老年复发性阿弗他溃疡患者唾液和血清中硫氰酸盐离子浓度的研究

郝文君 张子川 李岩峰 王 欣

老年复发性阿弗他溃疡患者唾液和血清中硫氰酸盐离子浓度的研究

郝文君 张子川 李岩峰 王 欣

目的：探讨硫氰酸盐离子(SCN-)与复发性阿弗他溃疡发病机制间可能存在的关系。方法：随机选取60名(男28，女32)确诊为轻型复发性阿弗他溃疡的老年患者和同期来我院体检的60名(男性30名，女性30名)同龄的健康人为研究对象。分别在患者发病期(A1组)和无症状期(A2组)收集5m l空腹静脉血和3m l非刺激性唾液，以健康人为对照组(B组)。采用吡啶-巴比妥酸分光光度法检测SCN-浓度。结果：A1、A2组唾液SCN-浓度分别为0.61±0.29mmol/L、0.64±0.31mmol/L，组间无统计学差异(P=0.052>0.05)。而A2组SCN-血清浓度(24.06±10.31μmol/L)显著高于A1组(20.39±8.85μmol/L;P=0.000<0.05)。B组的唾液和血清SCN-浓度分别为1.05±0.61mmol/L、36.60±14.81μmol/L，均显著高于A1、A2组(P=0.000<0.05)。结论：作为一种机体非酶类抗氧化剂，SCN-可能与复发性阿弗他溃疡存在着某种相关性。

复发性阿弗他溃疡；硫氰酸盐离子；氧化应激；分光光度法；老年

复发性阿弗他溃疡(Recurrent aph thous ulcer, RAU)是一种临床常见病因不明的口腔黏膜炎症性疾病。其典型的临床表现为溃疡边界清晰，形态为圆形或卵圆形，周围粘膜充血呈红晕状，患者常有烧灼痛感觉，周期性发作，具有自愈性[1]。流行病学调查显示在60岁以上的老年人群中，RAU患病率高达25%-30%，本病的确切病因至今尚不清楚，近年来有报道提出，影响发病的因素有：病毒或细菌感染、免疫功能异常、胃肠功能失调、内分泌因素、口腔局部损伤、精神因素、微量元素缺乏等[2]。

有研究显示，吸烟有利于预防RAU，降低RAU的发生率，但其作用机制尚存有争议[3]。烟草中含有氢氰酸，吸入体内后，经肝脏代谢生成硫氰化合物，广泛分布于脑脊液、血液、唾液、胃液、泪液及尿液中。故而，吸烟者体内的硫氰酸盐离子(Thiocyanate,SCN-)浓度要显著高于不吸烟者[4]。本研究通过测定老年RAU患者发病期与无症状期时唾液和血清SCN-浓度，并与同龄健康人群的SCN-进行比较，旨在探讨SCN-与RAU发病机制间可能存在的关系，为预防和治疗RAU提供理论依据。

1.资料与方法

1.1 研究对象 选取2016年3月至2017年2月来我科就诊的患有轻型复发性阿弗他溃疡的老年患者60名，其中男性28名，女性32名，年龄61岁-68岁，平均65.38±4.13岁，所有患者均由同一名口腔黏膜病专业的主治医师确诊。以同期来我院体检的同龄健康人60名，(男性30名，女性30名)为对照组，年龄62岁-69岁，平均66.35± 4.44岁。两组人群具有相似的年龄，性别构成，经济条件和社会地位。纳入标准：①血常规、血压、血糖、肝功能、肾功能均无明显异常。②无酗酒、吸烟、吸毒者。③女性受试者均绝经。④无急性炎症、肝肾疾病、心血管系统疾病、消化系统疾病、血液系统疾病、呼吸系统疾病、内分泌系统疾病。⑤无天疱疮、白塞病、红斑狼疮、风湿性关节炎等免疫系统疾病。⑥无白斑、红斑、疱疹性咽峡炎、单纯疱疹病毒感染、手足口病、扁平苔癣等口腔黏膜疾病。⑦3个月内未服用维生素类、甾类化合物、免疫调节类等药物。⑧患者无明显原因的口腔溃疡年发病次数为3-12次。本研究获得白求恩国际和平医院临床研究医学伦理委员会批准(批准号：2015-12-8号)，所有受试者均签署了临床科研知情同意书。

1.2 研究方法 所有受试者禁食10-12小时，未吸烟、未刷牙、未喝水及任何可食性液体。收集无刺激性唾液前，先用无菌蒸馏水漱口，静坐5m in后，由受试者自行向无菌试管内吐唾液3m l，2-3次/m in；由相同的护士抽取受试者空腹肘前静脉血5m l。室温4℃条件下，分别对唾液和静脉血进行离心处理，3000r/m in离心10m in，取上层清液(或血清)置于-40℃冰箱保存。所有操作均在上午7-9点完成。

采用吡啶-巴比妥酸分光光度法[5]测定唾液和血清中SCN-浓度。其原理为：SCN-与氯胺丁反应生成氯化氰，致使吡啶环裂开,生成戊烯二醛。而戊烯二醛与巴比妥酸反应,可生成紫红色染料,其色度值与SCN-浓度成正比。室温环境下，在波长为580nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，测定吸光度值。实验分组如下：发病期的M iRAU患者为实验1组(A1组)；无症状期的同批M iRAU患者为实验2组(A2组)；无M iRAU的健康人为对照组(B组)。

1.3 统计学分析 采用SPSS19.0统计软件进行数据处理。计量资料均以均数±标准差(x±s )表示，组间比较采用独立样本t检验和配对t检验；计数资料采用χ2检验。检验水准为双侧α=0.05。

2.结果

两组受试者的一般临床资料见表1。A组和B组的性别及年龄均无统计学差异(P>0.05)；图1、图2分别为A1组、A2组和B组的唾液和血清SCN-浓度。其中，A1组唾液SCN-浓度为0.61± 0.29mmol/L，与 A2组(0.64±0.31mmol/L)相比，无统计学差异(P=0.052>0.05)。但均显著低于B组唾液SCN-浓度(1.05±0.61mmol/L;P= 0.000<0.05)。A1、A2、B组的血清SCN-浓度分别为20.39±8.85μmol/L、24.06±10.31μmol/L、36.60±14.81μmol/L，组间差异显著(P=0.000< 0.05)。

表1 A、B组受试人群的一般临床资料

3.讨论

复发性阿弗他溃疡是一种临床常见的口腔黏膜疾病，好发于唇、颊、舌等部位，牙龈及硬腭少见。多年来，国内外的学者们进行了大量的实验研究，但仍未能明确其发病机制[2]。目前临床医师只能依据患者口腔溃疡的临床表现实施对症治疗[6]。

图1 A1、A2、B组的唾液SCN-浓度(**表示组间差异显著)

图2 A1、A2、B组的血清SCN-浓度(**表示组间差异显著)

临床流行病学研究显示，吸烟者患复发性阿弗他溃疡的机率显著低于非吸烟者[7]，且吸烟者戒烟后RAU的患病机率明显增加[8]。而Saw air[3]等对1000名在校大学生问卷调查的结果却显示，吸烟者和非吸烟者RAU患病率无统计学差异，但是吸烟量大、吸烟时间长的学生其RAU患病率显著小于吸烟量小、吸烟时间短的人群。也就是说，吸烟预防RAU是具有剂量和时间依赖性的。但是当口腔内出现溃疡后，吸烟对RAU临床症状的严重程度无明显影响。

氧化应激(Oxidativestress;OS)是指机体受到多种因素刺激后，导致体内活性氧(Reactive oxygen species;ROS)增多，抗氧化能力降低，打破了机体正常的氧化还原动态平衡，造成蛋白质、脂质、核酸等生物大分子的氧化损伤，而形成的一种严重的应激状态[9]。ROS是机体内最常见的自由基，已有研究证明ROS是癌症、心血管疾病、免疫系统疾病等多种慢性疾病发病机制的关键因素。Gurel等[10]认为，ROS增多所导致的氧化应激反应与复发性阿弗他溃疡具有一定的相关性。

硫氰酸盐离子(SCN-)作为一种抗氧化剂已被认为在心血管方面具有十分重要的意义[11]。近年来，人们对参与机体氧化应激反应的酶类物质(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、髓过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶等)和非酶类物质(尿素、维生素A、维生素C、锌离子、硒离子、铜离子等)与RAU相关性的研究较多[12-14]，但是SCN-在RAU发病机制中的作用目前研究很少，且国内尚无相关报道。唾液中的SCN-与血液中的SCN-可在过氧化物酶(CAT)或髓过氧化物酶(MPO)的催化作用下形成OSCN-，从而减小了过氧化氢(H2O2)对机体的损害，降低了宿主体内的ROS[15,16]。有研究显示[17]，OSCN-具有改变还原型和氧化型谷胱甘肽比率(GSH/GSSG)的作用，而该比率是反应机体氧化应激状态的重要指标。

本研究中，老年RAU患者发病期和无症状期时唾液中的SCN-浓度分别为0.61±0.29mmol/L和 0.64±0.31mmol/L，两者间无统计学差异(P>0.05)，这与Cherubini等[15]的研究结果相似。本研究所测定的健康人群唾液中SCN-浓度为1.05±0.61mmol/L，虽略大于Cherubini测得的结果(0.96±0.77mmol/L)，但与Glatz等[18]的研究结果相似，这可能与所选受试人群的种族、年龄、性别构成及研究方法不同有关。

本研究不仅对唾液SCN-浓度进行了研究，还比较分析了各组受试者的SCN-血清浓度。结果显示，老年RAU患者发病期的SCN-血清浓度显著低于无症状期(P<0.05)；同龄健康人的SCN-血清浓度为36.60±14.81μm ol/L，低于以往研究的结果[19]。Assaf[20]等测得的不吸烟的健康男性SCN-血清浓度为60.6μmol/L，不吸烟的健康女性为43.0μmol/L，且女性SCN-血清浓度显著低于男性。而本研究中女性受试者多于男性，这也可能是本研究所得结果小于以往研究结果的原因。

尽管Saw air[3]认为，吸烟对RAU的预防效果是由于①粘膜的角化程度增加，角质蛋白层增厚，对外界的物理和化学刺激抵抗力增强。②尼古丁可诱导肾上腺类固醇激素增多，减少TNF-α、IL-1、IL-6，从而影响机体的炎症性免疫应答。但是本研究的结果显示SCN-水平与RAU是存在一定相关性的，这也可能是吸烟降低RAU发病机率的一个重要因素。

机体获取SCN-的途径包括吸烟和食物，大白菜、萝卜等根茎类蔬菜为其主要来源。故而，作者认为适量的食用该类蔬菜，提高机体的SCN-血清浓度，可能会减少RAU的发病机率，有助于RAU的预防和治疗。

[1] Cui RZ,Bruce A J,Rog ers RS 3rd.Recurrent aph thous stomatitis[J].Clin Derm atol,2016,34(4):475-481

[2] Chavan M,Jain H,Diw an N,et al.Recurrent aph thous stom atitis:a review[J].J Oral Pathol Med,2012,41(8):577-583

[3] Saw air FA.Does smoking really protect from recurrent aphthous stomatitis[J]?Ther Clin Risk Manag,2010,6:573-577 [4] Morabia A,Bernstein MS,Curtin F,et al.Validation of self-reported sm oking status by simu ltaneous measurem ent of carbon monox ide and salivary thiocyanate[J].Prev Med, 2001,32(1):82-88

[5] 桂国友.血中硫氰酸盐测定—吡啶、巴比妥酸分光光度法[J].安徽预防医学杂志,1999,5(4):406-407

[6] A ltenburg A,Zoubou lis CC.Current concepts in the treatm ent of recurrent aph thous stom atitis[J].Skin Therapy Lett, 2008,13(7):1-4

[7]Rivera-H idalgo F,Shu lm an JD,Beach MM.The association of tobacco and other factors w ith recurrent aph thous stomatitis in an US adult population[J].Oral Dis,2004,10(6): 335-345

[8] Marakog姚lu K,Sezer RE,Toker HC,et al.The recurrent aphthous stomatitis frequency in the smoking cessation peop le[J].Clin Oral Investig,2007,11(2):149-153

[9] Tugru l S,Kocy ig姚it A,Dog姚an R,et al.Total antiox idant status and ox idative stress in recurrent aph thous stom atitis [J].Int J Dermatol,2016,55(3):e130-e135

[10]Gurel A,A ltinyazar HC,Unalacak M,et al.Purine catabolic enzymes and nitric oxide in patients w ith recurrent aph thous ulceration[J].Oral Dis,2007,13(6):570-574

[11]Talib J,Pattison DI,Harm er JA,et al.H igh plasma th iocyanate levelsm odu lateprotein dam age induced by myeloperox idase and perturb m easurement of 3-ch loroty rosine[J]. Free Radic Biol Med,2012,53(1):20-29

[12]Gupta I,Shetti A,Keluskar V,et al.Assessment of serum enzymatic antiox idant levels in Patients w ith recurrent aph thous stomatitis:a case control study[J].Enzyme Res,2014, 2014:340819

[13]Ozturk P,Belge Kurutas E,A taseven A.Copper/zinc and copper/selenium ratios,and oxidative stress as biochem ical markers in recurrent aph thous stomatitis[J].J Trace Elem Med Biol,2013,27(4):312-316

[14]Khadem i H,Khozeimeh F,Tavangar A,et al.The serum and salivary level of m alondialdehyde,vitam ins A,E,C in patient w ith recurrent aph thous stom atitis[J].Adv Biomed Res,2014,3:246

[15]Cherubini K,Lorandi CS,K rapf SM,et al.Association betw een recurrent aph thous stomatitis and salivary thiocyanate levels[J].J Oral Sci,2006,48(3):153-156

[16]Morgan PE,Pattison DI,Talib J,et al.H igh plasma thiocyanate levels in smokers are a key determ inant of thiol oxidation induced by m yeloperox idase[J].Free Radic Biol Med, 2011,51(9):1815-1822

[17]Skaff O,Pattison DI,Davies M J.Hypoth iocyanous acid reactivity w ith low-molecu lar-mass and protein thiols:absolute rate constants and assessment of biological relevance[J]. Biochem J,2009,422(1):111-117

[18]Glatz Z,Nováková S,Sterbová H.Analysis of thiocyanate in biological fluids by capillary zone electrophoresis[J].J Ch romatogr A,2001,916(1-2):273-277

[19]Scherer G.Carboxyhemog lobin and thiocyanate as biom arkers of exposure to carbon monoxide and hydrogen cyanide in tobacco sm oke[J].Exp Toxicol Pathol,2006,58(2-3):101-124

[20]Assaf AR,Parker D,Lapane KL,et al.A re there gender differences in self-reported sm oking practices?Correlation w ith thiocyanate and cotinine levels in sm okers and nonsm okers from the Paw tucket Heart Health Program[J].J W omens Health(Larchm t),2002,11(10):899-906

A study of the concentrations of salivary and serum thiocyanate in elderly patients w ith recurrent aphthous ulcer

HAO Wen-jun,ZHANG Zi-chuan,LI Yan-feng,WANG Xin
(Department of Stomatology,First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective:The aim of this study was to investigate the possible relationship between thiocyanate(SCN-)and the pathogenesis of recurrent aphthous ulcer(RAU).M ethods:Sixty elderly patients(28 males,32 females)having been diagnosed with minor recurrent aphthous ulcer(M iRAU)and sixty age-matched healthy persons(30 males,30 females) being taken normal medical examination in our hospital were enrolled.After an overnight fast,5 m l venous blood and 3m l of unstimulated saliva samples were obtained from the patients w ith current active lesion of RAU(Group A1),the same patients in the rem ission phase of RAU(Group A2),healthy persons(Group B),respectively.The concentrations of saliva and serum SCN-were measured by the spectrophotometric method.Results:A1,A2group saliva SCN-concentration were 00.61±0.29mmol/L、0.64±0.31mmol/L,and there was no significant difference between the groups(P=0.052＞0.05). The serum thiocyanate concentration of group A2(24.06±10.31μmol/L)was significantly higher than that of group A1(20.39±8.85μmol/L;P=0.000＜0.05).The concentrations of salivary and serum thiocyanate of group B were 1.05± 0.61mmol/L、36.60±14.81μmol/L,which were significantly higher than those values of group A1and group A2(P=0.000＜0.05).Conclusion:As a kind of nonenzymatic antioxidant,SCN-may have some relevance to recurrent aphthous ulcer.

recurrent aphthous ulcer;thiocyanate;oxidative stress;spectrophotometric method;elderly

R781.5

A

1672-2973(2017)03-0149-04

2017-01-25)

郝文君 解放军总医院第一附属医院口腔科 硕士生北京 100048解放军政治工作部黄寺第一干休所 主治医师北京 100120

张子川 解放军白求恩国际和平医院口腔科 主治医师石家庄 050082

李岩峰 通讯作者 解放军总医院第一附属医院口腔科主任医师 教授 北京 100048

王 欣 解放军总医院第一附属医院口腔科 硕士生北京 100048