NK细胞治疗对原发性肝癌患者免疫功能及肝功能的影响

杜 波，张 鹏

NK细胞治疗对原发性肝癌患者免疫功能及肝功能的影响

杜 波，张 鹏

目的 探讨NK细胞治疗对原发性肝癌患者免疫功能及肝功能的影响。方法 选取2015年1月—2016年1月我院收治的行NK细胞治疗的原发性肝癌86例，在规范化治疗结束后行NK细胞治疗，比较治疗前后免疫功能和肝功能指标，并评估近期预后。结果 NK细胞治疗后，患者免疫功能指标CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均高于治疗前，CD8+降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；γ-谷氨酰转移酶、丙氨酸转氨酶、总胆红素、天冬氨酸转氨酶均低于治疗前，差异均有统计学意义(P<0.05)。随访9～20个月， 患者1年生存率为88.37%(76/86)。结论 NK细胞治疗可以在规范化治疗的基础上，改善原发性肝癌患者的免疫功能、肝功能及短期预后。

杀伤细胞,天然；肝肿瘤；免疫功能；肝功能

近年来，随着社会的飞速发展，环境恶化及生活方式的改变，原发性肝癌的发病率日益升高[1]。由于原发性肝癌早期发现率低，发现时患者一般已经处于中晚期[2]，此时患者免疫功能极其低下，依靠单一的治疗手段会给患者带来难以预测的不良后果[3]。近年免疫治疗成为肿瘤治疗的一种重要手段[4]。NK细胞治疗具有明显的抗肿瘤作用，能够非特异性杀伤肿瘤细胞，在临床抗肿瘤治疗中逐渐得到认可[5]。本研究对NK细胞治疗原发性肝癌患者免疫功能及肝功能的效果进行观察，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 纳入及排除标准 纳入标准：①经组织病理学检查证实为原发性肝癌[6]；②均接受过根治性手术、放疗、化疗和(或)介入等规范化治疗，且距末次规范化治疗至少2个月；③预期生存期超过3个月；④治疗前行为状态量表(KPS)评分≥60分；⑤均未合并严重的细菌、病毒感染；⑥患者及家属签署知情同意书。排除标准：①尚处在规范化治疗期内者；②妊娠期、哺乳期妇女；③合并其他恶性肿瘤或患有传染性疾病者；④对生物制剂有过敏现象者。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 研究对象 选取2015年1月—2016年1月我院符合上述纳入及排除标准的原发性肝癌86例，男73例，女13例；年龄(50.45±13.55)岁；病程(5.50±2.50)个月；TNM分期：Ⅲ B期52例，Ⅳ期34例；肝细胞癌44例，肝内胆管癌42例。

1.3 治疗方法 在末次规范化治疗结束时，采集患者抗凝全血35 ml，进行NK细胞体外培养，采用刺激活化的外周血单个核细胞进行NK细胞扩增，在第4日、第8日及第11日分别置入新鲜培养基中进行培养，并进行细菌、真菌检测，第14日可获得NK细胞，分别在第14日、第15日通过静脉回输NK细胞，回输细胞总量为(5～10)×109个，连续2次为1个疗程，共2个疗程，每个疗程治疗间隔2周。

1.4 观察指标 分别于NK细胞治疗前(末次规范化治疗结束时)、NK细胞治疗结束14 d分别抽取清晨空腹静脉血各5 ml。采用FACS Vantage(日本)流式细胞检测仪测定CD3+、CD4+、CD8+，采用美国BECKMAN COULTER (IMMAGE 800)特定蛋白仪，应用免疫散射比浊法检测免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)；采用全自动电化学发光仪(德国罗氏E170)利用酶联免疫法检测血清γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、天冬氨酸转氨酶(AST)。对患者进行电话、门诊随访，随访截止时间为2017年4月或死亡，评估短期预后。

2 结果

2.1 免疫功能指标比较 较NK细胞治疗前，治疗后免疫功能指标CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 86例原发性肝癌NK细胞治疗前后免疫功能指标比较

注：与治疗前比较，aP<0.05

2.2 肝功能指标比较 NK细胞治疗后，患者γ-GGT、ALT、TBIL、AST均低于治疗前，差异有统计学差异(P均<0.05)。见表2。

表2 86例原发性肝癌患者NK细胞治疗前后肝功能指标比较

注：γ-GGT为γ-谷氨酰转移酶，ALT为丙氨酸转氨酶，TBIL为总胆红素，AST为天冬氨酸转氨酶；与治疗前比较，aP<0.05

2.3 近期预后 NK细胞治疗后，3例出现39℃以上的高热，经对症治疗，8 h内体温均恢复正常。所有患者均完成足疗程NK细胞治疗，无因不良反应而终止治疗者。随访9～20个月，中位随访时间为15个月，患者1年生存率为88.37%(76/86)。

3 讨论

NK细胞具有抗肿瘤的作用，对肝癌患者进行NK细胞治疗，即向其体内进行NK细胞回输，不仅不会损伤机体正常的免疫功能，而且在杀伤恶性肿瘤细胞的基础上，还可以提高机体的免疫功能，从而增强患者手术、放疗及化疗疗效，减轻放疗及化疗不良反应，改善患者生活质量，延长生存时间[7-9]。

免疫功能降低是恶性肿瘤存在和发展的一个重要原因，而淋巴细胞浸润、免疫球蛋白升高是肝癌患者预后较好的重要标志。T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白均是机体免疫系统的重要组成部分[10-12]，前者可反映机体的免疫调节功能，后者发挥对致病病原体的识别、清除作用，从而维护机体正常的生理功能[13]。本研究对86例原发性肝癌NK细胞治疗前后免疫功能指标进行比较，结果发现CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，与Adair等[14]的研究结果一致，提示NK细胞治疗可以显著改善肝癌患者的免疫功能。

γ-GGT、ALT、TBIL、AST均是反映肝脏功能的重要指标[15]。肝癌患者多数合并不同程度的肝硬化，而且由于恶性肿瘤对肝脏组织的破坏，手术、放疗及化疗等规范化治疗均会导致肝功能异常[16]。本研究观察原发性肝癌患者NK细胞治疗前后肝功能指标的变化，结果发现治疗后γ-GGT、ALT、TBIL、AST均较治疗前降低，提示NK细胞治疗能够显著改善肝癌患者的肝脏功能。

综上所述，NK细胞治疗可以显著改善原发性肝癌患者的免疫功能、肝功能及近期预后。

[1] 陆检英,刘群,翟笑枫,等.TACE术治疗肝癌患者随访研究[J].实用肝脏病杂志,2016(1):96-97.

[2] Young J K, Seong J J, Jae B H,etal. Motion and volume change of tumor tissue depending on patient position in liver cancer treatment with use of tomotherapy[J].Annals of nuclear energy, 2014,65(1):174-180.

[3] Darvish-Molla S, Al-Ebraheem A, Farquharson M J,etal. The identification and differentiation of secondary colorectal cancer in human liver tissue using X-ray fluorescence, coherent scatter spectroscopy, and multivariate analysis[J].Appl Spectrosc, 2014,68(1):79-87.

[4] Carla C G, Mauricio M, Jose R M,etal. Monte Carlo simulation of liver cancer treatment with ～(166)Ho-loaded glass microspheres[J].Radiation Physics and Chemistry, 2014,95(2):185-187.

[5] Sadegh L, Chen P W, Brown J R,etal. NKT cells act through third party bone marrow-derived cells to suppress NK cell activity in the liver and exacerbate hepatic melanoma metastases[J].Int J Cancer, 2015,137(5):1085-1094.

[6] 丛文铭.肝癌分子病理诊断进展概述[C].//第十三届全国肝癌学术会议论文集，2011:81-82.

[7] Kee J Y, Ito A, Hojo S,etal. Chemokine CXCL16 suppresses liver metastasis of colorectal cancer via augmentation of tumor-infiltrating natural killer T cells in a murine model[J].Oncol Rep, 2013,29(3):975-982.

[8] Nishida S, Levi D M, Tzakis A G,etal. Liver natural killer cell inoculum for liver transplantation with hepatocellular carcinoma[J].Curr Opin Organ Transplant, 2013,18(6):690-694.

[9] Wang H, Yin S. Natural killer T cells in liver injury, inflammation and cancer[J].Expert Rev Gastroenterol Hepatol, 2015,9(8):1077-1085.

[10]Tahiri F, Li Y, Hawke D,etal. Lack of iGb3 and Isoglobo-Series Glycosphingolipids in Pig Organs Used for Xenotransplantation: Implications for Natural Killer T-Cell Biology[J].J Carbohydr Chem, 2013,32(1):44-67.

[11]Tak Y K, Song J M. Early stage high-content HIV diagnosis based on concurrent monitoring of actin cytoskeleton, CD3, CD4, and CD8[J].Anal Chem, 2013,85(9):4273-4278.

[12]Longet S, Miled S, Lotscher M，etal. Human plasma-derived polymeric IgA and IgM antibodies associate with secretory component to yield biologically active secretory-like antibodies[J].J Biol Chem, 2013,288(6):4085-4094.

[13]Wu Y W, Champagne J, Toueille M,etal. Dedicated removal of immunoglobulin (Ig)A, IgM, and Factor (F)XI/activated FXI from human plasma IgG[J].Transfusion, 2014,54(1):169-178.

[14]Adair R A, Scott K J, Fraser S,etal. Cytotoxic and immune-mediated killing of human colorectal cancer by reovirus-loaded blood and liver mononuclear cells[J].Int J Cancer, 2013,132(10):2327-2338.

[15]Karasaki T, Sano K, Takamoto T,etal. Complete resection of unresectable liver metastases from colorectal cancer without deterioration of liver function after cetuximab and irinotecan: two case reports[J].Hepatogastroenterology, 2010,57(104):1526-1528.

[16]Singh T D, Barbhuiya M A, Poojary S,etal. The liver function test enzymes and glucose level are positively correlated in gallbladder cancer: a cancer registry data analysis from north central India[J].Indian J Cancer, 2012,49(1):125-136.

Effects of NK Cell Therapy on Immune Function and Liver Function of Patients with Primary Liver Cancer

DU Bo, ZHANG Peng

(Department of Hepatobiliary Surgery, People's Hospital of Kaizhou District of Chongqing, Chongqing 405400, China)

Objective To investigate effects of nature killer (NK) cell therapy on immune function and liver function of patients with primary liver cancer. Methods A total of 86 patients with primary liver cancer undergoing NK cell therapy during January 2015 and January 2016 were recruited in this study. All patients underwent NK cell therapy after standardized treatment. Immune function and liver function before and after treatment were compared, and short-term prognosis was evaluated. Results After NK cell therapy, immune function indexes such as CD3+, CD4+, IgG, IgM and IgA levels were significantly higher than those before treatment (P<0.05), while CD8 level was significantly lower than that that before treatment (P<0.05); liver function indexes such as γ-glutamyl transferase (γ-GT), alanine transarninase (ALT), total bilirubin (TBIL) and aspartate transaminase (AST) were significantly lower than those before treatment (P<0.05). The 1 year survival rate was 88.37% (76/86) with 9-20 months of follow-up. Conclusion On the basis of standardized treatment, NK cell therapy can improve immune function, liver function and short-term prognosis of patients with primary liver cancer.

Killer cells, natural; Liver neoplasms; Immune function; Liver function

重庆市卫生局基金资助项目(2015-981)

405400 重庆，重庆市开州区人民医院肝胆外科

张鹏，E-mail:zhangpeng33877123@163.com

R392.12；R735.7

A

1002-3429(2017)07-0088-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.07.027

2017-04-13 修回时间：2017-05-10)