尖锐湿疣复发患者的细胞因子及淋巴细胞亚群的变化规律研究

莫友 王建琴 方锐华 吴江 许剑荣 李群

尖锐湿疣复发患者的细胞因子及淋巴细胞亚群的变化规律研究

莫友1王建琴2*方锐华1吴江1许剑荣1李群1

目的探讨尖锐湿疣复发患者的细胞因子及免疫功能的变化规律。方法选取我院皮肤科收治的87例尖锐湿疣患者。将患者分为初发组与复发组。初发组48例，复发组39例，选取同期体检的42名健康者作为对照组。对3组人员的血清细胞因子IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6及外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+分布水平进行检测及统计分析。结果3组患者的IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平之间比较差异均具有显著性（P＜0.05）。两两比较后发现，复发组患者的血清IL⁃2、IL⁃6、CD4+细胞、CD4+/CD8+水平均显著低于初发组与对照组（P＜0.05），血清IL⁃4、CD8+细胞水平均显著高于初发组与对照组（P＜0.05）；初发组患者的血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平与对照组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论尖锐湿疣复发患者存细胞免疫功能的失衡，细胞免疫功能低下可能是导致其反复发作的一个原因。

尖锐湿疣；细胞免疫；人类乳头瘤病毒；细胞因子；T细胞亚群

尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）是感染人乳头瘤病毒（HPV）所致的良性增生性的性传播疾病，发病率一直居高不下，并有逐年增高的趋势［1，2］。尖锐湿疣也是肛肠医生和泌尿外科医生的头痛问题，多年来在多科合作治疗下，这个问题仍未解决。据研究表明［3，4］，HPV的重复感染与患者机体细胞免疫功能低下有关，患者无法有效产生特异的局部抗HPV的细胞免疫反应。HPV在人体潜伏和复发的机制尚不清楚，除了病毒本身的因素外，细胞介导的免疫反应在尖锐湿疣复发患者的发病中可能起着一定的作用。我们检测了尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞中IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6及外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表达水平，以探讨初发、复发HPV感染患者之间细胞免疫功能的关系，现报道如下。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

选取我院皮肤科2014年8月至2016年6月收治的87例CA患者，所有患者均符合卫生部防疫司1991年制定的尖锐湿疣诊断标准。将患者分为初发组与复发组（复发组：患者去除疣体后，3个月内有新生疣体再次出现）。初发组患者48例，复发组患者39例。初发组：男27例，女21例，年龄21⁃52岁，平均年龄（31.89±9.48）岁，病程1周⁃3个月，平均病程为（1.05±0.87）月；复发组：男22例，女17例，年龄22～50岁，平均年龄（32.67±8.42）岁，病程3个月～24月，平均病程为（4.58±2.47）月，发病次数在2⁃8次之间，平均发病次数为（4.58± 2.47）次。选取同期来我院进行体检的42名健康体检者作为对照组，所有人员1个月内均没有感染性疾病，其中男性24例，女性18例，年龄20～52岁，平均年龄（32.14±10.21）岁。三组患者性别、年龄等比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂人白介素⁃2（Interleukin⁃2，IL⁃2）、人白介素⁃4（Interleukin⁃4，IL⁃4）、人白介素⁃6（Interleukin⁃6，IL⁃6）专用ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）；KHB ST⁃360型全自动酶标仪（上海科华公司）；FACSCalibur流式细胞仪（美国Becton Dickinson公司）；Simultest IMK⁃Lympho⁃cyte双色淋巴细胞亚群分析试剂盒（美国Becton Dickinson公司）。

1.2.1 细胞因子检测方法3组患者均抽取空腹静脉血5mL，新鲜外周血采用肝素钠抗凝，放入离心机，采用2000 r/min转速，离心15min后取血清进行无菌分装，置于冰箱冷冻（-20℃）保存。按照试剂盒说明书操作步骤，运用ELISA法对两组人员的IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6进行检测。

1.2.2 T淋巴细胞亚群检测方法3组患者均抽取空腹静脉血2mL，加入肝素钠抗凝，置于恒温箱避光孵育20min，加入红细胞裂解液2mL充分混匀，静置5min，放入离心机，采用1000 r/min转速，离心5min，弃去上清液，加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）2mL洗涤1次，再加入PBS液0.45mL混匀检测。采用美国Becton Dickinson公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪对其检测，采用Flowjo（v7.6.2）软件对检测数据加以分析。

1.3 分析方法

采用软件SPSS 19.0对所得数据进行统计分析，检测结果采用均数±标准差表示，多组间均数比较采用F分析；多组间均数两两比较采用LSD⁃t检验法，检验P值，当P＜0.05，为差异有统计学意义。

2 结果

3组患者的血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平之间比较差异均具有显著性（P＜0.05），见表1。进行两两比较后发现，复发组患者的血清IL⁃2、IL⁃6、CD4+细胞、CD4+/ CD8+水平均显著低于初发组与对照组（P＜0.05），血清IL⁃4、CD8+细胞水平均显著高于初发组与对照组（P＜0.05）；初发组患者的血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平与对照组比较差异均无显著性（P＞0.05），见表2。

表1 各组受试者血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平比较

表1 各组受试者血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平比较

组别初发组复发组对照组n 48 39 42 F P IL⁃2 /pg·mL-122.20±8.82 33.87±4.89 22.66±8.12 27.666 0.000 IL⁃4 /pg·mL-116.11±2.57 9.33±2.63 14.67±2.81 63.281 0.000 IL⁃6 /pg·mL-18.42±2.17 12.53±2.11 8.04±2.90 41.667 0.000 CD4+/% 38.87±5.87 44.97±5.84 38.17±5.51 18.574 0.000 CD8+/% 36.88±5.01 29.47±5.33 36.33±4.22 28.345 0.000 CD4+/CD8+/% 1.17±0.33 1.68±0.32 1.08±0.27 44.855 0.000

表2 各组受试者的血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平两两比较

3 讨论

尖锐湿疣治疗后极易复发，病情反复不愈是治疗此病的最大难题。HPV反复感染的原因是由于机体不能建立有效的免疫反应，尤其是局部细胞免疫反应，且亚临床感染的存在是尖锐湿疣复发的重要因素［5，6］。HPV感染机体组织细胞，尖锐湿疣发生后表皮与真皮内局部发生的细胞免疫，主要表现在角质形成细胞、血管内皮细胞浸润和朗格汉斯细胞数量发生变化。Th1细胞可以分泌IL⁃1、IL⁃2等，主要介导机体细胞免疫反应与炎症反应，Th2细胞可以分泌IL⁃4、IL⁃6等，主要介导机体体液免疫反应。CD4+细胞及其分泌的细胞因子均参与发病，CA复发患者可能存在一定程度的细胞免疫缺陷。CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量与CD4+/ CD8+的比值是衡量细胞免疫的重要指标［7，8］。有学者认为，尖锐湿疣患者淋巴细胞亚群的数量与功能可发生异常改变，并且Th1/Th2的失衡可能是造成尖锐湿疣反复发作的一个重要因素［8，9］。

本研究结果表明，复发组患者的血清IL⁃2、IL⁃6、CD4+、CD4+/CD8+水平均显著低于初发组与对照组（P＜0.05），血清IL⁃4、CD8+细胞水平均显著高于初发组与对照组（P＜0.05）。发生这一现象的机制可能为：①IL⁃2能够促进NK细胞活性增强；②IL⁃2还能够促进淋巴因子活化，从而增强杀伤细胞的活性。进而提升其破坏病毒感染的靶细胞的能力。由于尖锐湿疣患者IL⁃2表达水平较为低下，其促进NK细胞活化的能力不足，并且促进淋巴因子活化杀伤细胞的能力也随之降低，从而导致机体溶解与破坏病毒感染的靶细胞的综合能力降低，从而造成尖锐湿疣的复发。本研究发现，初发组与对照组的指标比较有一定变化，但IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+水平与对照组比较，统计学差异均无显著性（P＞0.05），发生这一现象的原因可能是尖锐湿疣初发患者的细胞免疫功能可能在病毒活跃、复制的刺激下会有一定程度的改变，但是由于对病毒的免疫反应尚未建立，因此血清中细胞因子及T淋巴细胞亚群的数量改变无明显差异。

综上，尖锐湿疣复发患者存在一定程度的细胞免疫功能的失衡，并且随着病情的反复失衡状态愈加严重。但机体免疫功能的正常维持，是一个错综复杂过程，是各因素之间互相制约和调节的结果。因此，对于尖锐湿疣患者细胞因子及CD4+/CD8+淋巴细胞极化的变化在尖锐湿疣病程中的作用尚待进一步研究。

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Study on the changes of cytokines and lym phocyte subsets in recurrent patientsw ith condyloma acum inatum

MO You，WANG Jianqin，FANG Yuehua，WU Jiang，XU Jianrong，LIQun.1Depart⁃ment ofDermatology，Guangzhou First People′s Hospital，Guangzhou，510180；2Guangzhou Institute of Dermatology，Guangzhou 510095，China.Corresponding author：WANG Jianqin，jianqinwang@tom.com

Objective To investigate the changes of cytokines and immune function in patients with recurrent condyloma acuminatum.M ethods A total of 87 patients with condyloma acuminatum were included in this study，and were assigned to two groups，primary group（n=48），recurrent groups（n=39）.Another 42 healthy subjects were selected as controls（control group）.The peripheral blood levels of CD4+T⁃lymphocyte，CD8+T⁃lymphocyte，CD4+/CD8+ratio and the levels of IL⁃2，IL⁃4，IL⁃6 were detected and analyzed statistically.Results There were significant differences in the levels of IL⁃2，IL⁃4，IL⁃6，CD4+T⁃lymphocyte，CD8+⁃T lymphocyte，CD4+/CD8+ratio between the three groups（all P valueswere less than 0.05）.Serum IL⁃2，IL⁃6，CD4+/CD8+ratio in the patientswith relapsewere sig⁃nificantly lower than those in the control group（all P valueswere less than 0.05）.Therewas no signifi⁃cant difference in serum IL⁃2，IL⁃4，IL⁃6，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+levels between the initial group and the control group（all P valuesweremore than 0.05）.Conclusion In patientswith recurrent condylo⁃ma acuminatum，there is an imbalance of cellular immune function，and this cellular immune dysfunc⁃tionmay be a cause of recurrentattacks

condyloma acuminata；cellular immunity；human papillomavirus；cytokines；T cell subsets

R759.5

A

10.3969/j.issn.1009⁃976X.2017.03.029

2017⁃04⁃25）

1510180广州广州市第一人民医院皮肤科；2510095广州广州市皮肤防治所

*通讯作者：王建琴，Email：jianqinwang@tom.com