西安市鸡新城疫免疫抗体水平调查与分析

苏 琪，李小丽

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2.西安市灞桥区畜牧技术推广中心,陕西西安 710038； 3.西安市灞桥区动物卫生监督所，陕西西安 710038)



兽医临床

西安市鸡新城疫免疫抗体水平调查与分析

苏 琪1,2，李小丽3

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2.西安市灞桥区畜牧技术推广中心,陕西西安 710038； 3.西安市灞桥区动物卫生监督所，陕西西安 710038)

为更好地了解全面免疫后鸡群抗体产生情况和抗体滴度分布规律，对西安市不同区县、不同来源的鸡群进行了新城疫免疫抗体监测。从2011到2015年，从西安市下辖的未央区、高陵区、长安区、灞桥区、阎良区、户县、周至县及蓝田县等区县共采集血样3 465份，涉及规模以上养鸡场120个，散养户10个，畜禽交易市场3个，其中合格样品3 227份。对采集来的血样分离血清，采用血凝试验和血凝抑制试验检测抗体滴度，对监测结果按照依据进行分类统计。结果表明，从2011年到2015年，西安市不同区县鸡群春秋两季新城疫免疫抗体合格率均达到了70%以上，平均合格率为93%，免疫效果良好。5年的数据和春秋两季抗体合格率监测结果表明，采用合理的免疫程序和规范操作，全面免疫后鸡群新城疫抗体保护水平较高，采用的免疫程序可以作为参考程序推广应用。

鸡；新城疫；免疫；抗体；调查

目前，我国规定对新城疫(Newcastle disease,ND)进行全面免疫预防，主要采取接种疫苗的方法进行本病的防控。为了解和掌握西安市不同区县鸡群新城疫免疫情况，评价疫苗接种后的免疫效果，制定科学的免疫程序，笔者依据对西安市13个区县鸡群新城疫抗体水平监测与分析结果，对新城疫免疫接种效果进行评价，为进一步做好新城疫防控工作提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 2011年至2015年从西安市下辖的未央区、高陵区、长安区、灞桥区、阎良区、户县、周至县及蓝田县等区县共采集鸡血样3 465份。以2015年为例，共采集样品796份，其中春季采集439份，秋季采集357份。涉及规模化养鸡场(存栏大于2万羽)120个，散养户10个，畜禽交易市场3个(西安市朱雀农产品交易中心、胡家庙农产品市场、城东农产品交易市场)。采血时将鸡保定好，翼下静脉采血，血液室温放置待其自然凝固后，1 800 r/min离心5 min分离血清，保存待检。

1.1.2 主要试剂 新城疫标准抗原及阴性、阳性血清，青岛易邦生物工程有限公司产品，批号：兽药生字[2007]150138082；2月龄以下，鸡接种用鸡新城疫活疫苗(La Sota株)，杭州荐量兽用生物制品有限公司产品，批准文号：兽药生字[2012]110542007； 2月龄以上鸡接种用鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)，杨凌绿方生物工程有限公司产品，批号：兽药生字[2011]270022004；1%鸡红细胞，自制；其他试剂均为分析纯。

1.1.3 主要仪器 微量振荡器(型号：XK95-1，编号：BQDJ-YQ-003)；多道移液器(型号：Z1768，编号：BQDJ-YQ-032)；96孔“V”型微量反应板；台式离心机等。

1.1.4 主要溶液配制 磷酸盐缓冲液：NaCl 8 g，NaH2PO41.561 g，Na2HPO43.582 g，加蒸馏水定容至1 000 mL，调pH至7.2。

1%鸡红细胞悬液：无菌吸取3.8%的枸橼酸钠溶液，从非免疫鸡翼下静脉采血，加适量磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后，3 000 r/min离心5 min～10 min，弃去上清液，再用PBS洗涤3次。

1.2 方法

按照农业部《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)血凝和血凝抑制试验法进行检测。

1.3 数据分析

文中部分数据采用SPSS Statistics 17.0软件的卡方检验程序进行显著性检验。

2 结果

2.1 2011年-2015年西安市不同区县鸡群新城疫免疫抗体合格率统计结果

2.1.1 抗体合格率 目前，国家要求对新城疫进行全面免疫。免疫必须依据农业部制定的免疫方案进行操作，所用疫苗来源必须符合要求。西安市13个区县2011年-2015年不同鸡群新城疫免疫抗体检测结果见表1。从2011年到2015年，西安市13个区县鸡群新城疫免疫抗体合格率均达到了70%以上，平均合格率为93%，免疫效果良好。其中最高合格率出现在2014年，为97%；2015年的免疫抗体合格率最低，为89%，但也超过了国家农业部规定的70%的标准。由此可见，虽然每年对新城疫都进行了春、秋两次全面免疫，经检测的免疫抗体合格率也都达到了标准，但合格率有高有低，不够稳定,差异明显(2=37.725，P<0.01)。

表1 2011年-2015年西安市13个区县鸡群新城疫免疫抗体合格率

2.1.2 春、秋两季抗体合格率 西安市一年四季均有新城疫病例发生，以春季和秋季发病率最高，夏季次之，冬季最低。经分析，从2011年到2015年，西安市春秋两季新城疫免疫抗体总体合格率超过70%，平均合格率为93%，效果良好。春季的免疫抗体合格率见图1，由图1可知，2012年和2014年抗体合格率最高，达到了99%，2013年最低，为88%(P<0.05)；秋季的免疫抗体合格率见图2， 2013年秋季的抗体合格率最高，达到了99%，2011和2015年秋季的抗体合格率最低，为88%(P<0.05)，但均超过了70%的标准。总体来看，虽然春、秋两季采集的样品数量和合格数有所差别，但免疫抗体合格率大致相同。

图1 2011年-2015年西安市春季新城疫免疫抗体合格率

图2 2011年-2015年西安市秋季新城疫免疫抗体合格率Fig.2 The qualified rates of immune antibodies against NDV in autumn between 2011 and 2015

2.2 2015年西安市不同区县鸡群新城疫免疫抗体合格率统计结果

2.2.1 不同检测点免疫抗体合格率 2015年从西安市不同区县鸡群共采集样品796份，涉及规模化鸡场120个，散养户10个，畜禽交易市场3个，将796份样品按照不同检测点分为3组，其中规模化养殖场检测数为589份，散养户128份，畜禽交易市场79份，样品检测结果见表2。3个不同检测点免疫抗体平均合格率为89%，均超过了规定的70%以上，其中规模场样品的最高，市场的其次，散养户的最低，不同检测点抗体合格率差异较大(P<0.05)。

表2 2015年西安市不同检测点鸡群新城疫免疫抗体合格率统计结果

2.2.2 不同日龄段鸡群新城疫免疫抗体合格率统计结果 将796份样品按照幼雏、青年鸡、成年鸡分成3组统计抗体合格率，结果见表3。从表3可以看出，在鸡群免疫以后，成年鸡的免疫抗体合格率最高，其次为青年鸡的，幼雏的最低(P<0.05)。

表3 不同日龄段鸡群新城疫免疫抗体合格率统计结果

2.2.3 疫苗接种时间与抗体水平 依据监测年份和疫苗接种时间对抗体合格率进行分析，免疫接种后3周时，抗体水平达到26，免疫接种后6周时能维持较高水平，而免疫接种后12周后逐渐下降，与此前报道的接种后5周～7周抗体水平达到最高峰相似。如果将检测结果依据抗体滴度分布，抗体水平处于25、26的样品比例较大(表4)。

2.2.4 疫苗接种次数和抗体水平 参照样品采集的有关记录和档案，免疫程序如下：初免在14日龄左右；二免在28日龄左右；三免在20个月左右进行。且免疫3次后抗体水平最高，持续时间较长(表5)。

2.2.5 免疫方法与抗体水平 笔者将796只健康鸡中的150只随机分为A、B、C共3组，每组50只。试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂，A组注射1羽份疫苗，B组注射2羽份疫苗，C组进行饮水免疫。根据检测的抗体水平分析，B组的免疫抗体水平最高，A组次之，C组最低，说明注射2羽份疫苗鸡群的抗体水平要高于注射1羽份疫苗鸡群的。饮水免疫抗体水平最低是由饮水免疫的不稳定性造成的，饮水免疫应激小，免疫水平不均，而且相对于直接注射疫苗而言，比较浪费，因此，一般不建议使用(表6)。

表4 免疫时间长短与抗体水平

表5 疫苗接种次数与抗体水平

表6 免疫方法与抗体水平

3 讨论

通过对2011年到2015年西安市鸡群新城疫免疫抗体合格率、春季和秋季抗体合格率分析来看，虽然每年对鸡群都进行了新城疫的春秋两次全面免疫，免疫抗体合格率有高有低，但均超过了国家农业部规定的70%以上的标准[1-2]。

针对2015年采集的样品，分别从不同检测点、不同日龄段鸡群讨论新城疫免疫抗体合格率。从不同检测点来看，规模化鸡场抗体合格率最高，市场其次，散养户最低。规模养殖场免疫效果普遍好于散养户，原因主要是因为规模养殖场防疫意识更强，思想上更积极主动，由专人专职负责防疫，防疫效果有保障，能投入大量的人力物力，且能够按照免疫程序严格执行，而目前散养户还不能做到规范的免疫程序，容易造成盲目免疫，达不到理想的免疫效果[3]；从不同日龄段来看，成年鸡的免疫抗体合格率最高，其次为青年鸡，幼雏最低，推测可能是因为幼雏抗病力较差，免疫后抗体水平较低，所以要高度重视幼雏的免疫接种工作[4]。

根据2015年采集的样品监测结果，免疫接种3周后，抗体滴度达到26，之后的6周均能维持较高水平，接种后12周抗体水平逐渐下降，这与赵娟等[5]报道的接种后5～7周抗体水平达到最高峰相似。2015年西安市采集的796份样品首免后仅有69份合格，说明首免使用油乳剂苗时不能有效刺激机体产生抗体。2次至3次免疫后，抗体水平达到最高，与刘颖等[6]报道的一致。

从不同免疫方法来看，注射2羽份疫苗鸡群的抗体水平要高于注射1羽份疫苗鸡群的，饮水免疫抗体水平最低，主要是由饮水免疫的不稳定性造成的，饮水免疫应激小，免疫水平不均，而且相对于直接注射疫苗而言，比较浪费，因此，一般不建议使用[7]。

检测中虽然各鸡场新城疫抗体合格率达到了有关要求，但少数个体抗体滴度依然较低，免疫失败，不但造成人力与财力的各种浪费，也增加了出现新城疫的可能性。其可能的原因是疫苗保存不当或者操作不规范[8]。西安市13个区县的动物疫病预防控制中心以及下一级的兽医防疫部门都能严格按照相关要求和规范领用、发放疫苗，但还是有一些地方由于地处山区、交通不便，疫苗的保存、运输条件不完善，部分鸡场的主人或防疫接种人员业务不熟练、不重视消毒工作，均可能导致免疫效果不够理想，这些因素都可能引起免疫失败[9]。另外也可能存在免疫抑制问题，鸡场中非传染性因素和传染性因素(如传染性法氏囊病病毒等)都会对新城疫的免疫形成免疫抑制。这些问题不但造成了新城疫非典型化或疫苗接种失败，而且还会导致机体对病原体易感性增强，造成病原的继发感染[10]。此外，一些鸡场管理不善，卫生条件较差，消毒不规范，饲料营养水平较低，致使鸡群体质虚弱，自身免疫功能明显降低，会导致抗体持续水平和免疫后抗体滴度均匀度不理想。最后，有人片面认为血凝抑制法检测的ND抗体水平代表实际免疫状况[11]。实际上，同一鸡群中的不同个体间抗体水平差异很大，NDV感染时，抗体水平低的鸡先发病，接着会传播给其他鸡甚至整个鸡群[12]。

新城疫抗体监测与评价是指导疫病防治工作重要举措之一，这项工作事关西安市甚至全国养禽业的健康发展和人民群众的身体健康，甚至事关社会的和谐稳定[13]。结合本次试验结果，笔者认为西安市鸡群新城疫的防控应采取以下措施：①要提高认识，加强宣传。必须清醒地认识到ND防控的重要性，坚持做好ND的日常流行病学调查与监测，并提高发病后处置能力。更为重要的是必须强化新城疫防控的宣传，不断提高从业者对新城疫的危害性的认识，提高从业者的整体素质，发动群众，群防群控。②要不断规范免疫程序，提高科学免疫水平。一直以来，疫苗免疫接种都是重要措施，建议今后将新城疫免疫纳入强制免疫的范围，提高免疫密度。特别要做好春、秋两次免疫工作，不断完善现行免疫程序，制定更加科学、规范的免疫程序[14]。③新城疫的预防，必须在高水平饲养管理的基础上严格执行防疫制度，强化动物卫生监督，定期消毒，杜绝病毒的进入。④动物卫生监督部门要依据相关法规加强监督，规范投入品管理，防止滥用药。同时要加强饲养管理，尽量做到全进全出。对新进场的鸡苗必须按要求隔离观察；对发生疫情的场子及时予以隔离甚至扑杀；对病死鸡必须严格无害化处理，坚决杜绝疫情进一步发展[15]。

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Investigation and Analysis of Immune Antibody Levels of Newcastle Disease Virus in Chickens of Xi'an City

SU Qi1,2, LI Xiao-li3
(1.CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，Yangling，Shaanxi，712100，China;2.AnimalHusbandryTechnologyPromotionCenter，BaQiaoDistrict,Xi'an，Shaanxi，710038,China;3.InstituteofAnimalHealthSupervision，BaQiaoDistrict,Xi'an，Shaanxi，710038,China)

This research was to monitor the chicken immune antibodies from different districts and channels in Xi'an.During 2011 to 2015,3465 blood samples were selected from 120 scaled chicken farms,10 private chicken farms,3 fowl trading markets in Weiyang,Gaoling,Chang'an,Baqiao,Yanliang,Hu,Zhouzhi and Lantian districts.The sera were separated,and the seral antibody titers were detected by HA and IH assays.The results showed that 3227 qualified samples were got during 2011 to 2015,the qualified rates of immune antibodies from different districts in Spring and Autumn were all over 70%,the average qualified rate was 93%.The data withinn 5 years showed that with reasonable immune process and standard operation,the chickens kept a better antibody titers after comprehensive immunization,the immune program could be popularized as a reference program.

Newcastle disease; immunization; antibody; investigation

2016-10-17

苏 琪(1986-)，女，陕西西安人，兽医硕士，主要从事畜牧技术推广工作。

S852.659.5

B

1007-5038(2017)06-0102-05