黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响

2017-07-19杨少飞赵发年

黑龙江动物繁殖 2017年4期

关键词：家兔提取液睾丸

杨少飞，赵发年

(陕西省宝鸡市陈仓区新街镇政府 721300)

黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响

杨少飞，赵发年

(陕西省宝鸡市陈仓区新街镇政府 721300)

为探讨黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响，将无菌条件下分离得到的家兔睾丸细胞培养于含有不同浓度黄芪提取液的培养液内，培养48 h后，用CCK-8试剂测定细胞相对活力。结果表明，培养液内添加适当浓度的黄芪提取液可以提高家兔睾丸细胞的活力。

家兔；黄芪提取液；睾丸细胞；活力

黄芪是一种传统中药材，在我国已有两千多年的使用历史。黄芪具有广泛的药用价值，对动物诸多生理功能均有影响。黄芪可以调节机体免疫功能[1,2]，保护心血管[3]，抗疲劳[4]，抗衰老[5]，抗肿瘤[6]等。另外，黄芪对雄性动物的生殖也有积极的作用。黄芪能够改善4℃低温下猪精液的保存效果[7]，能够抑制大鼠睾丸间质细胞的凋亡[8]，能够抗睾丸氧化损伤[9]等。

虽然已有的研究表明，黄芪在多种动物上发挥着多种功能，但是黄芪对家兔睾丸的影响尚未见报道。因此，本研究以家兔睾丸细胞为研究对象，探讨黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响，为黄芪在家兔饲养中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

黄芪提取液购于大理药业股份有限公司；MEM细胞培养液、胎牛血清、青链霉素混合液、胰蛋白酶、CCK-8试剂盒购于武汉博士德公司。

1.2 家兔睾丸细胞的收集

选取4只健康家兔，摘取睾丸。无菌环境下去除睾丸被膜后，将睾丸组织剪碎，然后将剪碎的睾丸组织用0.25%胰蛋白酶溶液在37℃下消化30 min。消化完成后，细胞筛过滤收集细胞，并将收集的睾丸细胞用PBS清洗两次。

1.3 家兔睾丸细胞的培养

将PBS清洗后的睾丸细胞用培养液稀释后接种于96孔细胞培养板内，每孔104个细胞。培养液为含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、0.1 mg/mL链霉素的MEM细胞培养液。将细胞分为对照组与3个试验组。对照组不添加黄芪提取液(0 μg/mL)，3个试验组内黄芪提取液浓度分别为50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL。每组设定3个重复，试验重复4次。家兔睾丸细胞在35℃，5% CO2浓度，饱和湿度条件下培养48 h。

1.4 细胞活力的测定

本试验采用CCK-8试剂检测细胞活力。CCK-8能被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物，生成的甲臜物的数量与细胞活力成正比。用酶联免疫检测仪在450 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞活力。

家兔睾丸细胞培养48 h后，向各个含有细胞的培养孔内加入10 μL CCK-8溶液，然后继续培养2 h。2 h后，将96孔板置于酶标仪内，读取各孔450 nm处的吸光度值。此吸光度值与细胞活力成正比。

1.5 统计分析

将对照组吸光度值表示为100%，试验组吸光度值以对照组为基础换算成百分数。将所换算的百分数进行统计分析，统计软件使用SPSS 17.0，使用单因素方差分析。

2 结果与分析

黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响如图1所示。当培养液内黄芪提取液浓度达到100 μg/mL及150 μg/mL时，家兔睾丸细胞的活力有显著提升(P<0.05或P<0.01)。

图1 黄芪提取液对家兔睾丸细胞活力的影响(*,P<0.05; **,P<0.01)

3 讨论

黄芪是一种传统的中药材，具有广泛的生理功能。已有研究从某些角度阐明了黄芪对雄性动物生殖健康具有积极的作用[7～9]。本研究表明，合适浓度的黄芪提取液能够有效提高家兔睾丸细胞的活力。睾丸是分泌睾酮并生成精子的器官，黄芪提取液能够提高家兔睾丸细胞的活力，说明黄芪或许对维持家兔睾酮分泌，提高家兔精子质量有积极的作用。这为黄芪在家兔饲养当中的应用提供了理论依据。

黄芪提取液成分复杂，其中包含了黄芪多糖、皂苷等多种营养成分，具体是哪一种或哪几种营养成分对家兔睾丸细胞发挥作用，还需进一步研究。另外，睾丸细胞种类繁多，功能多样，黄芪对于家兔睾丸细胞的具体功能的影响还需进一步探究。

[1] 安松兰, 张善玉, 朴惠顺. 1年生黄芪中黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响[J]. 延边大学医学学报, 2007, 30(1):20-22.

[2] 赵镕, 高永翔. 黄芪多糖的免疫调节作用研究进展[J]. 中医临床研究, 2012, 4(5):4-6.

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[4] 吴铭, 周桃英, 陈年友, 等. 黄芪多糖抗疲劳作用研究[J]. 湖北农业科学, 2014, 53(1):175-177.

[5] 高旭, 李丽芬, 刘斌钰. 黄芪多糖对小鼠应激能力和自由基代谢的影响[J]. 中国预防医学杂志, 2010(2):120-121.

[6] 袁利超, 程延安, 党双锁, 等. 大黄素、黄芪多糖对大鼠实验性肝癌的预防作用[J]. 中国药房, 2005, 16(8):574-576.

[7] 胡传活, 许春荣, 陆媚, 等. 黄芪多糖对猪精液低温保存的影响[J]. 中国兽医学报, 2015(1):150-154.

[8] 曹霞, 陈建伟, 姜晓龙, 等. 黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因表达的影响[J]. 黑龙江动物繁殖,2015,23(1):3-5.

[9] 郭青春, 尧国民, 胡辉, 等. 黄芪复方剂提取物总黄酮抗睾丸氧化损伤研究[J]. 中兽医学杂志,2010(6):13-14.

2017-04-05

杨少飞(1984-)，男，本科，助理畜牧师。