亚低温对重症病毒性脑炎患儿血清及脑脊液NSE、S100B蛋白表达的影响*

陈 锋， 张芙蓉， 孙继民， 何生松， 王 君

1华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)重症医学科，武汉 4300162华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科，武汉 430022

亚低温对重症病毒性脑炎患儿血清及脑脊液NSE、S100B蛋白表达的影响*

陈 锋1， 张芙蓉1△， 孙继民1， 何生松2， 王 君2

1华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)重症医学科，武汉 4300162华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科，武汉 430022

目的 研究亚低温治疗对小儿重症病毒性脑炎患者血清及脑脊液神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B蛋白水平的影响。方法 以2012年1月～2014年12月武汉儿童医院收治的83例重症病毒性脑炎患儿为研究对象，随机分为亚低温组和常规治疗组，亚低温组于入院24 h内实施全身亚低温治疗(目标温度为肛温32～35℃，疗程3～10 d)，对照组给予常规治疗。观察患儿治疗前后临床症状，监测血清及脑脊液NSE、S100B蛋白水平。结果 ①与常规治疗组比较，亚低温治疗组患儿临床症状持续时间、格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分以及住院时间明显缩短(P<0.05或P<0.01)；②两组血清NSE、S100B含量在治疗后0、24 h比较差异无统计学意义(均P>0.05)，在治疗后48、72 h及10 d，亚低温治疗组患儿血清NSE、S100B水平低于常规治疗组，两组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；③恢复期亚低温治疗组脑脊液NSE、S100B水平均低于常规治疗组，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 亚低温治疗可以降低重症病毒性脑炎患儿血清及脑脊液NSE、S100B蛋白水平，改善临床症状。

病毒性脑炎； 亚低温； 神经元特异性烯醇化酶； S100B蛋白

病毒性脑炎(viral encephalitis，VE)是儿童最常见的中枢神经系统感染性疾病，是威胁儿童健康的主要疾病之一。现阶段，临床上将32～35℃亚低温运用在脑外伤、脑缺血缺氧、脑出血和心脏骤停的治疗中己经取得了满意的效果，且亚低温治疗是目前唯一在临床研究中证实有效的脑保护措施。然而，亚低温治疗对病毒性脑炎的影响作用鲜见研究和报道。神经元特异性烯醇化酶(nearon-soecific enolase，NSE)特异性存在于神经元和神经内分泌细胞的胞质中，其改变可反映中枢神经系统病理变化[1]。S100B蛋白是一种神经胶质特异性蛋白，可比较特异和灵敏地反映中枢神经系统的损伤。因此，本研究对重症病毒性脑炎患儿采用亚低温治疗，探讨亚低温对病毒性脑炎患儿血清及脑脊液中NSE、S100B蛋白水平的影响。

1 资料与方法

1.1 研究对象

以2012年1月～2014年12月在武汉儿童医院重症医学科收治的83例重症病毒性脑炎患儿为研究对象，全部病例按随机数字法分为两组，亚低温组和常规治疗组，两组患儿治疗前一般资料对比分析见表1。两组患儿在年龄、体重、性别、小儿危重评分(PCIS)等方面的差异无统计学意义(均P>0.05)，具有可比较性。本研究符合医学伦理学标准，并经医院伦理委员会批准，所有治疗获得患儿监护人的知情同意。

表1 重症病毒性脑炎患儿治疗前一般资料比较±s)

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①年龄在1月～18岁之间；②未合并颅脑及其他脏器严重外伤；③符合病毒性脑炎诊断标准[2]；④通过血液及脑脊液培养、结核菌素试验、支原体抗体等检查，排除化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、真菌性脑膜炎、支原体、衣原体感染；⑤重症。患儿满足下列6项中的2项及以上者诊断为重症病毒性脑炎：a.高热持续不退；b.频繁抽搐或惊厥持续状态；c.严重意识障碍或昏迷即入院时格拉斯哥昏迷指数评分(GCS)≤8分；d.瘫痪；e.出现脑干症状如血压波动、呼吸节律改变等；f.脑CT或MRI显示脑实质或(和)脑干内异常密度灶。

排除标准：①入院时双瞳散大；②持续性休克，血压小于该年龄组第5个百分位或小于该年龄组正常值2个标准差，对药物无反应；③伴有严重的脑外伤、胸部、腹部或其他脏器外伤；④患有严重心肺疾患或糖尿病；⑤既往有脑损伤病史或神经系统肿瘤。

1.3 治疗方法

两组患者基础治疗相同，视病情及合并症加用抗病毒、脱水剂等治疗原发病药物。常规治疗组患儿给于降温、吸氧、镇静、降颅压、支持疗法、鼻饲安宫牛黄丸和对症处理等常规治疗。亚低温组在常规治疗的基础上，在入院后24 h内行亚低温治疗，采用全身使用控温毯降温治疗仪(美国Csz公司，Blanketroll型)，在3～6 h内将患者的肛温降至32～35℃，最迟不超过12 h，必要时用人工呼吸机控制呼吸及加用镇静药物。根据患者临床症状及血气分析情况确定亚低温的疗程，一般疗程为3～10 d。同时进行心电、血压、呼吸、脉搏、瞳孔等监测。

1.4 标本采集及检测

患儿于入院后即刻以及治疗(降温或常规)后24、48、72 h及治疗后10 d各时段抽取清晨空腹静脉血，高速离心后取上清，置-70℃冰箱保存待测。全部患儿均于入院后24 h内(急性期)行腰椎穿刺，患儿于住院10～14 d(恢复期，除外10 d内死亡或放弃治疗者)再次行腰椎穿刺，采集脑脊液，置-70℃冷冻保存待测。血清及脑脊液NSE和S100B检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)，标本储存和检测步骤严格按照试剂盒说明书操作。NSE、S100B试剂盒均购自武汉博士德公司。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 临床疗效比较

最初入选共83例，治疗过程中，亚低温治疗组和常规治疗组分别有3例和4例患儿家长放弃继续抢救治疗，两组分别死亡3例和2例，故最终纳入统计的病例数为71例。与常规治疗组比较，亚低温治疗组患儿GCS评分较高、临床症状持续时间以及住院时间明显缩短(P<0.05或P<0.01)，见表2。

表2 两组患儿治疗后临床疗效比较±s)

与常规治疗组比较，*P<0.05**P<0.01；括号内数字为治疗前有症状例数，其中瘫痪的观察时间包括住院期间及出院后康复观察时间(出院后均随访30 d)。

2.2 亚低温治疗对患儿血清中NSE和S100B含量的影响

NSE及S100B水平在脑损伤后开始升高，均在脑损伤72 h达到高峰，亚低温治疗组的升高速度及峰值均明显低于常规治疗组，开始治疗0、24 h时间点两组NSE、S100B水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，治疗后48、72 h及治疗后10 d，亚低温治疗组明显低于常规治疗组，两组差异有统计学意义(P<0.05或0.01)，见表3、4。

表3 各组患儿不同治疗时间点血清中NSE的表达±s，ng/mL)

与常规治疗组比较，*P<0.05

表4 各组患儿不同治疗时间点血清中S100B的表达

与常规治疗组比较，*P<0.05**P<0.01

2.3 亚低温治疗对患儿脑脊液中NSE和S100B含量的影响

两组患儿急性期脑脊液NSE、S100B含量比较，差异无统计学意义(均P>0.05)，恢复期亚低温治疗组均低于常规治疗组，差异均具有统计学意义(P<0.05或0.01)，见表5。

表5 亚低温治疗对患儿脑脊液中NSE和S100B含量的影响

与常规治疗组比较，*P<0.05**P<0.01

3 讨论

病毒性脑炎是小儿神经系统疾病中最常见且严重危害儿童健康的感染性疾病之一，临床表现多样，可导致严重的神经系统后遗症，甚至可导致患儿死亡[3]，因此，在其治疗的过程中不仅仅要进行常规抗病毒等方面的治疗，还要注重改善患者的脑部状态，监测神经细胞的损伤与恢复，评估疾病的发展及预后。

NSE是一种参与糖酵解的特异性关键酶，特异性存在于神经元和神经内分泌细胞中，脑损伤时神经细胞变性或坏死，NSE即以最快的速度由崩解、破坏的细胞中释放而出。NSE不仅在细胞受损的早期快速表达，而且是较灵敏的临床观察指标之一[4-5]。据相关文献报告[6]，脑组织受损后血液、脑脊液中NSE峰值出现在伤后8 h左右，随后逐渐趋向正常状态，在伤后2 d时间段内脑脊液水平再次上升并达高峰，而血液中NSE浓度再出现升高趋势需延迟至伤后2～11 d，且血NSE水平较脑脊液中水平低。本研究显示，病毒性脑炎患儿血清NSE水平在脑损伤后开始升高，在72 h达到高峰，其血清水平低于急性期脑脊液NSE水平，恢复期则血清、脑脊液NSE水平均下降，说明通过血清、脑脊液NSE含量测定有助于疾病的诊断，并能反映脑损伤的严重程度。

S100B蛋白是一种低分子量(9 000～13 000)的钙结合蛋白，因其在中性pH值硫酸铵中溶解度为100%而得名，特异性地存在于中枢神经胶质细胞内，是脑损害的敏感指标。S100B与NSE均是脑损伤的特异性标志物，NSE是神经元的标志物，S100B蛋白是神经胶质细胞的标志蛋白，是脑组织特异性蛋白。当胶质细胞和神经元被破坏时，S100B蛋白就进入脑脊液。国外文献显示[7]，S100B蛋白在脑损伤后1 d内出现，在48～72 h内达到高峰，S100B蛋白阳性细胞的面积增加与脑组织损伤的程度、时间长短呈正相关。Petzold等[8]研究发现，病毒性脑炎患儿血清、脑脊液中S100B蛋白含量随病情变化，急性期显著高于恢复期，重症组显著高于轻症组，血清、脑脊液S100B蛋白含量呈正相关，与李树军等[9]的研究结果相同。本组研究结果的变化趋势与上述结果相同。结合本组研究，病毒性脑炎患儿血清S100B水平在脑损伤后72 h明显升高并达到高峰，且急性期显著高于恢复期，表明病毒性脑炎患者的病理过程中有胶质细胞的损害，提示S100B蛋白可以作为小儿病毒性脑炎脑损害的生化标志物，可在一定程度上用于对患儿病情和预后的判断。

大量研究提示，亚低温能显著降低机体新陈代谢及组织器官氧耗，促进有氧代谢，改善微循环，降低受损脑组织的氧耗量，从而减轻脑缺血缺氧的程度，阻止继发性损伤的发展[10-11]。亚低温治疗是目前唯一在临床研究中证实有效的脑保护措施。有研究报道[12]，应用亚低温治疗重型颅脑损伤患者可明显改患者的情况，降低死亡率。本研究发现，在常规治疗基础上加用亚低温治疗，能明显改善重症病毒性脑炎患儿临床症状，缩短住院时间(P<0.05或P<0.01)。并且，亚低温治疗组患儿血清NSE及S100B水平的升高速度及峰值均明显低于常规治疗组，治疗后48、72 h及治疗后10 d，血清NSE、S100B水平较常规治疗组明显下降，提示脑组织神经元及胶质细胞的损坏较常规治疗组明显减轻。本研究发现，亚低温治疗还可显著降低患儿脑脊液NSE、S100B水平(P<0.05或P<0.01)，提示亚低温治疗对病毒性脑炎有一定的神经保护作用，可减少神经元及神经胶质细胞的变性、坏死。

综上所述，在重症病毒性脑炎治疗中，在常规治疗的基础上，早期应用亚低温可降低患儿的血清及脑脊液NSE、S100B水平，并能明显改善患者综合状态。亚低温治疗重症病毒性脑炎是一种切实可行的方法，值得临床应用和推广。

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(2016-12-14 收稿)

Influence of Mild Hypothermia on Expression of NSE and S100B in Children with Severe Viral Encephalitis

Chen Feng，Zhang Furong△，Sun Jimingetal

IntensiveCareUnit，WuhanChildren’sHospital(WuhanMaternalandChildHealthcareHospital)，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430016，China

Objective To investigate effect of mild hypothermia on nearon-soecific enolase (NSE)and S100B in serum and cerebrospinal fluid (CSF) of children with severe viral encephalitis.Methods Eighty-three children with severe viral encephalitis were randomly divided into 2 groups：mild hypothermia group and regular therapy group.Mild hypothermia group

cooling(32-35℃)for 3-10 days within 24 h.Control group received ordinary treatment.The clinical symptoms and encephalogram were observed before and after therapy.The contents of NSE and S100B in the serum and CSF were detected by ELISA.Results ① Compared with regular therapy group，symptom persisting time，Glasgow Coma Scale (GCS) and hospitalization time of mild hypothermia group were decreased significantly (P<0.05 orP<0.01).② There were no statistical differences in NSE and S100B protein serum levels at 0 h and 24 h post mild hypothermia treatment(P>0.05).But NSE and S100B protein serum levels were significantly lower in the mild hypothermia group than in the regular therapy group at 48 h，72 h post mild hypothermia treatment(P<0.05 orP<0.01).③ After 3-10 days of mild hypothermia treatment，children’s CSF S100B protein and NSE levels of the mild hypothermia group were significantly decreased，compared with the regular therapy group(P<0.05 orP<0.01).Conclusion The treatment of mild hypothermia can reduce serum and CSF S100B protein and NSE levels，and improve the clinical symptoms of children with severe viral encephalitis.

viral encephalitis； mild hypothermia； nearon-soecific enolase； S100B

*武汉市卫生计生委医疗卫生科研项目(No.WX14B23)

R512.3

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.03.010

陈 锋，女，1978年生，医学博士，E-mail：jmnba@163.com

△通讯作者，Corresponding author，E-mail：792523496@qq.com