对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值评估

程 田，刘献华，张清萍，唐振林,宋文忠

(四川省医学科学院·四川省人民医院 核医学科，四川 成都610072)

对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值评估

程 田，刘献华，张清萍，唐振林,宋文忠

(四川省医学科学院·四川省人民医院 核医学科，四川 成都610072)

目的 对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值进行评估。方法 选择186例良性肝病和79例肝癌患者的血清。通过偶联了小扁豆凝集素(LCA)的微量离心柱分离、洗脱获得AFP-L3，应用化学发光微粒子免疫分析法检测AFP和AFP-L3水平，计算AFP-L3占AFP的百分比即AFP-L3%。 结果 肝细胞癌组血清AFP、AFP-L3和AFP-L3%均高于良性肝病组(P<0.01)；两组患者的AFP-L3与AFP水平均呈正相关关系(r=0.729，P<0.01)；而AFP-L3%与AFP水平均无相关关系(r=-0.125，P>0.05)；AFP，AFP-L3和AFP-L3%的ROC曲线下面积大小分别是0.64,0.79和0.92；AFP-L3%诊断肝细胞癌灵敏度是82.3%，特异度是92.4%，YOUDEN指数为0.747，阳性预测值为85.5%，阴性预测值为92.5%。结论 甲胎蛋白异质体(AFP-L3%)作为肝细胞癌的诊断指标明显优于AFP，值得临床推广应用。

甲胎蛋白异质体；肝细胞癌；微量离心柱法

(ChinJLabDiagn,2017,21:0948)

原发性肝细胞癌是我国常见的一种恶性肿瘤，发病率排名第四位，约为28.7/10万。甲胎蛋白(α-Fetoprotein，AFP )作为肝细胞癌的肿瘤标志物在临床应用已久，但一些良性肝病如：慢性肝炎、肝硬化等，AFP水平往往也会升高，造成对肝细胞癌鉴别困难。现已知AFP分子存在三种糖蛋白形式：AFP-L1，AFP-L2和AFP-L3。其中AFP-L3由肝癌细胞生成，在血清中的水平随着癌细胞增殖呈线性升高，对肝细胞癌的诊断有很高的特异性[1,2]。1999年第四届全国肝癌学术会议上建议AFP-L3作为肝细胞癌诊断标记物应用于临床。本研究选择265例良恶性肝病患者血清，应用微量离心柱法分离AFP-L3，检测AFP和AFP-L3水平，并对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值进行评估。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部病例来源于2012年2月至2013年6月四川省人民医院门诊和住院患者。其中肝细胞癌 79例，男性57例，女性22例，年龄38-73岁，平均47.03±5.79岁；良性肝病186例(慢性肝炎132例，肝硬化54例)，男性143例，女性43例，年龄24-60，平均45.32±4.22岁；诊断符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》以及中华人民共和国卫生部编的《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》中的诊断标准。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集静脉血后离心取血清，3 h内检测。

1.2.2 检测方法 通过微量离心柱法获得含AFP-L3分离液；应用化学发光微粒子免疫分析技术检测AFP和AFP-L3，计算出血清AFP-L3水平以及占血清AFP的百分比即AFP-L3%。血清AFP和分离液中AFP-L3水平检测仪器为美国雅培i2000化学发光免疫分析仪，试剂为雅培配套药盒；微量离心柱装置由北京热景生物技术有限公司提供。

1.3 统计学处理

用SPSS13.0软件进行。因AFP、AFP-L3和AFP-L3%为非正态分布数据，采用Kruskal-Wallis H检验；AFP-L3,AFP-L3%与AFP的相关性采用线性相关分析；ROC曲线下面积比较用Z检验。以P<0.01有统计学意义。

2 结果

2.1 肝细胞癌组与良性肝病组血清AFP、AFP-L3和AFP-L3%水平的比较 见表1。肝细胞癌组血清AFP、AFP-L3和AFP-L3%均高于良性肝病组，差异有统计学意义(P<0.01)。

表1 肝细胞癌和良性肝病血清AFP、AFP-L3和AFP-L3%的结果

注：与肝细胞癌组比较,*χ2=23.54，P<0.01；**χ2=99.84，P<0.01；***χ2=120.87，P<0.01

2.2 肝细胞癌组以及良性肝病组AFP-L3、AFP-L3%与AFP相关性分析 AFP-L3值与AFP值相关性分析见图1。肝细胞癌组：AFP-L3值与AFP值呈正相关关系(r=0.722，P<0.01)；良性肝病组：AFP-L3值与AFP值呈正相关关系(r=0.729，P<0.01)。AFP-L3%与AFP值相关性分析见图2。肝细胞癌组：AFP-L3%与AFP值无相关关系(r=-0.025，P>0.05)；良性肝病组：AFP-L3%与AFP值无相关关系(r=0.094，P>0.05)。

图1 AFP-L3值与AFP值的相关性分析

图2 AFP-L3%与AFP值的相关性分析

2.3 AFP、AFP-L3和AFP-L3%ROC曲线以及相关参数 见表2，图3。ROC曲线下面积(AUC)比较：AFP-L3%远高于AFP和AFP-L3，该差异有统计学意义(P<0.01)；敏感度和特异度比较：AFP-L3%最高；AFP最低；Youden’s index(正确诊断指数)比较:AFP-L3%最高；AFP最低。阳性预测值比较：AFP-L3%最高；AFP最低；阴性预测值比较：AFP-L3%最高；AFP最低。

3 讨论

甲胎蛋白(AFP)作为肝细胞癌的诊断及疗效观察指标已被医学界广泛认可。一般来说，血清中AFP长期保持高水平以及AFP升高程度的明显增加，则诊断为肝细胞癌的可能性也随之增大。而临床上很多的良性肝病如：慢性肝炎和肝硬化患者血清AFP也会不同程度升高，与部分肝细胞癌血清AFP水平重叠[3]。因此，仅依靠AFP的升高不能鉴别良恶性肝病。研究发现，AFP含有不同糖链，可分为3型：AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3。其中AFP-L3主要来源于肝癌细胞，与肝癌细胞岩藻糖化有关[4]，较客观地反映肝细胞恶变状况，可作为鉴别良恶性肝病，预警肝癌以及观察疗效的潜在指标[5，6]。

表2 AFP、AFP-L3和AFP-L3%ROC曲线参数的比较

*：AFP,AFP-L3和AFP-L3%两两比较，P值均<0.01；

图3 AFP、AFP-L3和AFP-L3%的ROC曲线

我们采用了微量离心柱法[7]对AFP-L3进行分离，然后检测AFP-L3水平。本研究显示肝细胞癌患者血清AFP，AFP-L3和AFP-L3%明显高于良性肝病患者。肝细胞癌患者血清AFP水平的明显升高，说明高水平AFP对肝细胞癌的诊断中仍有帮助。AFP-L3的升高与肝癌细胞生成较多AFP-L3分子有关，体现了良恶性细胞的异质性。从图1A可以看出，血清AFP-L3值和AFP值正相关， 即当患者血清AFP升高时，AFP-L3水平也相应升高，该趋势也存在于良性肝病组,限制了AFP-L3水平对肝细胞癌的诊断价值[8]；从图1B可以看出，AFP-L3%与AFP无相关关系，AFP-L3%的升高不依赖于AFP的升高，只与肝病良恶性有关；即肝细胞癌患者血清AFP水平低中度升高时，AFP-L3%就可能明显升高，能提前预警肝癌的发生[5，9]。

通过ROC曲线图我们发现，AFP-L3%的AUC为0.92，远高于AFP和AFP-L3，对肝细胞癌的诊断价值很高[10]。以本研究结果的CUT OFF值作为阳性判断标准，AFP-L3%对HCC诊断的灵敏度和特异度均优于AFP[11]；Youden’s指数比较中，AFP-L3%的最大，说明其筛查的效果最好；AFP-L3%的阳性预测值和阴性预测值高于AFP，说明其诊断试验的收益高于AFP。

综上所述，甲胎蛋白异质体(AFP-L3%)作为肝细胞癌的诊断指标明显优于AFP，值得临床推广应用。

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The value of detecting α-Fetoprotein variants with a micro-spin column method in differential diagnosis of hepatocellular carcinoma and benign liver diseases

CHENGTian，LIUXian-hua，ZHANGQing-ping，etal.

(DepartmentofNuclearMedicine,SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople'sHospital,Chengdu610072,China)

Objective To evaluate the diagnostic value of detecting α-Fetoprotein variants for discriminating hepatocellular carcinoma and benign liver diseases.Methods α-Fetoprotein variants from 265 patients with liver diseases (hepatocellular carcinoma 79; benign liver diseases 186) were isolated with micro-spin column equipped lens culinaris agglutinin (LCA).The levels of AFP and AFP-L3 were then detected by ARCHITECT i2000 System,and the proportions of AFP-L3 (AFP-L3%) were calculated.Results AFP,AFP-L3 and AFP-L3% in patients with hepatocellular carcinoma was significantly higher than that in patients with benign liver diseases (P<0.01).No significant relationship beween AFP-L3% and AFP (r=-0.125，P>0.05);The area under curve (AUC) of AFP，AFP-L3 and AFP-L3% were respectively 0.64,0.79 and 0.92.The sensitivity of AFP-L3% in HCC diagnosis was 82.3% and the specificity was 92.4%；YOUDEN index of AFP-L3%was 0.747，positive predictive value was 85.5%，negative predictive value was 92.5%.Conclusion AFP-L3 (AFP-L3%) is of clinical significance for discriminating hepatocellular carcinoma and benign liver diseases.

α-Fetoprotein variants;hepatocellular carcinoma;micro-spin column method

1007-4287(2017)06-0948-03

R735.7；R730.45

A

程田(1973-)，男，主管技师，医学硕士，从事肿瘤标志物检验和研究工作。

2016-09-13)