分光光度法测定板蓝根颗粒中水杨酸的含量

李梦瑶，申婧翔

（长治学院 化学系，山西 长治 046011）

分光光度法测定板蓝根颗粒中水杨酸的含量

李梦瑶，申婧翔

（长治学院 化学系，山西 长治 046011）

采用可见分光光度法，在pH=2.4与硫酸铁铵做显色剂的条件下，水杨酸与Fe3+生成的紫红色络合物在λ=526 nm处有最大吸收，并对实验条件进行优化。标准曲线法得线性方程为：A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927，吸光度与浓度呈良好的线性关系。板蓝根中水杨酸的含量为1.36×10-5g/mL，平均回收率为92.18%。

水杨酸；板蓝根；分光光度法

1 引言

板蓝根作为中国传统中药，具有清热、解毒、凉血、利咽之功效，常用于治疗细菌感染性疾病和病毒性疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切，是清热解毒类中药的代表药物。研究表明，板蓝根的有机酸成分能够清除体内的过氧自由基和内毒素，从而避免了发烧、发热现象，保护机体不受高烧高热的伤害。水杨酸是板蓝根有机酸的主要成分之一，目前已经从板蓝根中得到分离和确认[1]。

目前对于游离水杨酸的测定，常用的方法有高效液相色谱法[2-3]、电化学方法[4]、紫外分光光度法[5-6]等。但对于可见分光光度法的研究较少，仅限于标准曲线的绘制。文章采用了可见分光光度法，用硫酸铁铵溶液作显色剂来测定游离水杨酸的含量。该方法不仅可以消除湿度、温度等环境对测定结果的影响，而且具有快捷、准确、重现性好等优点[7]。

2 实验部分

U-2910型紫外分光光度计，日立；PHS-3BW型pH计，上海般特仪器有限公司；旋转蒸发仪，艾卡（广州）仪器有限公司。

板蓝根颗粒，广州白云山和记黄埔中药有限公司；浓盐酸（分析纯），永飞化学试剂有限公司；浓硫酸（分析纯），天津市凯通化学试剂有限公司；无水乙醇（分析纯），天津市凯通化学试剂有限公司；冰乙酸（分析纯），天津市大茂化学试剂厂；水杨酸（分析纯），天津市大茂化学试剂厂；硫酸铁铵（分析纯），天津市凯通化学试剂有限公司；氢氧化钠（分析纯），天津市凯通化学试剂有限公司；酒石酸（分析纯），天津市大茂化学试剂厂。

3 结果与讨论

3.1 实验条件的优化

3.1.1 最大吸收波长的确定

分别准确量取0.01 mol/L的水杨酸标准溶液1.50 mL和0.01 mol/L的硫酸铁铵标准溶液3.75 mL于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，以硫酸铁铵标准溶液作为参比液，测定其在400～800 nm的吸光度，得吸收曲线，如图1所示。由图1可知：该络合物的最大吸收波长为526nm。

3.1.2 pH条件的确定

取0.01 mol/L的水杨酸标准溶液1.50 mL、0.01 mol/L的硫酸铁铵标准溶液3.75 mL于50 mL容量瓶中，并用配制的pH值分别为1.5、2.0、2.4、3.2、3.6、4.0、4.5的CH2COOH-CH2COONa缓冲溶液稀释到刻度，以硫酸铁铵溶液作为参比液，测其吸光度，并做出吸光度随pH变化的曲线A-pH，如图2所示。

络合物的组成随pH值的变化较大，尤其是当pH值过大时，稀硫酸铁铵溶液会遭到严重的水解，因此会影响到吸光度的测定。由图2可知：当pH值在2.0～2.4时吸光度较大，并且在pH是2.4时达到最大值，为最佳pH测定值。

图1 水杨酸铁络合物的吸收曲线

图2 A-pH曲线

3.1.3 络合物配比的确定

采用了摩尔系列法确定显色剂用量从而测定络合物的络合比。取0.01mol/L的水杨酸溶液（SA）和0.01mol/L的硫酸铁铵溶液共6 mL，分别按体积比为 0.20、0.33、0.50、0.71、1.00、1.40、1.60、2.0 0、3.00、5.00量取，稀释且定容至50 mL容量瓶中，用硫酸铁铵溶液作为参比液，测定其吸光度。绘制A～[n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）]曲线，如图3所示。

图3 吸光度随摩尔比变化曲线

由图3可知：当n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）是2时，该体系会有最大吸光度，其络合物的稳定络合比为2；当n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）小于2时，A随着物质的量比的增大相应的增大，由朗伯比尔定律可以知道，体系中的络合物的浓度在这个过程中逐渐增大；当n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）大于2时，吸光度随之减小，也就是络合物的浓度在减少。所以取其络合比为2。

3.1.3 显色时间的确定

取0.01 mol/L的稀硫酸铁铵标准溶液3.75 mL、0.01 mol/LSA标准溶液1.50 mL定容于50 mL容量瓶中，放置不同的时间后测定其吸光度随时间的变化关系，如图4所示。

图4 A-t曲线

由图4可知：当放置时间在5～60 min内吸光度比较稳定，但在测定过程中，40 min后会发现溶液开始稍微显浑浊，这可能是稀硫酸铁铵水解所导致。由此可知，该络合反应最佳显色时间为5min。

3.2 标准曲线的绘制

精确量取0.01 mol/L的3.75 mL稀硫酸铁标准溶液和不同体积的水杨酸（SA）标准溶液于50 mL容量瓶中，用pH=2.4的缓冲溶液将其定容配制成不同浓度的SA-NH4Fe（SO4）2溶液。以稀硫酸铁铵溶液作参比液，分别测定每组溶液的吸光度，并绘制标准曲线。如图5所示。线性方程为：A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927，线性关系良好。

图5 A-c标准曲线

3.3 精密度试验

精确量取0.01vmol/L水杨酸标准溶液1.00 mL、0.05%酒石酸溶液1.00 mL和0.01 mol/L的硫酸铁铵标准溶液1.00 mL于50 mL容量瓶中，然后用pH为2.4的缓冲溶液稀释至刻度摇匀，每隔5 s测其吸光度值，共测定9次，所得数据如表1所示，求出其相对标准偏差RSD为0.59%。由RSD可以知道精密度良好。

表1 精密度测定数据

3.4 样品测定

准确称取板蓝根粗粉4.0203 g，用50 mL70%乙醇超声提取两次，每次30 min，将两次的提取液合并，并减压浓缩到稀膏状，再用70%乙醇分次洗涤后定容到50 mL容量瓶中，用0.45 um微孔滤膜滤过，得板蓝根待测液。量取10.00 mL于50 mL容量瓶中，加入3.75 mL0.01 mol/L的硫酸铁铵，用pH为2.4的缓冲溶液稀释至刻度摇匀并测其吸光度。所得数据如表2所示。

由表2可知：板蓝根待测液中水杨酸含量为1.36×10-5g/mL。

表2 水杨酸含量测定结果

3.5 回收率实验

在4个50 mL的容量瓶中各自加入板蓝根待测液2.00 mL，并标序，按表3加入0.01 mol/L水杨酸标准溶液（SA），然后加入0.01 mol/L的稀硫酸铁铵标准溶液3.75mL，稀释至刻度并测吸光度。测定结果如表3所示。由表3可知：平均回收率为92.18%，RSD为7.92%。

表3 回收率测定结果

4 结论

结果表明，测定该络合物的吸光度的最佳条件为：吸收波长为526 nm，pH值为2.4，显色时间为5 min，络合比为2。在最佳条件下测系列水杨酸标准溶液的吸光度，得标准曲线方程为 A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927。精密度测定中，RSD为0.59%。回收率测定中，平均回收率为92.18%，RSD为7.92%。求得板蓝根中水杨酸含量为1.36×10-5g/mL。该方法不仅快捷和准确而且重现性好，可获得满意结果。

［1］施峰，安益强，贾晓斌，等.不同产地板蓝根药材中水杨酸量的比较［J］.中草药，2009，40（2）：271-275.

［2］年四辉，李蓝，刘丽敏，等.HPLC法测定板蓝根及其制剂中水杨酸苯甲酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（21）：92-95.

［3］陈新善，孔爱英.HPLC法测定阿司匹林肠溶片中游离水杨酸含量［J］.中医药事，2003，17（8）：505-507.

［4］罗红梅，廖钫，谭宝玉，等.水杨酸在多壁碳纳米管修饰电极上的电化学行为及其测定［J］.分析科学学报，2009，29（6）：665-668.

［5］李娟.紫外分光光度法测定ASP肠溶片中游离水杨酸含量［J］.现代医药卫生，2010，26（15）：2267-2268.

［6］陈理，栗家言，胡红.紫外分光光度法测定水杨酸滴耳液中水杨酸的含量［J］.现代医药卫生，2008，24（6）：916-917.

［7］张金磊.稀硫酸铁铵分光光度法测定水杨酸的含量［J］.广州化工，2011，39（22）：70-72．

（责任编辑 王璟琳）

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1673-2014（2017）02-0014-03

2016—12—10

李梦瑶（1989— ），女，山西长治人，助理实验师，主要从事碳量子点及荧光小分子探针性能研究。