反相高效液相色谱法测定曲安奈德注射液中苯甲醇的含量

李静

（昆明积大制药股份有限公司，云南 昆明 650106）

反相高效液相色谱法测定曲安奈德注射液中苯甲醇的含量

李静

（昆明积大制药股份有限公司，云南 昆明 650106）

目的：建立反相高效液相色谱法测定曲安奈德注射液中苯甲醇的含量。方法：ODS柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水（60∶40）为流动相；流速1.0 mL/min，检测波长为240 nm。结果：系统适用性良好。苯甲醇峰及曲安奈德峰与最近杂质峰均可以有效分离，分离度均＞1.5，苯甲醇定量限为16 ng。苯甲醇检测限为4 ng，平均回收率为98.23%，相对标准偏差（RSD）为0.43%。苯甲醇在0.2302～2.3019 mg/mL内呈良好的线性关系，以浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程为Y＝10.86786X＋0.0063，相关系数r＝0.9999。方法精密度良好。室温放置12 h是稳定的。方法耐用性良好。结论：该方法快速、灵敏、准确，可用于测定曲安奈德注射液苯甲醇的含量。

反相高效液相色谱法；曲安奈德注射液；苯甲醇；含量测定

曲安奈德[1]注射液为长效糖皮质激素，具有强而持久的抗炎、抗过敏作用。用于皮质类固醇类药物治疗的疾病，如变态反应性疾病（用于患者处于严重虚弱状态，使用传统药物无效时），皮肤病，弥漫性风湿性关节炎，腱鞘炎，瘢痕疙瘩，肱骨外上髁炎，鼻炎疾病[2-5]。当口服皮质类固醇类药物不可行时，肌内注射给药对于以上疾病的疗效显著。曲安奈德首先由Fried及Bernstein等于1958年合成，由于在结构中9-位引入氟，其抗炎作用比氢化可的松大20倍。《英国药典》《美国药典》及《日本药典》均有该品种的收载。德国亚斯平大药厂、美国施贵宝大药厂、意大利利沙大药厂等及很多国家均有其混悬注射液生产，并已在市场上销售五十多年。曲安奈德注射液为我司已上市品种[6]，处方中有苯甲醇，苯甲醇为抑菌剂。《美国药典》《英国药典》、人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）Q6A规范规定制剂中防腐剂的含量测定要求[7]，欧洲、中东和非洲地区（EMEA）规定制剂中防腐剂的使用和质控。制剂中使用的防腐剂均应制订内控药用标准，故建立苯甲醇含量测定的方法并进行方法验证，在分析方法开发过程中发现，本品有关物质[8]测定方法可同时进行苯甲醇的定量测定，故在有关物质测定的同时用外标法对苯甲醇含量进行测定。

1 仪器与药品

1.1 仪器

SHIMADZU LC-20AT高效液相色谱仪（LC-20AT型泵，SPD-20A型紫外检测器，SPD-M20A型二极管阵列检测器，SIL-20AC型自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20Avlite系统控制器，LC solution色谱工作软件）。

1.2 试剂

曲安奈德对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100055-200302和100055-201103），用于系统适用性试验、鉴别和含量测定。曲安西龙对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100333-200201），用于系统适用性试验。苯甲醇对照品（于西格玛公司，批号：SZBB1660V，含量：99.9%）。甲醇（MERK公司，批号：0938907421）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；以甲醇-水（60∶40）为流动相；流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长为240 nm。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取苯甲醇适量，加流动相稀释制成每1 mL中约含0.9 mg的溶液，作为苯甲醇。

2.2.2 供试品溶液的配制 精密量取曲安奈德注射液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验

取曲安奈德对照品、曲安西龙对照品与苯甲醇对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含曲安奈德5 mg、曲安西龙5 mg和苯甲醇0.9 mg的混合溶液，理论板数按曲安奈德峰计算不低于5000，苯甲醇和曲安西龙的分离度应不低于1.5，曲安奈德与曲安西龙的分离度应＞15。见表1，图1，图2。

表1 系统适用性试验结果

结果：苯甲醇与曲安西龙的分离度为3.21，曲安西龙与曲安奈德的分离度为20.75，理论板数按曲安奈德峰计算为9 431，系统适用性良好。

2.4 标准曲线

图1 系统适用性试验图谱

图2 曲安奈德注射液供试品溶液图谱

精密称取苯甲醇对照品约112 mg置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为苯甲醇对照品贮备溶液。精密量取苯甲醇对照品贮备溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，按有关物质项下测定方法检测，以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。见表2，图3。

表2 苯甲醇标准曲线试验结果

图3 苯甲醇线性图

以浓度对峰面积进行线性回归，苯甲醇对照品溶液在0.2302～2.3019 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 准确度

采用加样回收方法，按本品处方，精密称取除苯甲醇的物料，制成不含苯甲醇的空白混悬溶液，按处方中苯甲醇含量（9 mg/mL）的50%，100%和150%分别进行配料，各得3个配方样品，每个配方分别量取3份样品，按照有关物质项下测定方法进行检测，3个浓度的平均回收率为98.23%，相对标准偏差（RSD）为0.43%，方法准确度良好。见表3。

2.6 重复性实验

同一批样品，同一天内，按含量测定方法重复测定6次，测定结果表明，方法的精密度良好。见表4。

2.7 定量限和检测限

按照含量测定方法进行测试，逐级稀释样品，测其峰高，同时测定相同条件下的色谱基线噪声，按信噪比约为10∶1时的对应浓度作为苯甲醇定量限。定量限为16 ng。按信噪比约为3∶1时的对应浓度作为检测限。苯甲醇检测限为4 ng，

2.8 中间精密度

分别由2名分析人员，使用不同的仪器和不同品牌的色谱柱，测试3批供试品中苯甲醇的含量，不同分析人员采用不同的仪器及色谱柱对3批样品进行检测，苯甲醇含量的RSD值分别为1.99%，2.80%和0.30%，方法中间精密度良好。见表5。

表3 准确度试验结果

2.9 溶液稳定性

取供试品溶液分别在室温放置0，2，4，6，8，12 h取样，测定苯甲醇本品在室温放置12 h，苯甲醇峰面积RSD为0.26%，本品在室温放置12 h是稳定的。见表6。

2.10 耐用性

配制1份供试品溶液，考察流动相比例、流速、检测波长、色谱柱等微小变动对测定结果的影响。见表7。

表4 重复性试验结果

表5 不同分析人员采用不同的仪器及色谱柱对3批样品进行检测

表6 溶液稳定性试验结果

表7 耐用性试验结果

结论：流动相比例、流速、检测波长、色谱柱等微小变动对苯甲醇含量的测定结果无影响。苯甲醇含量的RSD＜5.0%，方法耐用性良好。

3 讨论

3.1 参照《中华人民共和国药典》（2010年版）二部曲安奈德注射液质量标准进行试验，采用色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 mm），流速1.0 mL/min，曲安奈德峰保留时间约22 min，主峰出峰太慢，故对流动相比例进行适当调整，调整后曲安奈德峰的保留时间约13 min，出峰时间合适。

3.2 辅料苯甲醇在有关物质测定方法中有吸收峰。通过对苯甲醇含量进行定量研究，说明该方法能准确测定苯甲醇含量。在测定有关物质同时能定量测定苯甲醇含量。

[1]彭穗玮,李益中.曲安奈德的药理作用与临床应用[J].新医学,2001,32(1):45-46.

[2]刘海平,吴彦,刘珍梅.曲安奈德注射液封闭治疗腱鞘炎的疗效观察[J].临床医药实践,2007,16(12):1163-1164.

[3]王艺颖,敬梁渝,杨文华.曲安奈德注射液治疗瘢痕疙瘩163例疗效观察[J].西南军医,2010,12(5):880-881.

[4]杨晓,刘懿怡,黄晓娟.曲安奈德注射液封闭治疗肱骨外上髁炎的护理体会[J].中国药物经济学,2013,8(6):486-487.

[5]毕维珍,张美兰,贾根梅.曲安奈德注射液肌肉注射治疗变应性鼻炎58例分析[J].中国民族民间医药,2012,21(21):91-92.

[6]黄守坚.曲安奈德注射液-成功改造天然药物的典范[J].现代临床医学,2008,34(4):313-316.

[7]崔雷,王晓玲.防腐剂在制剂中的应用及质量控制[C].中华中医药学会制剂分会学术年会.2004.

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015年版)二部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:362.

本文编辑：苏日力嘎

Determination of Benzyl Alcohol Content in Triamcinolone Acetonide Injection by RP-HPLC

Li Jing

(Kunming Jida Pharmaceutical Co. Ltd, Yunnan Kunming 650106, China)

Objective：To establish a RP-HPLC method for determination of benzyl alcohol content in Triamcinolone Acetonide Injection. Methods：ODS column (250 mm×4.6 mm, 5μm) was used serving methanolwater (60∶40) as the mobile phase at a flow rate of 1. 0 mL / min and a detection wavelength of 240 nm. Results：The system showed good suitability. Benzyl alcohol, triamcinolone acetonide and the nearest impurity peaks were effectively separated, of which the separation degrees were more than 1.5. The limit of quantitation (LOQ) of benzyl alcohol was 16 ng. wihle the limit of detection (LOD) was 4 ng. The average recovery was 98.23%, with a RSD of 0.43%. The linear range of benzyl alcohol was 0.230 2～2.301 9 mg / mL. Linear regression was performed with peak area against concentration, of which the regression equation was Y＝10.867 86X + 0.006 3, with a correlation coefficient (r) of 0.999 9. The method showed good precision and durability. The sample showed high stability after storage at room temperatre for 12 h. Conclusion：The method is rapid, sensitive and accurate, which may be used for the determination of benzyl alcohol content in triamcinolone acetonide injection.

Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC); Benzyl Alcohol; Triamcinolone Acetonide Injection; Content Determination

R927.2

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.04.007

2016-11-09

李静，女，药师，工程师。研究方向：新药研发与药物分析。E-mail：quitelj@126.com