精制冠心系列制剂提取工艺再评价研究

刘 涛， 唐 玉， 刘晓凤， 彭晓凤， 谢梦蝶

(1.成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都 610106； 2.四川天一学院， 四川 绵竹 618200；3.成都大学 张澜学院， 四川 成都 610106)



精制冠心系列制剂提取工艺再评价研究

刘 涛1， 唐 玉1， 刘晓凤2， 彭晓凤1， 谢梦蝶3

(1.成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都 610106； 2.四川天一学院， 四川 绵竹 618200；3.成都大学 张澜学院， 四川 成都 610106)

对精制冠心系列制剂提取工艺进行再评价研究，为改进该系列制剂的生产工艺提供实验依据.以有效成分提取转移率和出膏率的综合评分为指标，利用单因素试验及正交试验全面试验考察精制冠心系列制剂提取工艺的可优化参数和未明确参数，并确定其最佳提取工艺.精制冠心系列的最佳提取工艺为改进后的精制冠心片提取工艺，具体为：丹参、赤芍、川芎、红花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.结果表明，改进后的精制冠心系列提取工艺稳定可行，有效成分提取转移率较高，可用于工业大生产.

精制冠心系列制剂；提取工艺；再评价研究

0 引 言

精制冠心系列制剂由丹参、川芎、赤芍、红花、降香5味中药材组成，是《中国药典》2015版一部收录的中药复方制剂，包括精制冠心片和精制冠心颗粒，具有活血化瘀之功效，临床用于淤血内停所致的胸痹，冠心病与心绞痛等症[1].方中丹参与赤芍为君药，丹参的主要成分为丹参酮IIA与丹酚酸B，赤芍的主要成分为芍药苷.丹参酮IIA具有抗动脉粥样硬化、抗心律失常等药理作用；丹酚酸B具有保护心肌梗死、抑制动脉粥样硬化等药理作用；芍药苷具有保护脑缺血后血脑屏障及大脑局部血流量等药理作用[2-4].同是源于冠心康颗粒的精制冠心片与冠心颗粒2种中成药[5]，其提取工艺却不同，导致其药效物质基础可能不同.何种提取工艺较佳，有待研究评价.对此，本研究以基于中药工艺与质量控制的中成药再评价研究理论[6]为基础，以指标成分提取转移率和出膏率的综合评分[7]为指标，对精制冠心系列制剂提取工艺进行再评价研究，拟为改进该系列制剂的生产工艺提供实验依据.

1 试药与仪器

1.1 试 药

实验所用试药包括：丹参(批号20160730)、川芎(批号20131224)、赤芍(批号20141214)、红花(批号20141214)、降香(批号20141214)，均购自于成都市荷花池中药材市场，经成都大学徐玉玲副教授鉴定为正品；芍药苷对照品(批号150913，质量分数大于98%)、丹酚酸B对照品(批号151119，质量分数大于98%)、丹参酮IIA对照品(批号160304，质量分数大于98%)购自四川维克奇生物技术有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，其余为分析纯，均购自成都市科龙化工试剂厂；水为怡宝纯净水.

1.2 仪 器

实验所用仪器包括：DZTW型电子调温电热套(天津市静海县工兴电器厂)；DZF-6050A型真空恒温干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHZ-DⅢ型循环水真空泵(郑州杜甫仪器厂)；P230型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)；FA2004型分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)；BS-6KH型电子天平(上海友声衡器有限公司)；酒精计(武强同辉仪表厂)；HS3120型超声波清洗器.

2 方法与结果

2.1 指标成分的含量测定

2.1.1 精制冠心片中芍药苷、丹酚酸B、丹参酮IIA的含量测定.

精制冠心片中芍药苷、 丹酚酸B、丹参酮IIA按《中国药典》2015版一部“精制冠心片”项下方法测定[1].2.1.2 精制冠心颗粒中芍药苷、丹酚酸B含量测定.

精制冠心颗粒中芍药苷、丹酚酸B按《中国药典》2015版一部“精制冠心颗粒”项下方法测定[1].

2.2 干膏率的测定

取干燥至恒重的蒸发皿，精密加入50 mL药液，水浴蒸干，于105 ℃烘3 h，干燥器中冷却30 min，迅速精密称定质量，计算确定干膏率.

2.3 精制冠心片提取工艺参数确定

按《中国药典》2015版一部方法，精制冠心片中丹参、赤芍、川芎、红花提取工艺中提取所用乙醇浓度偏大且未明确乙醇用量.对此，本实验拟对其进行再评价研究.

2.3.1 提取所用溶媒量及所用溶媒浓度考察.

在预实验基础上，选取乙醇用量、乙醇浓度为考察因素，以芍药苷转移率、丹酚酸B转移率、丹参酮ⅡA转移率的综合评分为指标，按处方比例称取丹参37.6 g，赤芍18.8 g，川芎18.8 g，红花18.8 g，共4份，按L4(23)正交表安排实验，按“2.1.1”项下方法进行含量测定.实验安排及结果见表1，方差分析见表2.

表1 两因素两水平实验结果

注：综合评分=芍药苷转移率/芍药苷最大转移率×33.33+丹酚酸B转移率/丹酚酸B最大转移率×33.33+丹参酮ⅡA转移率/丹参酮ⅡA最大转移率×33.33

表2 两因素两水平试验显著性差异分析表

由表1、2可知：各因素对提取工艺的影响因素顺序为B(乙醇用量)>A(乙醇浓度)；方差分析表明，因素B具有显著性影响，因素A影响不显著.根据数据分析，选取最佳提取工艺为A2B1，即加入10倍量70%乙醇回流提取2次.

2.3.2 验证实验.

按“2.3.1”项下优选的提取工艺平行制备3份供试品，按“2.1.1”项下方法进行含量测定.验证实验结果表明，芍药苷、丹酚酸B与丹参酮IIA的转移率RSD分别为，1.69%、4.71%与4.92%，说明优选的提取工艺较稳定可行.

2.3.3 2次加入溶媒量优化.

取丹参37.6 g、赤芍18.8 g、川芎18.8 g、红花18.8 g，加入70%乙醇回流提取2次，每次加入的溶媒量不同，第一次提取3 h，第二次提取2 h.采用单因素试验法，并按“2.1.1”项下方法进行含量测定.实验安排与结果见表3.

表3 优化2次加入溶媒量

由表3结果可知，精制冠心片的最佳提取工艺为：丹参、赤芍、川芎、红花按照《中国药典》2015版一部规定的处方比例，用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量乙醇提取3 h，第二次加入8倍量乙醇提取2 h.

2.4 精制冠心颗粒提取工艺参数确定

按《中国药典》2015版一部方法，精制冠心颗粒中丹参、赤芍、川芎、降香提取工艺中溶媒量不确定，冷凝回流次数多且提取时间较长.对此，本实验拟对其进行再评价研究.

2.4.1 精制冠心颗粒中丹参、赤芍、川芎、降香提取工艺参数确定.

选取溶媒量(用水量)、提取次数为考察因素，以芍药苷转移率、丹酚酸B转移率与干膏率的综合评分为指标，按处方比例称取丹参30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，因素水平实验安排见表4，按“2.1.2”项下方法进行含量测定，按“2.2”项下方法进行干膏率测定，结果见表5，方差分析见表6.

表4 全面实验因素水平表

表5 正交实验结果分析表

注：综合评分=丹酚酸B转移率/丹酚酸B最大转移率×50.00+芍药苷转移率/芍药苷最大转移率×30.00+出膏率/最大出膏率×20.00[9].

表6 综合评分方差分析

由表5、6可知，各因素对提取工艺的影响因素顺序为B(提取次数)>A(溶媒量)；方差分析表明，因素B具有显著性影响，因素A影响不显著.根据数据分析，选取最佳提取工艺为A1B3，即以水为提取溶媒，选取溶媒量为4倍，回流提取3次，提取时间分别为1.5 h、1 h、0.5 h.

2.4.2 验证实验.

按“2.4.1”项下优选的提取工艺平行制备3份供试品，按“2.1.2”项下方法进行含量测定，按“2.2”项下方法进行干膏率测定，实验结果表明，芍药苷转移率、丹酚酸B转移率、出膏率RSD分别为：2.97%、4.57%、0.80%，说明优选的提取工艺稳定可行.

2.4.3 精制冠心颗粒工艺对比实验.

称取丹参30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，以4倍量水进行提取.按照《中国药典》2015版一部规定工艺平行制备3份供试品，即供试品1、供试品2、供试品3.按“2.4.1”项下优选的提取工艺平行制备3份供试品，即供试品4、供试品5、供试品6.对比实验结果见表7.

表7 提取工艺对比实验结果

由表7结果可知，“2.4.1”项下优选的提取工艺不仅比《中国药典》2015版一部规定提取工艺芍药苷转移率、丹酚酸B转移率、出膏率的综合评分高，结果稳定，而且提取时间大大缩短，适合工业化大生产流程.因此，精制冠心颗粒的最佳提取工艺为：丹参、赤芍、川芎、降香按照《中国药典》2015版一部规定的处方比例，以水为提取溶媒，选取溶媒量为4倍，回流提取3次，提取时间分别为1.5 h、1 h、0.5 h.

2.5 中间体显著性差异对比实验

按“2.3.1”项下优选的提取工艺平行制备3份精制冠心片中间体，即供试品1、供试品2、供试品3.按“2.4.1”项下优选的提取工艺平行制备3份精制冠心颗粒中间体，即供试品4、供试品5、供试品6.按“2.1.1”项下方法进行含量测定，按“2.2”项下方法进行干膏率测定，实验结果见表8.

表8 中间体显著性差异对比实验结果

注：P为供试品1、供试品2、供试品3与供试品4、供试品5、供试品6之间的显著性差异.

由表8结果可知，精制冠心片中间体与精制冠心颗粒中间体的芍药苷转移率、丹酚酸B转移率、出膏率无显著性差异，而丹参酮IIA转移率具有极显著性.丹参酮IIA微溶于水，精制冠心颗粒由于提取工艺原因，丹参酮IIA几乎完全丧失.丹参酮IIA作为君药丹参的主要药效成分，具有抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗心律失常等药理作用，与精制冠心系列处方功能主治相符，为处方中不可或缺的药效物质基础.

据此，精制冠心系列的最佳提取工艺为改进后的精制冠心片提取工艺，即：丹参、赤芍、川芎、红花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.

3 讨 论

药物上市后的再评价是药品研究的一个重要环节，是确保用药安全的有效手段，也是对新药评价的扩大和延伸[8-10].由于精制冠心片与颗粒处方相同，功能主治相同，但因提取工艺参数不明确，提取工艺不一致，可能引起成品物质基础不一致，因此有必要对其进行再评价研究.本研究通过实验明确了上述2种剂型的提取工艺参数，使其提取工艺路线更合理可行，确定精制冠心系列的最佳提取工艺为改进后的精制冠心片提取工艺，此为改进该系列制剂的生产工艺提供了实验依据.需指出的是，为了进一步对比2种剂型药效物质基础的差异，还需要进一步展开其HPLC指纹图谱的研究工作，以便更全面有效地控制2种制剂的质量.

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2015.

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[7]马瑞娟,苗明三.一种中药药效的多指标评价新方法——综合权重法[J].中药新药与临床药理,2011，22(5):569-572.

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Re-evaluation on Extraction Process of Refined Crown Series Preparations

LIUTao1,TANGYu1,LIUXiaofeng2,PENGXiaofeng1,XIEMengdie3

(1.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China;2.Sichuan Tianyi University, Mianzhu 618200, China; 3.School of Zhanglan, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The study of the re-evaluation on the extraction process of refined crown series preparations provided experimental basis for improving the production technology of the series.With the comprehensive evaluation of the extraction transfer rate and the dry extraction ratio as index, the single factor test,the orthogonal test and comprehensive test were used to investigate the optimizable parameters and unspecified parameters to find the best extraction process of refined crown series preparations.The optimal extraction process of refined crown series preparations was the improved extraction process of refined coronary tablets:Salvia miltiorrhiza Bge,Paeonia veitchii Lynch,Ligusticum chuanxiong Hort and Carthamustinctorius L were extracted twice with 70% ethanol reflux,and 10 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 3 h for the first time,and 8 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 2 h for the second time.The conclusion drawn from the paper is that the improved extraction process of refined crown series preparations is stable and feasible,which has higher effective component extraction transfer rate and can be used for industrial production.

refined crowns series preparations;extraction process;re-evaluation

1004-5422(2017)02-0131-04

2017-04-05.

四川省千人计划(2013332)资助项目.

刘 涛(1976 — )， 男， 博士， 研究员， 从事中成药开发与再评价研究.

R284.2

A