，CD7阳性表达率越高[5]。但本研究发现，CD7在AML的FAB各分型中均有不同程度的表达，本组9例CD7+AML患者中包括5例AML-M2a，2例AML-M5b，1例AML-M3及1例AML-M6，我们认为可能与不同地域、不同人种、单抗的组合选择及检测病例的多少有关。髓系相关抗原中最特异和最敏感的指标有CD33、CD13和CD117，本组病例中CD33、CD13、CD117的阳性表达率均为100%，其他髓系相关抗原CD38、MPO的阳性表达率为88.9%，CD64、CD34的阳性表达率为77.8%，HLA-DR的阳性表达率为66.7%。

本研究资料显示，CD7+AML患者骨髓形态学与传统CD7-AML患者骨髓形态学相比存在一定异质性。观察1例CD7+AML-M2a男性患者骨髓形态发现，原始粒细胞较CD7-AML-M2a的细胞有很大区别：体积偏小，胞核较大，多偏位，常为不规则形，有扭曲折叠，有凹陷或切迹，核染色质呈细颗粒状；胞质量少，呈淡蓝色(图2)。上述形态描述，往往会被误认为是原始单核细胞，该病例极有可能被误诊为AML-M5。通过对我院初诊治疗的CD7+AML患者随访，发现其完全缓解率明显低于CD7-AML患者，预后差，复发率高，与CD7+AML预后差的报道一致[6]，提示CD7抗原表达是AML预后不良的标志。

黑色箭头所指为原始粒细胞变异表达CD7细胞。

综上，CD7+AML具有不同于CD7-AML的独特特点，其流式散点图、骨髓形态、治疗效果及预后等方面均有其自身特点。有研究发现传统形态学结合组织化学染色不能精确诊断急性白血病[7]，如果完全依赖还可能导致误诊，另外POX染色小于3%也并非是诊断急性淋巴细胞白血病的通用参考指标。这就要求形态学检验工作者不能单纯依靠FAB分类标准对AML进行分型，以免误诊或作出不准确报告，建议结合流式细胞术，必要时还可结合细胞遗传学、分子生物学等其他相关检测，这样才能够为AML诊断、治疗方案的制定及预后判断提供可靠依据。

[1]李耀华,徐娟,孙雪静,等.CD7在成人急性髓系白血病的表达及其在微小残留病检测中的应用[J].首都医科大学学报,2006(27):233-236.

[2]熊伟,薛惠良,陈炳才,等.表达CD7抗原的小儿急性髓性白血病28例临床探讨[J].中国实用儿科杂志,2002(17):558-559.

[3]吴红红,曹晖,王亚哲,等.CD7阳性急性髓系白血病骨髓干/祖细胞5个基因表达的研究[J].中国实验血液学杂志,2009,17(2):298-303.

[4]要跟东,霍红旗,李鹏,等.急性髓系及混合型白血病流式细胞术免疫分型检测结果[J].白血病·淋巴瘤,2010(19):746-747.

[5]承璐雅,王伟光,庄静丽,等.CD7+急性髓细胞性白血病临床及实验室特征分析[J].内科及危重症杂志,2006,12(2):85.

[6]孟君霞,武永强,唐广,等.CD7抗原表达与急性髓系白血病临床特征、细胞遗传学特点及预后的关系[J].新乡医学院学报,2016,33(6):508-510.

[7]张斌,蔡艳霞,周斌,等.变异异常高表达CD7伴浆细胞增多急性粒细胞白血病部分分化型一例并文献复习[J].白血病·淋巴瘤,2013,22(12):754-755.

[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：刘彦哲]

Bone Marrow Flow Pattern and Morphological Characteristics of Acute Myeloid Leukemia with Abnormally High CD7 Expression

ZHAO Hai-jun

(Sanhe City Hospital,Sanhe,Hebei 065200,China)

Objective To study the bone marrow flow pattern and morphological characteristics of acute myeloid leukemia with abnormally high expression of CD7.Methods Flow cytometry was used to analyze the immunophenotype of leukemic cells in AML patients,and the bone marrow flow pattern and morphological characteristics were observed.Results There were five cases of M2a,one M3,two M5b and one M6 in nine cases of CD7+AML.The CD antigen expressions from high to low were CD33(100%),CD13(100%),CD117(100%),CD38(88.9%),MPO(88.9%),CD64(77.8%),CD34(77.8%),HLA-DR(66.7%),CD71(33.3%),CD11b(22.2%),CD15(22.2%)and CD25(22.2%),respectively.There were significant morphological differences between CD7+and CD7-AML.Conclusion Abnormally high expression of CD7was detectable in different FAB classification of AML and CD7+AML had special features in flow cytometry and bone marrow morphology.

acute myeloid leukemia;bone marrow flow pattern;CD7;flow cytometry

赵海军(1977-)，男,河北三河人,主管检验师,从事临床医学检验。

R 733.71

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.08.009

来稿日期：2016-09-12