青海藏族和回族胃癌发病风险与CYP2E1基因多态性*

迪 吉，赵君慧

(青海大学附属医院肿瘤内科 )

青海藏族和回族胃癌发病风险与CYP2E1基因多态性*

迪 吉，赵君慧※

(青海大学附属医院肿瘤内科 )

目的 明确青海地区藏、回族胃癌患者CYP2E1基因SNP位点分布频率，探讨青海地区藏、回族胃癌患者CYP2E1基因SNP与环境因素的相关性。方法 在青海地区藏、回族病例中随机选取研究对象，运用病例对照研究，按照随机数字表法分为病例组和对照组，各96例，全血抽提基因组DNA。采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)方法研究青海藏族、回族CYP2E1基因多态性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)及与胃癌的相关性。病例组与对照组之间位点基因型频数分布差异采用χ2检验。同期进行病例组与对照组间胃癌高危因素调查。结果 1.CYP2E1基因5′-端位点在藏族病例组和对照组的分布频率分别为c1/c1：80.2%、c1/c2：13.5%、c2/c2：6.3%；c1/c1：82.3%、c1/c2：15.6%、c2/c2：2.0%(P>0.05)；回族病例组和对照组的分布频率分别为40.6%、52.1%、7.3%；71.88%、22.92%、5.2%(P<0.05)。结论 1.CYP2E1基因不是青海藏族人群胃癌的易感基因；2.CYP2E1基因是青海回族人群胃癌的易感基因；3.年龄、幽门螺旋杆菌、饮食习惯、高脂血症、慢性萎缩性胃炎、家族胃癌病史是青海地区藏族人群罹患胃癌的主要环境危险因素；4.年龄、大量进食肉类、幽门螺旋杆菌、慢性萎缩性胃炎、血小板数异常是青海地区回族人群罹患胃癌的主要环境风险因素。

藏族 回族 胃癌 CYP2E1 基因多态性 易感性

细胞色素P4502El(cytochrome P4502E1，CYP2E1)是代谢酶类基因，在人体内是亚硝酸的重要代谢酶，而亚硝酸是导致胃癌的重要因素[1-5]。因此，CYP2E1基因多态性位点可能影响胃癌的发生。本课题拟用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)方法研究青海藏族、回族CYP2E1基因多态性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)及与胃癌的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2014年12月～2016年12月，就诊青海大学附属医院藏、回族胃癌患者各96例，设为病例组(未经放化疗)；同期就诊的健康藏、回族体检者各96例，设为对照组。其中藏族病例组男性60例，女性36例，年龄44.64±16.71；对照组男性55例，女性42例，年龄46.64±12.26； 回族病例组男性65例，女性34例，年龄42.14±11.71；对照组男性50例，女性46例，年龄44.04±14.62。

将两组患者的CYP2E1基因型进行Hardy-Weinberg遗传平衡吻合度检验。结果显示两组各基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。具体数据见表1。

表1 藏、回族病例组与对照组人群Hardy-Weinberg平衡吻合度比较表

Table 1 Comparison of Hardy-Weinberg balanced anastomosis between Tibetan and Hui (case group and control group)

1.2 原发性胃癌诊断标准

(1)经组织病理学证实术后病理诊断；(2)符合2011年中国抗癌协会胃癌专业委员会制定的原发性胃癌临床诊断标准[6]。

1.3 标本

采集全血10 mL，进行血清和单个核细胞分离。抽提基因组DNA，备用。

1.4 测定方法

采用PCR、DHPLC法检测胃癌患者及健康人群CYP2E1表达水平；采取酚-氯仿法制备基因组DNA。

1.5 引物

设计和合成：

(1)构建CYP2E1引物，设β球蛋白(β-globin，268bp)为内对照：

5′CAA CTT CAT CCA CGA TCA CC3′

5′GAA GAG CCA AGA ACA GGT AC3′

(2)PCR扩增CYP2E1基因5′端调控区RsaIRFLP位点。参数见表2。

表2 CYP2E1基因位点PCR扩增参数表

Table 2 PCR amplification parameter for CYP2E1 gene locus

1.6 CYP2E1 SNP等位基因分型检测方法

采用DHPLC法。

1.7 青海地区藏族、回族原发性胃癌高危因素调查方法

设置胃癌高危因素调查表[7-9]。受试者本人或家属签署知情同意书。

胃癌高危因素调查表内容：性别、年龄[10、11]、民族、居住地、饮食习惯[12-14]、职业因素、特殊生活习惯，是否有患癌家族史[15、16]和基础胃病史[17]等。病例组采用询问病人和查阅病历方法。

1.8 统计学方法

使用SPSS(Version 11.5)统计软件。发病风险与CYP2E1基因多态性采用Hardy-Weinberg平衡吻合度检验，计数资料采用χ2检验，并行logistic回归，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CYP2E1基因多态性与青海藏族、回族胃癌发病风险的关系

2.1.1 CYP2E1基因5′-端Rsa I(rs2031920)调控区位点3种基因型(c1/c1，c1/c2，c2/c2)在病例组和对照组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。提示CYP2E1基因5′-端Rsa I位点等位基因型可能不是青海藏族胃癌的确切易感基因。见表3。

表3 青海藏、回族病例组与对照组人群CYP2E1基因频率检验结果表(%)

Table 3 CYP2E1 gene frequency test in case group and control group of Tibetan and Hui nationality at Qinghai(%)

基因/基因型藏族病例组(n=96)对照组(n=96)回族病例组(n=96)对照组(n=96)CYP2E1基因C1/C177(80．2)79(82．3)39(40．6)69(71．88)C1/C213(13．5)15(15．6)50(52．1)22(22．92)C2/C26(6．3)2(2．0)7(7．3)5(5．20)χ219．556P0．384∗0．000

*：Fisher确切概率.

2.1.2 CYP2E1基因5′-端Rsa I(rs2031920)调控区位点3种基因型(c1/c1，c1/c2，c2/c2)在病例组和对照组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。表明CYP2E1基因5′-端Rsa I位点等位基因型是青海回族胃癌的确切易感基因。见表3。

2.2 青海藏、回族胃癌发病风险与CYP2E1基因多态性的关系

2.2.1 环境危险因素与青海藏、回族胃癌的单因素分析结果见表4。

表4 青海藏、回族胃癌危险因素logistic回归单因素分析表

Table 4 Single factor logistic regression analysis of gastric cancer risk factors in Tibetan and Hui at Qinghai

(1)藏族单因素分析结果：病例组与对照组在性别、血小板、饮酒及吸烟因素方面与胃癌发生无关，其余7个因素均达到显著性水平，是胃癌的危险因素。

(2)回族单因素分析结果：病例组与对照组在年龄、幽门螺旋杆菌、肉类、血小板、慢性萎缩性胃炎方面与胃癌发生相关，是胃癌的危险因素。

2.2.2 多因素分析结果见表5～6、图1。

表5 青海藏族胃癌危险因素logistic回归多因素分析表

Table 5 Multiple factor analysis of logistic regression of risk factors of gastric cancer in Qinghai Tibetan

因素βS．E．χ2POR年龄-0．8820．3327．0640．0080．414肉类1．9900．7796．5240．0117．314幽门螺旋杆菌-1．8760．7665．9770．0140．153高脂血症3．2770．79217．1210．00026．492慢性萎缩性胃炎-1．3480．6244．6620．0310．260蔬菜-2．2190．7997．7140．0059．201家族胃癌史3．7770．87618．6000．00043．694

表6 青海回族胃癌危险因素logistic回归多因素分析表

Table 6 Logistic regression multiple-factor analysis of risk factors of gastric cancer in Qinghai Hui nationality

因素βS．E．χ2POR年龄-0．8820．3327．0640．0080．414肉类1．8960．8165．3910．0206．658幽门螺旋杆菌1．8630．51413．1140．0006．443慢性萎缩性胃炎2．2690．44925．5210．0009．672血小板2．0910．60112．1060．0018．094

(1)环境危险因素与青海藏族胃癌的关系：在上述单因素分析的基础上，对选出的11个变量进行非条件logisitc回归分析，年龄、幽门螺旋杆菌、饮食习惯(肉类食用过多)、高脂血症、慢性萎缩性胃炎、饮食习惯(蔬菜食用不足)、家族胃癌病史共7个因素，达到显著性水平，是胃癌发生的影响因素，进入logisitc回归模型(α=0.05)。

(2)环境危险因素与青海回族胃癌的关系：在上述单因素分析的基础上，对选出的9个变量进行非条件logisitc回归分析，年龄、幽门螺旋杆菌、肉类、血小板、慢性萎缩性胃炎等5个因素达到显著性水平，是胃癌发生的影响因素，进入logisitc回归模型(α=0.05)。

(3)CYP2E1基因多态性位点结果图1。

①CYP2E1 基因PCR扩增产物电泳图：泳道1、2、3、4、5为扩增产物(413bp)，M为分子量标记：所用DNA对照标准品为Marker 1(100bp ladders)

a：CYP2E1 基因CC位点PCR扩增产物电泳图

b：CYP2E1 基因CT位点PCR扩增产物电泳图

c：CYP2E1 基因TT位点PCR扩增产物电泳图

图1 CYP2E1基因多态性位点结果图

Figure 1 Results of CYP2E1 gene polymorphic loci

a：CYP2E1 基因rs2031920位点野生型(C/C)DHPLC分型图

A：CYP2E1 基因rs2031920位点野生型(C/C)DHPLC分型的测序验证图

b：CYP2E1 基因rs2031920位点杂合突变型(C/T)DHPLC分型图

B：CYP2E1 基因rs2031920位点杂合突变型(C/T)DHPLC分型的测序验证图

c：CYP2E1 基因rs2031920位点杂合突变型(T/T)DHPLC分型的测序验证图

C：CYP2E1 DHPLC总图

图2 DHPLC检测CYP2E1基因多态性位点图

Figure 2 Maps for CYP2E1 gene polymorphic locus detected by DHPLC

3 讨论

某一基因多态性基因型的分布频率在患者人群与正常人群中统计学有显著性差异，可以认为此多态性基因是这种疾病的影响素因之一。特定的变异与环境因素和基因-环境相互作用致胃癌的发生率增高[18]。藏族、回族是青海地区主要少数民族，也是青海地区胃癌发病的主要人群[19-21]。对于胃癌相关的SNP研究，可以积累隔离民族的遗传学资料。

本研究显示CYP2E1基因5′-端Rsa I位点等位基因型不是青海藏族胃癌的确切易感基因，是青海回族胃癌的确切易感基因，提示同在青海地区的不同民族间存在CYP2E1基因多态性。

年龄、幽门螺旋杆菌、饮食习惯、高脂血症、慢性萎缩性胃炎、家族胃癌病史是青海地区藏族人群罹患胃癌的主要环境风险因素，多进食蔬菜是降低胃癌发生的保护因素。

年龄、大量进食肉类、感染幽门螺旋杆菌、罹患慢性萎缩性胃炎、血小板异常是青海地区回族人群罹患胃癌的主要环境危险因素。

研究已表明CYP2E1多态性与胃癌发生有密切关系，周涛等[22]研究表明，胃癌组c1/c1基因型的分布频率高于对照组，揭示了CYP2E1 c1/c1基因型与胃癌遗传易感性相关。陈元鸿等[23]研究显示，携带CYP2E1 c2/c2 基因型个体的CYP2E1酶活性比c1/c1型或c1/c2型携带者的酶活性高，携带CYP2E1 c1/c2或c2/c2基因型的个体比c1/c1基因型携带者患胃癌风险低，进一步说CYP2E1 c1/c1基因型是肿瘤易感基因。Elingarami S[24]则对中国江苏北部胃癌人群进行病例对照研究发现CYP2E1基因多态性是胃癌风险的独立预测因子。

但也有研究报道CYP2E1基因多态性不是胃癌的危险因素。Park GT[25]在韩国胃癌患者中发现，CYP2E1基因型分布的整体与对照组无显著性差异。González A[26]的研究表明，在哥斯达黎加人群中CYP2E1基因多态性可能与胃癌的风险呈负相关(OR0.09，IC95%：0.01-0.83)。Zhang MX[27]则在32病例对照研究的荟萃分析中阐述中国人群中CYP2E1多态性与胃癌易感性相关，但不够明确。仅在亚组研究中可以确定CYP2E1基因多态性增加吸烟人群胃癌的危险。而非吸烟人群中CYP2E1基因多态性与胃癌的风险无关联。CYP2E1多态性与胃癌易感性的关系还需要进一步探讨。上述研究报道结果并不一致，甚至自相矛盾的原因可能为，个体对活化解毒环境中各种前致癌物的能力存在遗传差异；样本量大小不一。因此，还需进一步扩大样本数量研究CYP2E1多态性，且须结合当地人种、民族特点及主要病因。 CYP2E1多态性与肿瘤易感性间的联系研究将有助于阐明肿瘤病因及发病机制，对防治肿瘤，尤其是早期筛查肿瘤高危人群有重要的现实意义。

青海地区各民族因宗教习俗与外界基因交流较少，选择青海藏族、回族作为研究样本具有可靠性。

相比青海其他民族，胃癌发病率较高，推测胃癌发生中遗传因素可能发挥了重要作用。因此，在研究藏、回族胃癌的易感基因时须筛查相关SNP。

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Risk of Gastric Cancer and Polymorphism of CYP2E1 Gene in Tibetan and Hui at Qinghai

DI Ji，ZHAO Jun-hui※

(Department of oncology，Affiliated Hospital of Qinghai University)

Objective To check the frequency of Qinghai Tibetan and Hui CYP2E1 in patients with gastric carcinoma SNP gene frequency distribution，and investigate the correlation between CYP2E1 gene SNP and environmental factors in Tibetan and Hui patients with gastric cancer at Qinghai province.Methods In the case of Tibetan and Hui nationality in Qinghai area，the subjects were randomly selected，the case control study was divided into the case group and the control group according to the random number table，each with 96 cases，Whole blood extraction genomic DNA.PCR and DHPLC were used to study the correlation between CYP2E1 SNP and gastric cancer，The difference of genotype frequency distribution between the case group and the control group was analyzed by χ2test.The high-risk factors of gastric cancer between case group and control group were investigated at the same time.Results The frequencies of the 5′-CYP2E1 gene in Tibetan case group and control group were c1/c1：80.2%，c1/c2：13.5%，c2/c2：6.3%；c1/c1：82.3%，c1/c2：15.6%，c2/c2：2.0%，respectively.(P>0.05)；The frequency distribution of the case group and the control group was 40.6%，52.1%，7.3%；71.88%，22.92%，5.2%，respectively(P<0.05).Conclusions 1.CYP2E1 gene is not a susceptible gene of gastric cancer in Qinghai Tibetan population.2.CYP2E1 gene is a susceptible gene of gastric cancer in Hui people in Qinghai.3.Age，Helicobacter pylori，dietary habits，hyperlipidemia，chronic atrophic gastritis and family history of gastric cancer are the main environmental risk factors for gastric cancer in Tibetan population in Qinghai area.4.Age，large amount of meat，Helicobacter pylori，chronic atrophic gastritis and abnormal platelet count are the main environmental risk factors for gastric cancer in Hui people in Qinghai area.

Tibetan Hui nationality Gastric cancer CYP2E1 Gene polymorphism susceptibility

*：青海大学科研项目(ASRF-2012-01)；青大附院科研项目(2012-QYY-12)；※：通信作者，教授，青海大学附属医院肿瘤内科，Email：zjh196@yeah.net 迪吉(1977～)，女，藏族，青海籍，硕士生，副主任医师

R735.2

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2017.02.007

2017-02-06