小鼠脂肪组织石蜡切片制作方法

2017-06-24董学易孙慧誌赵秀兰

临床与实验病理学杂志 2017年5期

董学易，孙慧誌，赵秀兰，赵楠，刘芳

小鼠脂肪组织石蜡切片制作方法

董学易1,2，孙慧誌1，赵秀兰1,2，赵楠1,2，刘芳1,2

脂肪组织；石蜡制片；HE染色

常规病理制片将脂肪组织和其他组织同时用手工或者自动脱水机进行脱水、透明、浸蜡、包埋，其它组织制成的蜡块切片完整，而脂肪组织制成的石蜡切片易空洞或缺损，较难切成完整的切片。优良的脂肪组织切片在病理临床诊断和科学研究中占有重要地位[1-2]，现阶段病理技术人员对脂肪组织切片存在困难[3]。我们在日常工作中对小鼠的脂肪组织进行多次实验，获得较为满意的脂肪组织切片，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂昆明系小鼠正常脂肪组织标本，10%中性福尔马林、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯，均购自天津致远公司。苏木精、伊红染液均购自北京中杉金桥公司。石蜡(熔点60～65 ℃)购自Leica公司。Leica RM2235型轮转切片机购自德国。

1.2 方法

1.2.1 石蜡包埋脂肪组织正常昆明系小鼠的脂肪组织标本10块，大小均为1.5 cm×1 cm×0.2 cm，实验组和对照组各5块，10块脂肪组织均用10%中性福尔马林固定36 h，对照组采用常规制片程序进行处理，实验组采用特殊处理制片程序进行处理。具体程序处理时间详见表1，浸蜡温度均为61 ℃。

表1 脂肪组织特殊处理与常规处理程序表

1.2.2 切片、染色实验组与对照组经两种不同方法处理后，用Leica RM2235型轮转切片机进行切片，切片厚4 μm。水浴锅温度42 ℃，烤片温度70 ℃，烤片2 h后行常规HE染色。

2 结果

脂肪组织经特殊程序处理后，肉眼可见脂肪组织的石蜡块完整，石蜡切片可见完整的脂肪组织(图1A、B)。镜下可见脂肪组织的细胞结构清晰透明，核质着色良好，无挤压和皱缩现象；细胞内的脂滴被溶解成一大空泡，胞核扁圆形，被脂滴推挤到细胞一侧，呈椭圆或多角形，有的连同部分胞质呈新月形，有的细胞则聚集呈蜂窝状(图1C)。实验组5例蜡块中，优质的HE染色切片达100%。

①A①B①C②A②B②C

图1 A.实验组脂肪组织的石蜡块，脂肪组织形态保持完整；B.实验组水浴锅中的石蜡切片可见完整的脂肪组织，无皱褶、无缺损；C.实验组脂肪细胞结构清晰，分界清楚，核质着色良好，细胞核被脂滴挤到一边，呈蜂窝状图2 A.对照组脂肪组织的石蜡块，脂肪组织形态保持完整；B.对照组载玻片上的石蜡切片可见明显的空洞和缺损，脂肪组织不完整；C.对照组脂肪组织结构不完整，有空洞，完整部分的脂肪细胞结构尚清晰，分界清楚

脂肪组织经常规程序处理后，肉眼可见脂肪组织的石蜡块完整(图2A)，与实验组无明显差异；但石蜡切片不完整，存在许多空洞及破损(图2B)。镜下可见脂肪组织形态不完整，仅部分脂肪细胞结构清晰，核质着色良好；可见细胞内的脂滴被溶解成一大空泡(图2C)。对照组5例蜡块中，无1例有完整的HE染色切片，结果均不合格。

3 讨论

优质的病理切片是保证临床准确诊断和科学研究的重要基础。由于脂肪组织特殊的结构，决定其必须延长在乙醇和二甲苯中的脱水、脱脂时间；只有脂肪组织中的水分彻底脱干净、油脂彻底溶解，才能保证后续的石蜡充分浸入脂肪组织中。在制片过程中需注意以下几点：(1)保证充分的乙醇和二甲苯脱水、脱脂时间；(2)充足的浸蜡时间，且温度不宜太高；(3)捞片水浴锅温度不宜太高。本方法可以适用于乳腺组织标本、脂肪瘤、皮肤等含脂肪比较高的标本，还可用于肥胖基因相关研究的小鼠标本。

本实验采用特殊程序处理脂肪组织，该方法简便实用，无需特殊的仪器与试剂，避免以往复杂的处理过程，如微波热固定、丙酮脱脂固定等程序[4-6]。本实验在保证切片质量的同时提高了工作效率，满足临床诊断和科学研究的需要，值得在科研和临床上推广。

[1] 王志宏，吴智春. 苍白二陈汤对代谢综合征模型大鼠脂肪组织NF-κB表达的影响[J]. 山东中医杂志, 2012,31(8):594-596.

[2] 魏艳华，曾铮. 脂肪组织常规制片的改进[J]. 临床与实验病理学杂志, 2015,31(4):467.

[3] 张健，王珏，朱礼国，刘涛. 处理不良的脂肪组织快速改良方法[J]. 临床与实验病理学杂志, 2006,22(4):406.

[4] 章栽良，顾天英，顾元忻. 脂肪组织HE制片的探讨[J]. 诊断病理学杂志, 2010,17(6):447.

[5] 高静娜，王银萍，郑彦. 病理HE制片中易出现问题的解决方略[J]. 吉林医学, 2011,32(20):4205-4207.

[6] 陈冬，俞千，陈靓烨，梁伟琼. 提高脂肪组织制片质量方法的改进[J]. 解剖学研究, 2016,38(1):78-79.

国家自然科学基金(81572872)

1天津医科大学病理学教研室，天津 3000702天津医科大学总医院病理科，天津 300052

董学易，女，硕士，实验师。E-mail: dxy7235202@126.com 赵秀兰，女，主任技师，通讯作者。E-mail: sunbaocun@aliyun.com

时间：2017-5-17 23:54 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.030.html

R 36