子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白的表达及其意义

敖梅红，孙仙娥，于小红，罗 美，程晓晓，熊 艳，李隆玉

子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白的表达及其意义

敖梅红1,2，孙仙娥2，于小红3，罗 美1，程晓晓2，熊 艳2，李隆玉1,2

目的 探讨核孔蛋白88(nucleoporin 88, Nup88)在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组化SP法检测20例正常子宫颈组织、20例子宫颈原位腺癌和60例子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白表达；分析Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌临床病理特征及预后的关系。结果 Nup88蛋白在子宫颈腺癌组织、子宫颈原位腺癌组织、正常子宫颈组织中的阳性率分别为78.3%(47/60)、45.0%(9/20)、10.0%(2/20)，在子宫颈腺癌组织中的表达最高(P<0.05)；Nup88蛋白表达与患者年龄(≤50岁或>50岁)、组织病理类型、肿瘤大小等无关(P均>0.05)；与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。Nup88蛋白阳性的子宫颈腺癌患者预后差。结论 Nup88蛋白可能与子宫颈腺癌的发生、发展有关，有望成为评估子宫颈腺癌生物学行为的指标之一。

子宫颈肿瘤；Nup88；预后；转移

子宫颈腺癌在子宫颈癌中的比例高达10%～34%[1-2]，近年逐渐呈上升及年轻化趋势[3]。子宫颈腺癌与子宫颈鳞状细胞癌相比诊断较为困难，预后也比子宫颈鳞状细胞癌差[4]。核孔蛋白(nucleoporins, Nups)是核孔复合物重要组成成分，除参与大分子的核质转运，其还在细胞增殖、细胞分化、信号转导、凋亡等生命过程中发挥重要的生理功能；可能通过多种途径增强肿瘤侵袭、转移。目前，国内外尚无Nup88蛋白在子宫颈腺癌中表达的报道。本文采用免疫组化SP法检测Nup88蛋白表达，分析其与子宫颈腺癌临床病理特征、生存的关系，为子宫颈腺癌的预后判断及靶向治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料 选取江西省妇幼保健院2005年1月～2010年12月手术切除的子宫颈腺癌60例和原位腺癌20例，另收集同期正常子宫颈组织20例作为对照。60例子宫颈腺癌患者年龄26～60岁，中位年龄43岁，平均43.3岁。子宫颈腺癌及子宫颈原位腺癌入组标准：(1)无合并其他癌症；(2)子宫颈腺癌患者系子宫颈腺癌IB期行子宫颈癌根治性手术，子宫颈原位腺癌行子宫颈锥切术。对照组以同期正常子宫颈组织20例，入组标准：(1)因子宫肌瘤行全子宫切除，经病理学诊断证实无子宫颈癌及癌前期病变者；(2)无合并其他癌症者；(3)既往无癌症史。

按WHO(2014)子宫颈肿瘤分类本组子宫颈腺癌病理类型：子宫颈腺癌普通型15例、黏液腺癌17例、绒毛状腺癌8例、内膜样癌9例、透明细胞癌8例、神经内分泌癌2例、中肾管癌1例；其中淋巴结转移或脉管癌栓15例。

1.2 免疫组化 Nup88兔抗人多克隆抗体购自艾博抗(上海)公司。免疫组化染色采用SP法，石蜡连续4 μm厚切片，常规脱蜡及水化，柠檬酸盐缓冲液高温修复抗原，阻断内源性过氧化物酶活性，滴加50 μL的Nup88兔抗人多克隆抗体(1 ∶50)，孵育，50 μL酶标抗小鼠/兔IgG聚合物，孵育30 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固。免疫组化结果由两名高年资病理医师采用双盲法阅片。

1.3 结果判定 Nup88以胞质呈棕黄色染色为阳性，按阳性细胞百分比标准：阳性细胞率<5%为(-),5%～25%为(+)，26%～50%为()，>50%为()；其中(-)为阴性，(+～)为阳性。每张切片观察5个高倍视野记录Nup88蛋白的表达。

1.4 随访 子宫颈腺癌和子宫颈原位腺癌患者于术后2年内每3～4个月复查1次，术后2～5年内每半年复查1次，术后5年后每年复查1次。随访以电话向患者及家属询问为主，另专门派一名医务人员在患者至门诊复查时进行询问登记。生存期自至死亡日期计算，随访时间以手术日期始，患者死亡或术后5年随访截止。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计数资料比较采用χ2检验或四格表Fisher确切概率法检验(样本量n<40或者理论频数T<1)；等级资料比较采用Mann-WhitneyU检验；生存分析用Kaplan-Meier法、绘制生存曲线图。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Nup88蛋白的表达 子宫颈腺癌组织、子宫颈原位腺癌组织、正常子宫颈组织中Nup88蛋白阳性率分别为78.3%(47/60)、45.0%(9/20)、10.0%(2/20)，子宫颈腺癌组织和子宫颈原位腺癌组织均高于正常子宫颈组织，子宫颈腺癌组织中的表达高于子宫颈原位腺癌组织，差异有统计学意义(P=0.000，表1，图1)。

表1 Nup88蛋白表达在不同子宫颈组织中的比较

2.2 Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌临床病理特征的关系 Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌患者年龄(≤50岁或>50岁)、组织病理类型、肿瘤大小等无关(P均>0.05)，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移或脉管癌栓有关(P均<0.05，表2)。

2.3 Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌预后的关系 60例子宫颈腺癌患者，随访60个月，9例失访，随访率为85%，13例患者死亡。分析发现Nup88蛋白阳性者预后比阴性者差；经Kaplan-Meier法统计，Nup88蛋白阳性者中位生存时间(49.33±2.65)个月，阴性者中位生存时间(56.00±3.83月)，两者相比差异无统计学意义(P=0.241，图2)。

表2 Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌临床病理特征的关系

*其他类型包括宫内膜样腺癌9例、绒毛状腺癌8例、透明细胞癌8例、神经内分泌癌2例、中肾管癌1例

ABC图1 Nup88的表达，SP法：A．在正常子宫颈组织中呈阴性；B．在子宫颈原位腺癌组织中呈阳性；C．在子宫颈腺癌组织中呈阳性

3 讨论

目前由于子宫颈细胞学筛查的广泛开展，子宫颈浸润性鳞状细胞癌的发病率明显下降[5]；但子宫颈腺癌发病率呈逐年上升趋势，尤其是年轻子宫颈癌患者[6]。子宫颈腺癌与子宫颈鳞状细胞癌相比诊断较为困难，预后也比子宫颈鳞状细胞癌差[4]。探讨子宫颈腺癌组织中的某些肿瘤标志物表达，或许可能为子宫颈腺癌的预后判断及靶向治疗提供新思路。

图2 Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌的生存关系

核孔复合物是贯穿核膜、物质进出细胞核的主要通道，介导大分子物质在细胞质与细胞核之间的穿梭运动。Nups是核孔复合物的重要组成成分，除参与大分子的核质转运，其还在细胞增殖、细胞分化、信号转导、凋亡等生命过程中发挥重要的生理功能；其极有可能是通过多种途径增强肿瘤侵袭、转移。Nup88属于Nups，其高表达与肿瘤的关系最为密切。王浩等[7]通过对有关Nup88与恶性肿瘤相关的文献进行综述，认为多数恶性肿瘤中Nup88过表达，在肿瘤的发生、发展及淋巴结转移及预测预后中具有重要的临床价值。Nup88在人类多种实体恶性肿瘤，如胃癌、结直肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌呈特异性高表达，提示Nup88可能是恶性肿瘤的特异性标志物[8-9]。

本组实验显示Nup88在子宫颈正常组织、子宫颈原位腺癌、子宫颈腺癌组织中表达不同，随着病变的进展阳性率增加。李玉强等[10]分析Nup88在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中的表达，亦发现Nup88蛋白及mRNA的表达与乳腺癌细胞株的侵袭性有关。王园园等[11]发现结直肠癌组织和淋巴结转移癌中Nup88蛋白阳性率均高于癌旁无瘤黏膜组织。Nup88在子宫颈腺癌发生、发展中可能起一定作用。

李芳等[12]对乳腺癌中Nup88和PINCH mRNA的表达水平进行分析，发现乳腺癌组织中Nup88、PINCH mRNA与HER-2表达均呈正相关，提示Nup88、PINCH mRNA与HER-2可能在乳腺癌的发生、发展、转移过程中发挥一定的协同作用。李玉强等[13]通过Nup88重组慢病毒，采用RNAi成功抑制MCF-7中Nup88基因的表达，并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。提示Nup88在某些恶性肿瘤的侵袭能力起一定的作用，本组实验发现Nup88蛋白表达与患者年龄(≤50岁或>50岁)、组织学类型、肿瘤大小等无关(P均>0.05)；与肿瘤浸润深度、淋巴结转移或脉管癌栓有关(P均<0.05)。推测Nup88蛋白与子宫颈腺癌的发展可能有关。有文献报道[14]Nup88蛋白表达与结直肠癌转移程度、病死率密切相关，可作为评估预后的指标。本组中子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白阳性者的中位生存时间比阴性者的中位生存时间低，但差异无统计学意义。可能由于本组样本量较少，有待于收集大样本量进一步分析。

综上所述，Nup88蛋白与子宫颈腺癌的发生、发展有关，有望成为评估子宫颈腺癌生物学行为的指标之一；后续实验将加大样本数进一步分析。

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江西省科技计划自然科学基金(20144BAB2050017)

1南昌大学医学院，南昌 3300062江西省妇幼保健院肿瘤科、3病理科，南昌 330006

敖梅红，博士研究生，副主任医师。E-mail：amh806@126.com 李隆玉，女，主任医师，通讯作者。E-mail：lilongyu1103@sina.corn

时间：2017-5-17 23:53 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.021.html

R 737.33

B

1001-7399(2017)05-0559-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.021

接受日期：2017-02-07