银杏内酯B对自发性高血压大鼠心肌纤维化及左心室肥厚的影响研究*

丁秀婷，刘 璠，刘建一，王 娟，刘淑萍

河北港口集团有限公司港口医院(秦皇岛 066002)

银杏内酯B对自发性高血压大鼠心肌纤维化及左心室肥厚的影响研究*

丁秀婷，刘 璠，刘建一，王 娟，刘淑萍

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目的：探讨银杏内酯B对高血压大鼠(自发性)心肌纤维及左心室肥厚的影响。方法：选择雄性SHR大鼠40只，随机分为五组各8只，分别为大剂量组[银杏内酯B120mg/(kg·d)]、中剂量组[银杏内酯B90mg/(kg·d)]、小剂量组[银杏内酯B60mg/(kg·d)]、氯沙坦组[氯沙坦30mg/(kg·d)]及对照组(SHR大鼠模型)。前四组大鼠均每日灌胃给药，1次/d；对照组用等量的CMCNa溶液代替。12周后，测量五组小鼠动脉血压，并称重后处死。计算左心室质量与体质量之比。染色后算出心肌胶原容积分数，并进行对比分析。结果：对照组治疗后收缩压明显上升(P<0.05)；其他各组治疗后与对照组比较，收缩压均明显降低(P<0.05)；用银杏内酯B的组中大剂量组收缩压下降最明显，但明显低于氯沙坦组(P<0.05)；对照组、小剂量组、中剂量组、大剂量组 LVMI两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)；氯沙坦组和其他各组比较，LVMI明显降低(P<0.05)；结论： 银杏内酯B能改善大鼠高血压导致的心肌重构，并抑制SHR大鼠心肌纤维化。

高血压左室重构(Hypertensive left ventricular remodeling，LVR)的两种主要表现为高血压心肌纤维化(MF)和左心室肥厚(LVH)[1]。组织学方面表现为心肌纤维化和心肌细胞肥大，宏观则表现心肌质量增加和心室壁增厚。近年来，很多研究已证明，银杏内酯B可以改善心肌细胞的代谢，增加心脏血供，降低心血管疾病发生率，并对血管内皮功能有保护作用[2]。目前而言，银杏内酯B是否对高血压引起心肌重构有影响的研究较少，所以，本文设计了银杏内酯B作用于自发性高血压大鼠(SHR)的研究，分析其对高血压大鼠MF和LVR的影响。

材料与方法

1 动物及材料

1.1 动物：选取自发性高血压(SHR)大鼠40只，12周龄，均为雄性，体质量208～250g，由河北大学动物实验中心提供。

1.2 药品：银杏内酯B由河北中医研究所提供，相对分子质量424.40，纯度>95% 。氯沙坦批号：20150721。

1.3 仪器：动物血压心率检测仪(ML-125型)南京南分医用仪器有限公司提供；计算机图像分析系统(MD-20，德国生产)；偏振光显微镜日本生产；透射电子显微镜(H-600，日本生产)。

2 方 法

2.1 分组与用药：将雄性SHR大鼠40只,随机分为5组各8只,分别为大剂量组[银杏内酯B 120mg/(kg·d)]、中剂量组[银杏内酯B 90mg/(kg·d)]、小剂量组[银杏内酯B 60mg/(kg·d)]、氯沙坦组[氯沙坦30mg/(kg·d)]及对照组(SHR大鼠模型)。分别给予配制好的银杏内酯B溶液(溶剂：3%CMCNa溶液,浓度：0.5mg/ml)和氯沙坦溶液(以3%CMCNa溶液作为溶剂,浓度：1ml/100g)灌胃,对照组用等体积CMCNa溶液代替,1次/d。连续用药12周。分别在给药前和用药12周后测量动脉血压(用尾袖法),并称重后处死。所有动物在同一动物房饲养，恒温25℃左右，恒湿50%左右,人工光照明12h、暗12h。

2.2 观察指标：① 血压测量： 在大鼠安静清醒的状态下，使用尾袖法间接测量小鼠血压,以收缩压(SBP)作为观察指标(单位：mmHg)。②心肌肥厚情况：用左心室质量指数( LVMI)表示。 LVMI等于左心室肌质量与体质量之比(LVM/BW)。③ 组织学观察： 大鼠麻醉用水合氯醛(10%)腹腔注射，并仰卧、手术台上固定，腹部正中切口，将腹部主动脉暴露、放血至动脉死亡。开腹腔，选取左心室心肌组织(最好是心室中段横截面取)，固定(用10%甲醛溶液)，包埋(用石蜡)、切片(厚度约6μm)。然后进行胶原特殊染色(用苦味酸-天狼星红染色法)，使胶原呈红色，心肌细胞则为黄色，计算机图像分析，利用灰度调节来区分非胶原与胶原成分，并对左心室心肌切面(主要指外膜与内膜、小动脉周围等)胶原容积分数(CVF)进行测定。CVF等于心肌胶原面积与所测视野面积比。随机取视野4个，算出CVF的平均值。

结 果

1 大鼠收缩压情况 治疗后对照组收缩压明显上升(P<0.05)；其他各组治疗后与对照组比较，收缩压均明显降低(P<0.05)；用银杏内酯B的中大剂量组收缩压下降最明显，但明显低于氯沙坦组(P<0.05)，见表1。

表1 各组大鼠收缩压情况分析±s)

注：与对照组比较，*P<0.05；与小剂量、中剂量组比较，#P<0.05；与大剂量组比较，▲P<0.05

2 大鼠给药后左心室肥厚情况 对照组、小剂量组、中剂量组、大剂量组 LVMI两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)；氯沙坦组和其他各组比较，LVMI明显降低(P<0.05)(图1)。

图1 各组SHR大鼠治疗后左心室质量指数( LVMI)情况

3 各组大鼠给药后左心室心肌胶原容积分数 其他各组左心室心肌CVF与对照组比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)，见表2。

表2 各组大鼠给药后左心室心肌胶原容积分数对比分析(分)

注：与对照组比较，*P<0.05

讨 论

临床研究证实[3-4]，高血压能够引起左心室肥厚(LVH)和心肌细胞的纤维化。其中LVH为心血管病常见的危险因子，其可使左心室厚度增加，使心肌间质的结构和成分也发生变化，导致间质细胞增生和心肌细胞体积增大，胶原纤维的合成也明显增加，最终导致心肌活动僵硬，左心室的顺应性降低，心肌收缩力下降[5-6]。同时心腔扩张，使心室舒张功能也明显下降，出现心室充盈压和左心房压力均明显升高等症。心肌细胞纤维化也属于高血压病情发展的产物，其表现主要有胶原沉淀增加，不同类型的胶原纤维比例失去平衡，导致心肌僵硬、舒张充盈下降、顺应性降低等。王振宇[7]研究显示，心肌小动脉外周的胶原纤维增多，导致心肌间质纤维化，导致心脏收缩、舒张功能降低。所以，在高血压的治疗中，一个关键问题就是抑制心肌细胞的纤维化和左心室肥大。目前已成为治疗效果判定的依据。

本研究中使用了SHR大鼠，很多研究证实，SHR大鼠在5周龄时血压开始升高，在10周龄时就可致左心室肥厚、心肌纤维化。大量文献显示，SHR大鼠在服用ACEI、ARB后，使左心室重构明显减轻或逆转。随着中药事业的发展，中药及其提取物在心脑血管疾病的治疗中越来越广泛，很多中药成分的作用及机理和西药治疗效果相当。银杏内酯B属于二萜类化合物，是中药银杏叶中提取的一种银杏内酯成分，具有改善微循环、扩张血管、抗氧化、抗细胞凋亡、清除自由基等药理作用。本研究结果显示，对照组大鼠治疗后血压明显升高，使用银杏内酯B的3个组中，治疗后血压均明显降低，且随着剂量增加，降压效果增强。提示银杏内酯B降压作用显著，但降压效果不及西药氯沙坦。刘秋等[8-9]的研究中也证实了这点。研究结果显示，银杏内酯B和氯沙坦对SHR大鼠心肌纤维化也有明显的抑制作用，对心肌重构的改善有积极作用。由于左心室肥厚还与心肌细胞凋亡、心肌细胞增殖与肥大等多种因素有关，因此在本研究中显示，银杏内酯B对左心室质量指数( LVMI)的影响不明显。这和卫培峰的研究一致。对左心室质量指数的影响仍需大样本多中心的进一步研究。

综上所述，银杏内酯B能改善大鼠高血压导致的心肌重构，并抑制SHR大鼠心肌纤维化。对其作用机制有待研究。

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[5] Yan Y, Zhao GX,Chen BD,etal.Inhibitory effect of ginkgolide B on CD40 Ligand expression in collagen-induced platelet activation [J].Pharmacol Sci，2012,28(2)：245-254.

[6] 刘雪青，陈北冬，鲍 利，等.银杏内酯B对内皮细胞连接蛋白的影响及其分子机制研究[J].中国药理学通报，2014,30(5)：646-651.

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[10] 卫培峰，王天宝，王 杰.银杏内酯B对自发性高血压大鼠左室肥厚肌心肌纤维化的影响[J].中国医院药学杂志，2011,31(20)：1703-1705.

(收稿：2017-02-22)

*河北省秦皇岛市科技支撑计划项目(201401A214)

高血压/药物疗法 心内膜心肌纤维化症 肥大，右心室 银杏内脂/治疗应用 大鼠

R392.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.002