卡介苗多糖核酸对被动吸烟小鼠肺组织、肺泡灌洗液、血清中NO及iNOS的影响

张正玲+张翊玲+唐立俊+钱正敏

摘要：目的 探讨卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）是否对被动吸烟小鼠的慢性气道炎症有保护作用。方法 将45只雌性C57BL/6小鼠随机分为三组：健康对照组、未治疗对照组、卡介苗多糖核酸治疗组。健康对照组不用任何处理，其余两组每天进行被动吸烟1次，连续30 d。治疗组：卡介苗多糖核酸0.2 ml，隔1 d肌注1次，连续30 d。实验结束24 h内将小鼠处死并收集标本。结果 与未治疗组比较，卡介苗多糖核酸治疗组小鼠肺组织、血清及肺泡灌洗液中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）与一氧化氮（NO）显著降低（P<0.05）。结论 卡介苗多糖核酸对被动吸烟小鼠的慢性炎症具有一定的保护作用。

关键词：卡介苗多糖核酸；小鼠；被动吸烟；一氧化氮；一氧化氮合酶

中图分类号：R563.9 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）14-0047-03

Effects of BCG Polysaccharide Nucleic Acid on Lung Tissue，Bronchoalveolar Lavage Fluid，Serum NO and iNOS in Passive Smoking Mice

ZHANG Zheng-ling1，ZHANG Yi-ling2，TANG Li-jun1，QIAN Zheng-min1

（1.College of Life Science，Zunyi Normal University，Zunyi 563002，Guizhou，China；

2.Department of Respiratory Medicine，Guizhou Provincial People's Hospital，Guiyang 550002，Guizhou，China）

Abstract：Objective To investigate whether（BCG-PSN） has a protective effect on chronic airway inflammation in passive smoking mice.Methods 45 female C57BL/6 mice were randomly divided into three groups：healthy control group，untreated control group and BCG polysaccharide nucleic acid treatment group.Health control group without any treatment，the remaining two groups were passive smoking once a day for 30 d.Treatment group：BCG polysaccharide nucleic acid 0.2 ml，every 1 d intramuscular injection 1，for 30 d.Mice were sacrificed and samples were collected 24 h after the end of the experiment.Results Compared with the untreated group，the inducible nitric oxide synthase（iNOS）and nitric oxide（NO）were significantly decreased in lung tissue，serum and alveolar lavage fluid of BCG vaccine group（P<0.05）.Conclusion BCG polysaccharide nucleic acid has a protective effect on chronic inflammation in passive smoking mice.

Key words：BCG polysaccharide nucleic acid；Mice；Passive smoking；Nitric oxide；Nitric oxide synthase

一氧化氮（NO）在生理和病理過程中扮演不同的角色，正常水平的NO对降压、扩张血管、抗炎及抗凝等方面发挥重要的作用。然而，高水平的NO对机体会产生损害作用。诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的激活与炎症介质、细胞因子、感染、休克、缺血、缺氧等刺激因素等密切相关。iNOS过度激活、引起大量的NO产生是机体损害的重要因素之一[1-3]。众所周知，吸烟危害健康，烟雾中的尼古丁及焦油、烟碱和一氧化碳等有害物质是慢性呼吸道疾病重要的致病因素或危险因素，研究表明作为有害物质的烟雾颗粒可间接或直接通过激活iNOS mRNA表达从而产生大量的NO损伤肺组织[4-6]。卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）作为免疫调节剂广泛应用于临床，BCG-PSN是采用卡介苗经热酚法提取的多糖核酸类物质，具有活化巨噬细胞，增强T细胞、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫功能[13-15]，有研究表明应用BCG-PSN在预防和治疗慢性支气管炎、哮喘、肺癌、自身免疫性疾病等方面有较好疗效，但BCG-PSN是否通过降低iNOS及NO方式来发挥保护作用的文章未见报道，本研究旨在于了解卡介苗多糖核酸是否会保护小鼠气道慢性炎症，是否会降低iNOS及NO的表达水平，并围绕此目的而展开。

1资料与方法

1.1一般资料

6w龄雌性C57BL/6小鼠45只（购买于北京，SPF级），体质量18～20 g，动物随机分为三组：健康对照组、未治疗对照组、卡介苗多糖核酸治疗组。健康对照组不作任何处理，其余两组进行被动吸烟1次/d，应用2根/次香烟形成烟雾（黄果树牌香烟，焦油含量13 mg，由贵阳卷烟厂生产），由特制的玻璃装置（35 cm×25 cm×15 cm，有香烟熏口与出口，保证香烟烟雾浓度均匀）进行熏烟，燃10根/d香烟，1次/d，连续30 d。卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）由湖南九芝堂斯奇康生产。BCG-PSN治疗组于吸烟4 h/d以前，用卡介苗多糖核酸0.2 ml，隔1 d肌注1次（每只小鼠大腿左右各肌注0.1 ml），实验时间为30 d（每只香烟焦油含量及牌子都固定不变）。被动吸烟时小鼠会出现呼吸频率加快、腹式呼吸明显，烦躁不安等症状。但30 d被动吸烟中未因为烟雾吸入导致呼吸困难方面的死亡。

1.2标本收集与处理

经被动吸30 d后，于被动吸烟后的24 h内将小鼠眼球取血处死，血清用于iNOS及NO检测，其中8只小鼠肺组织部分应用于病理活检及部分应用于匀浆后取上清液，-80℃保存备检测；其余7只进行双侧肺泡灌洗液，每次应用1 ml PBS进行灌注并每次反复抽吸3遍后回收，回收率达85%以上，每只小鼠灌注3次，并将3次回收的灌注液混合后离心并取上清液，并储存于-80℃备用。

1.3染色

肺组织切片后行HE染色及PAS染色，血清及肺泡灌洗液、肺组织iNOS及NO检测试剂盒均购买于南京建成生物工程研究所。操作严格按照说明书执行。肺组织匀浆上清液的iNOS western Blot检测抗体及β-actin抗体均购买于美国Santa cruz公司。

1.4统计学分析

采用SPSS19.0软件，数据以（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间采用单因素方差分析，多个样本均数两两比较采用q检验。

2结果

2.1小鼠肺组织切片进行H&E染色

卡介苗多糖核酸治疗能改善肺支气管周围的炎症细胞浸润及血管渗出，减少肺泡水肿及肺间隔增厚、融合、断裂等情况，通过病理检测能直观地反映BCG-PSN对支气管哮喘的保护作用，见图1。

2.2小鼠肺组织、肺泡灌洗液及血清中iNOS及NO表达情况

结果显示，卡介苗多糖核酸治疗组iNOS及NO表达水平显著降低，见表1。