高效毛细管电泳法测定阿齐沙坦含量

李 欢， 刘芷含， 关 瑾， 阎 峰， 石 爽， 王思林

(沈阳化工大学 应用化学学院， 辽宁 沈阳 110142)

高效毛细管电泳法测定阿齐沙坦含量

李 欢， 刘芷含， 关 瑾， 阎 峰， 石 爽， 王思林

(沈阳化工大学 应用化学学院， 辽宁 沈阳 110142)

采用高效毛细管电泳法测定阿齐沙坦的含量.在背景电解质为10 mmol/L 磷酸氢二钾-10 mmol/L四硼酸钠(pH=6.5)、分离电压为28 kV的条件下，阿齐沙坦分析时间小于4 min.阿齐沙坦质量浓度在2～100 mg/L内线性关系良好；方法的检测限和定量限分别为0.6 mg/L和2.0 mg/L；加标回收率为 100.0 %～101.5 %，相对标准偏差为0.25 %～0.75 %.该方法简便快捷，为阿齐沙坦的定量分析提供了可靠方法.

阿齐沙坦； 毛细管电泳法； 检测

阿齐沙坦(Azilsartan)化学名为1-[[2′-(4,5-二氢-5-氧代-1,2,4-噁二唑-3-基)[1,1′-联苯基]-4-基]甲基]-2-乙氧基-1H-苯并咪唑-7-羧酸，是由日本武田公司研发的血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂[1]，于2012年1月18日在日本批准上市，用于高血压的治疗，化学结构式见图1.毛细管电泳是20世纪80年代后期在全世界范围内迅速发展起来的一种分离分析技术，它具有高效、快速、微量的特点[2]，是一种绿色的分析方法，该方法广泛用于药物的含量分析[3-6].目前，国内外没有分析阿齐沙坦原料药含量的报道.本文首次采用高效毛细管电泳紫外检测法分析阿齐沙坦含量，对方法的有效性进行了验证并应用于实际样品的分析.

图1 阿齐沙坦化学结构式

1 仪器与试剂

高效毛细管电泳仪，配有HV-301高压电源，UV-K-2501型紫外检测器，北京彩陆科学仪器有限公司；熔融石英毛细管，50 μm I.D.，河北永年锐沣色谱器件有限公司.

阿齐沙坦标准品，质量分数≥99 %，厂家提供；阿齐沙坦原料药样品，本实验室自制；水为二次蒸馏水，其它试剂为分析纯.

2 方法与结果

2.1 毛细管电泳条件

毛细管，有效长度45 cm，内径50 μm；分离电压为28 kV；检测波长250 nm；背景电解质为10 mmol/L 四硼酸钠-10 mmol/L 磷酸氢二钾(pH=6.5).使用前毛细管柱依次用0.1 mol/L 氢氧化钠冲洗10 min，二次蒸馏水冲洗10 min，背景电解质冲洗10 min后进样；两次进样之间用背景电解质冲洗3 min；采用虹吸进样，进样高度差10 cm，进样时间20 s；背景缓冲溶液和样品溶液在使用前均经0.45 μm微孔滤膜过滤.

2.2 溶液配置

取阿齐沙坦标准品适量，精密称量，用乙腈溶液定容，配置成1 g/L储备液；根据需要用乙腈将其逐级稀释，配置成50 mg/L的工作溶液及适当质量浓度的系列标准溶液.

2.3 毛细管电泳条件优化

实验分别考察了背景电解质含有5～50 mmol/L硼酸盐、磷酸盐以及醋酸盐溶液和5～30 kV分离电压对分析结果的影响.随着分离电压的增大，电渗流增大，阿齐沙坦的迁移时间缩短；同时导致焦耳热增大，色普峰展宽.最终确定缓冲液为10 mmol/L四硼酸钠-10 mmol/L磷酸氢二钾(pH=6.5)，分离电压为28 kV，在此条件下阿齐沙坦保留时间在4 min内且峰形较好，可以满足快速测定其含量的分析要求，阿齐沙坦分析电泳图见图2.

图2 阿齐沙坦的毛细管电泳图

2.4 标准曲线

分别精密量取0.02 、0.25、0.5、0.75、1.0 mL储备液置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容，摇匀，配制成阿齐沙坦质量浓度为2、25、50、75、100 mg/L的溶液，分别进样20 s，记录峰面积，以峰面积(A)对质量浓度(ρ)线性回归，阿齐沙坦回归方程为：A=588.87ρ+4 091(R2=0.999 2).结果表明阿齐沙坦质量浓度在2～100 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系.

2.5 方法的检出限及定量限

用乙腈将储备液进行一系列稀释，分别进样20 s，测定.按信噪比(S/N)为3∶1，测得阿齐沙坦的检出限为0.6 mg/L，按信噪比(S/N)为10∶1，测得阿齐沙坦的定量限为2.0 mg/L.

2.6 方法的精密度

制备50 mg/L阿齐沙坦供试液6份，按前面2.1节的电泳条件进样，记录峰面积和保留时间，计算峰面积和保留时间的RSD分别为 0.95 %和0.50 %，表明方法的精密度良好.

2.7 方法的准确度

制备25 mg/L阿齐沙坦原料药9份，分别加入质量浓度为20、25、30 mg/L的阿齐沙坦标准品各3份，计算回收率.回收率为100.0 %～101.5 %，相对标准偏差为0.25 %～0.75 %.

2.8 溶液稳定性实验

取50 mg/L阿齐沙坦供试液，避光，放置在4 ℃的冰箱里，分别在0、1、2、4、6、8 h按2.1节的电泳条件进样，计算峰面积RSD为0.95 %，表明样品溶液避光并在4 ℃的冰箱里放置8 h稳定.

2.9 实际样品分析

利用新建立的方法测定了本实验室自制的阿齐沙坦原料药样品3批，结果见表1，样品中阿齐沙坦的质量分数为98.0 %～100.2 %.

表1 阿齐沙坦实际样品含量测定结果(n=3)

3 结 论

建立了阿齐沙坦的高效毛细管电泳分析方法.考察了背景电解质组成和浓度、分离电压等因素对分析的影响，在优化电泳条件下阿齐沙坦分析时间为4 min，并且对该方法进行了方法学验证及实际样品中阿齐沙坦的含量检测.该方法简单、快速，灵敏度、准确度和精密度均令人满意，适用于阿齐沙坦的快速含量测定，为阿齐沙坦含量的测定分析提供了可靠的参考方法.

[1] 楠本啓司.新規アンジオテンシン AT1 受容体ブロッカーアジルサルタンの in vitro および in vivo 薬理作用[J].日本薬理学雑誌,2012,139(6):236-240.

[2] KENNDLER E.A Critical Overview of Non-aqueous Capillary Electrophoresis.Part Ⅱ： Separation Efficiency and Analysis Time[J].J Chromatography A，2014,1335:31-41.

[3] ATURKI Z,ROCCO A,ROCCHI S,et al.Current Applications of Miniaturized Chromatographic and Electrophoretic Techniques in Drug Analysis[J].J Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2014,101:194-220.

[4] 赵新颖,屈锋,王勇,等.2013年毛细管电泳技术年度回顾[J].色谱,2014,32(1):1-6.

[5] 关瑾,牛秋玲,何传昌,等.毛细管电泳法测定对乙酰氨基酚的含量[J].华西药学杂志,2013,28(6):615-616.

[6] 阎峰,关瑾,陈星,等.高效毛细管电泳法测定乳氟禾草灵的含量[J].农药,2010,49(9):662-663.

Determination of Azilsartan by High Performance Capillary Electrophoresis

LI Huan, LIU Zhi-han, GUAN Jin, YAN Feng, SHI Shuang, WANG Si-lin

(Shenyang University of Chemical Technology, Shenyang 110142， China)

A high performance capillary electrophoresis (HPCE) method has been established for the analysis of azilsartan.The analysis was completed in less than 4 min in 10 mmol/L sodium tetraborate and 10 mmol/L dipotassium hydrogen phosphate buffer (pH 6.5) at 28 kV of separation voltage.A good linearity was obtained for azilsartan in the range from 2 to 100 mg/L.The limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were 0.6 mg/L and 2.0 mg/L,respectively.The average recoveries were in the range of 100.0 %～101.5 %,and relative standard deviations (RSD) were between 0.25 % and 0.75 %.The method is rapid,simple and accurate which provides new and reliable means for the analysis of azilsartan.

azilsartan; high performance capillary electrophoresis; determination

2014-12-06

辽宁省教育厅高等学校科学研究基金项目(L-2012150，L-2014160)

李欢(1989-)，男(蒙古族)，黑龙江双鸭山人，硕士研究生在读，国家奖学金获得者，主要从事药物分析的研究.

关瑾(1967-)，女(锡伯族)，辽宁沈阳人，副教授，博士，主要从事药物分离分析新方法与新技术的研究.

2095-2198(2017)02-0116-03

10.3969/j.issn.2095-2198.2017.02.004

R927.2

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