高效液相法测定黄柏中小檗碱的含量

陈娇娇，周 彤

(天津工业大学环境与化学工程学院，天津 300387)

高效液相法测定黄柏中小檗碱的含量

陈娇娇，周 彤

(天津工业大学环境与化学工程学院，天津 300387)

建立了黄柏中小檗碱含量测定方法。采用高效液相色谱的方法测定黄柏中小檗碱的含量。色谱条件：Inertisl© ODS-3色谱柱(250mm×4.60mm，5μm)；流动相为乙腈：0.10%磷酸=1:1，流速为0.80mL/min，检测波长为265nm，柱温为30℃；小檗碱的线性范围为1.06μg～11.60μg，其线性曲线为S=4.99×106Q+7.99×105(R2=0.9999)，平均加样回收率为98.77%，RSD值为3.87%。该含量方法具有简便、稳定、可重复的特点。

黄柏 小檗碱 HPLC 含量测定

0 引言

黄柏又被称为檗木、檗皮、黄檗，其化学成分种类繁多，最早在20世纪20年代中期日本学者村山义温等从产自日本的黄檗中得到小檗碱以及少量巴马亭[1]。黄柏中主要含有生物碱类化合物、柠檬苷素类化合物、甾醇类化合物、酯类化合物、黄酮类化合物、萜类化合物等[2-3]。

黄柏的主要有效成分为小檗碱，它属于生物碱类化合物，具有抗菌[4]、抗炎[3]、抗肿瘤[4]、免疫抑制[4]等药理作用。根据文献报道，王进等[5]利用薄层色谱法对小檗碱的含量进行测定，但是，在实验过程中，所用展开剂多为易挥发溶剂，并且测定时点样量的差异等问题都会使该方法的准确度降低。龙小华等[6]利用比色法测定复方苦参洗剂中小檗碱的含量，但是比色法适用于测定某一类化合物的含量，对于某一确定物质的含量测定的准确度不是很高。根据文献报道，现在多用HPLC法测定其含量，它具有分离效果好、准确性高、可重复的特点[7]。

本课题采用HPLC的方法，建立了黄柏中小檗碱的含量测定方法，为以后黄柏的质量控制提供了一种参考方法。

1 实验部分

1.1 仪器及材料

仪器：TD-5102B电子天平，天津天马衡基仪器有限公司；FA电子分析天平，上海佑科仪器仪表有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵，天津星科仪器有限公司；RE-2000B旋转蒸发器，巩义市予华仪器有限责任公司；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，郑州长城科工贸有限公司；KQ-3200B超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；e2695液相色谱仪，沃特世科技有限公司。

材料：盐酸小檗碱，成都普思生物科技有限公司；黄柏，购自药店；乙腈(色谱纯)，天津市富宇精细化工有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.2 黄柏有效成分的提取

称取黄柏粗粉5g，加入70%乙醇50mL，提取1h，提取3次，过滤，收集滤液，旋蒸，称重，收集黄柏提取物。

1.3 黄柏有效成分含量测定方法的建立[8-11]

1.3.1 对照品溶液的配制

精密称定5.30mg盐酸小檗碱对照品置于10mL容量瓶中，用甲醇定容到10mL，摇匀，得0.53mg/mL对照品溶液，用0.22μm的膜过滤，滤液作为对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的配制

称取黄柏提取物约0.25g，其质量精确到小数点后第三位，置于10mL容量瓶中，加适量甲醇：盐酸(0.60mol/L)=100:1溶液，超声溶解30min，冷却，用甲醇盐酸液定容至刻度，摇匀，用0.22μm的膜过滤，滤液作为供试品溶液。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：Inertisl© ODS-3柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈：0.10%磷酸溶液(每100mL0.10%磷酸溶液中加入0.10g十二烷基磺酸钠)=1:1；柱温：30℃；流速：0.80mL/min；测定波长：265nm；进样量：5μL。

1.3.4 线性关系

移取已经配制好的0.53mg/mL对照品溶液1mL，分别吸取2μL、4μL、8μL、12μL、16μL、20μL注入液相色谱中，测定色谱峰面积，求算线性回归方程。

1.3.5 精密度

分别吸取5μL的对照品溶液，重复进样6次，依法测定，计算其RSD值。

1.3.6 重复性

精密称取同一批样品6份，按供试品溶液的处理方法对样品进行处理，依法测定，计算其RSD值。

1.3.7 稳定性

精密吸取样品溶液5μL，于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h分别进样，依法测定，计算其RSD值。

1.3.8 加样回收率

精密称取已知样品含量的样品6份，分别加入一定量的盐酸小檗碱对照品溶液，按供试品溶液处理上述样品，测定，并根据样品含量及盐酸小檗碱对照品加入量，计算回收率及其RSD值。

1.3.9 样品测定

精密称取黄柏样品0.05g，依照供试品溶液的处理方法对样品进行处理，平行试验3次，并依法测定其含量。

2 结果与讨论

2.1 对照品与样品液相色谱图

图1分别为小檗碱和黄柏提取物的的高效液相色谱图，从图中我们可以看出小檗碱在9min时出现色谱峰，同时，我们也可以看到黄柏提取物样品在9min时出现对应的色谱峰，并且与其他组分分离良好。

图1 小檗碱和黄柏提取物的液相色谱图

2.2 小檗碱线性关系曲线

上述不同进样量的对照品线性关系如图2所示，其线性方程为S=4.99×106Q+7.99×105，R2=0.9999，说明其线性关系良好。

图2 小檗碱线性关系

2.3 小檗碱精密度

用浓度为0.53mg/mL对照品溶液连续六次进样依法测定，其峰面积如表1所示，其RSD值为0.20%<5%，说明此方法的精密度良好。

表1 小檗碱的精密度

2.4 小檗碱稳定性

用一定浓度的样品溶液在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h分别依法测定，其峰面积如表2所示，其RSD值为0.14%<5%，说明其稳定性良好。

2.5 小檗碱重复性

取6份同一批样品约0.05g，依法进行测定，其峰面积如表3所示，其RSD值为1.80%<5%，说明方法的重复性良好。

表3 盐酸小檗碱的重复性

2.6 小檗碱加样回收率

取同一批样品约0.05g，加入一定量的盐酸小檗碱(0.27mg)，测定其加样回收率，其平均加样回收率如表4所示，其RSD值为3.87%<5%，结果表明该方法具有较好的回收率。

表4 盐酸小檗碱的加样回收率

2.7 黄柏提取物含量测定

对上述黄柏样品进行含量测定，根据测定出的峰面积计算小檗碱的含量，其计算结果如表5所示，其3批样品的RSD值为4.90%，同时，这也说明了本实验选取的提取工艺具有较好的稳定性。

表5 黄柏的含量测定

3 结论

(1)建立了黄柏中小檗碱的含量测定方法，其线性方程为S=4.99×106Q+7.99×105，R2=0.9999；用浓度为0.53mg/mL对照品溶液连续六次进样依法测定，其RSD值为0.20%，说明此方法的精密度良好；用一定浓度的样品溶液在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h分别依法测定，其RSD值为0.14%，说明盐酸小檗碱在12h内的稳定性良好；取6份同一批样品约0.05g，依法进行测定，其RSD值为1.80%<5%，说明方法的重复性良好；取同一批样品约0.05g，加入一定量的盐酸小檗碱(0.27mg)，测定其加样回收率，平均加样回收率为98.77%，其RSD值为3.87%，结果表明该方法具有较好的回收率。综上所述，说明该含量测定方法具有可靠性和可重复性，其稳定性较高。

(2)我们在建立黄柏中小檗碱含量测定方法的同时，对本实验选取的黄柏提取工艺的稳定性进行了考察，经过计算本实验得到的黄柏提取物中小檗碱的含量约为3.84%，其RSD值为4.90%，这表明该提取方法具有较好的稳定性。

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[5] 王进，佟智. 薄层色谱法测定香连丸中盐酸小檗碱含量研究[J]. 亚太传统医药，2013，9(1)：28-29.

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Determination of Berberine Content in Cortex Phellodendri by High Performance Liquid Chromatography

CHENJiao-jiao,ZHOUTong

(School of Environmental and Chemical Engineering, Tianjin Polytechnic University, Tianjin 300387)

In order to establish a method to determine berberine content in cortex phellodendri, high performance liquid chromatography (HPLC) was adopted to determine the berberine content in cortex phellodendri. The chromatographic conditions were listed as followed: Inertisl© ODS-3 column (250mm×4.60mm, 5μm), the mobile phase acetonitrile: 0.10% phosphoric=1:1, flow rate 0.80mL/min, detection wave length 265nm for berberline and column temperature 30℃. The results showed that the linear range of berberline was 1.16μg～11.60μg and the linear curve was S=4.99×106Q+7.99×105(R2=0.9999). The average recovery rate of the method was 98.77%, RSD was 3.87%. The conclusion was that this method was simple, stable and repeatable.

cortex phellodendri berberine HPLC content determination

2017-01-21

陈娇娇(1977-)，女，博士，副教授，硕士生导师。

R917

A

1008-5580(2017)03-0151-04