皖南地区血液集中化检测应用分析

黄慧 陈秀兰 吴洁 潘安杰 马怡 陈丽 潘洁

皖南地区血液集中化检测应用分析

黄慧 陈秀兰 吴洁 潘安杰 马怡 陈丽 潘洁

目的 探讨皖南地区血液集中化检测的意义。方法 对皖南5家血站常规检测合格的标本，采用2套血液核酸筛查系统进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA检测。酶免阴性、核酸阳性的标本，进行乙肝血清学补充试验。最后对5家血站的核酸阳性检出率进行分析。结果 在集中化检测期间共检测39 616例标本，检出HBV阳性39例，其中芜湖12例、安庆16例、池州3例、黄山5例、铜陵3例。结论 各单位送检的标本质量，直接影响核酸检测结果准确性。NAT能在ELISA检测阴性的献血者血液标本中筛查到核酸阳性标本，有效降低了经血传播传染病的危险。核酸集中化检测可进一步提高血液质量及保障血液安全。

ELISA检测 血液集中化检测 血液安全

2015年新版《血站技术操作规程》明确提出，HIV、HBV和HCV感染标志物要采用2遍血清学检测和1遍核酸检测。NAT相对于血清学检测能显著缩短经血液传播传染病病毒检测的“窗口期”，降低输血传播病毒的风险［1］。本研究对2015年12月~2016年6月期间，皖南地区5家血站的血液集中化检测情况，进行总结分析；同时对本站HBsAg酶免阴性、HBV核酸阳性的标本，进行乙肝血清学补充试验，以了解本地区献血人群乙肝流行情况。

材料与方法

1 标本来源 2015年12月～2016年6月皖南5家血站无偿献血者血液标本，献血者均符合国家《献血者健康检查要求》的相关要求，共计39 616例。外站标本使用标本运输箱以确保冷链过程，抵达本单位时温度符合要求。

2 试剂与仪器 NAT试剂厂家1：上海科华血液核酸筛查系统： 瑞士 Hamilton Microlab Star 全自动加样仪，美国ABI 7500 Real time PCR 扩增系统，科华HBV、HCV、HIV-1核酸检测试剂盒。NAT试剂厂家2：达安血液核酸筛查系统：Chemagic STAR核酸提取仪，ABI 7500 Real time PCR 扩增系统，达安血液筛查HBV、HCV、HIV-1病毒核酸检测试剂盒。所用试剂均批批检合格，且在有效期内使用。

3 检测方法

3.1 核酸检测：5家血站常规各项检测均合格的标本采用科华或达安血液核酸筛查系统进行8样本混样检测，若混样管呈反应性则进行样本拆分实验，实验操作均严格依据本单位核酸SOP。混样检测阴性的标本直接出具合格报告；混样检测有反应性则进行相应的拆分实验，并以单检结果为最终结果。

3.2 血清学补充实验：对HBsAg酶免阴性、HBV核酸阳性的标本，进一步测定HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc五项指标。受限于标本量，故血清学补充实验仅限于本站HBV 核酸阳性标本。

4 统计学处理 应用SPSS 13. 0 软件，计数资料采用χ2检验。

结果

1 2015年12月～2016年6月共检测39 616例标本，检出HBsAg酶免阴性、HBV阳性标本39例，其中芜湖12例、安庆16例、池州3例、黄山5例、铜陵3例。未发现HCV RNA、 HIV RNA阳性标本。HBV DNA阳性情况见表1。5家血站中，芜湖与安庆HBV DNA阳性率差异最大，经χ2检验，χ2=11.17，P＜0. 01 。

表1 5家血站2015年12月～2016年6月核酸检测HBV DNA阳性情况

2 安庆、芜湖2015年12月～2016年4月阳性检出率对比分析见表2。

3 对本站HBsAg酶免阴性、HBV核酸阳性的标本，进行乙肝血清学补充实验，结果见表3。

讨 论

近年来，随着ELISA试剂的不断优化，灵敏度、特异性一直在提高，输血残留风险也相应降低，但仍有资料显示，90%以上HBV和HIV及75%以上HCV的输血传播风险来自“窗口期”病毒感染［2-4］。2015年新版《血站技术操作规程》明确提出HIV、HBV和HCV感染标志物要采用2遍血清学检测和1遍核酸检测。目前，高度敏感、高度特异的核酸检测（NAT）技术已成为我国血液筛查检测的常规内容，其与传统的酶联免疫吸附试验方法原理完全不同，核酸检测的应用能有效减少输血后病毒感染发生率，可将输血传播HBV、HCV和HIV的“窗口期”分别由原来的56 d、70 d和22 d缩短41 d、21 d和11 d［5］。

表2 安庆、芜湖2015年12月～2016年4月阳性检出率对比分析

表3 芜湖市中心血站12例NAT阳性反应性标本的血清学乙肝5项检测结果

本站采用科华、达安核酸血筛系统对皖南5家血站2015年12月~2016年6月常规血清学筛查合格标本共计39 616人份进行核酸检测，共检出39例乙肝核酸阳性标本，总阳性率为0.098%（见表1）。其中本站阳性率0.057%和铜陵0.062%与文献报道的江苏（0.06%）、唐山（0.040%）、郑州（0.081%）［5-7］接近；而池州0.165%及黄山0.135%与宝鸡（0.114%）、南宁（0.14%）、贵阳（0.16%）［8-10］相近；安庆阳性率0.191%，高于黄山、池州、铜陵三家血站，略低于广州（0.22%）［11］。血液集中化检测期间，所有核酸标本不分单位，一视同仁由本站固定的实验人员进行8样本混样检测，所有实验均严格按本单位核酸SOP操作，对于可能由本实验室引起的假阴性或假阳性，5家血站机会均等。

由表1可见，本单位的阳性率最低，其次是铜陵、黄山、池州，而安庆最高，由表2可见，安庆每个月的阳性率均高出本单位。分析本单位阳性率低于其余4家血站的原因可能有：①相较其他4家血站，本站自2014年开展核酸检测至今已有近2年，体采科人员已能熟练操作核酸标本的留样，对标本质量（如严禁开盖、及时颠倒混匀、4 h内离心）、运送等能严格按要求执行，检验科接收时亦对核酸标本质量严格把关，加上领导对核酸检测的高度重视及实验前质量控制的大力支持，减少了由标本质量不合格或污染等原因引起的假阳性。②其余4家血站2015年12月前均未开展核酸检测，采血人员可能对于留取核酸标本的概念不强，对核酸标本质量的重要性也不够了解，易造成留样过程污染等假阳性。③外单位标本在送至本站之前，我们对其是否及时离心、冷冻保存等影响实验结果的实验前标本质量无法掌控。④5家血站所使用的ELISA试剂不同，在灵敏度、特异性上也许稍有差异，本站乙肝灰区定为0.7～1.0。据了解，安庆灰区0.8～1.0。本站实验人员在ELISA各项检测结果的判定上均非常严谨，对于接近灰区0.7的合格标本，基本上当天不发报告，次日进行复查，视复查结果再出具检测报告，可能在某些程度上也能相对降低核酸阳性率。⑤各家血站所使用的采血袋不同，致原袋血浆中保养液对核酸标本的稀释程度不一，对核酸结果的影响可能也不一样。⑥各地区乙肝感染情况不一也造成阳性率的不同［9-13］。尤其安庆地区下设6个县和1个地级市，面积大地区广，每个县均设有采血点，对于标本的采集、离心和运送等实验前质量控制相对较复杂。由表3可知：在乙肝“两对半”血清学实验中，有1例结果为阴性，可能为血清转换前“窗口期”（WP）感染或HBV隐匿性感染（OBI），HBV WP献血者血清HBsAg为阴性且会随着时间推移转为阳性，OBI在感染HBV之初即丢失或之后逐渐丢失血清标志物，这一现象可在嗜肝病毒感染的土拨鼠模型上重现［12］；有4例HBsAb阳性，其中1例为单纯HBsAb阳性，其余3例均联合HBcAb阳性，可见在HBsAb阳性的标本中也可检出NAT阳性，保护性抗体阳性亦不能排除OBI；单纯HBcAb或联合其他标志物阳性的标本10例，为OBI的可能性较高。据报道，HBsAg阴性而抗-HBc阳性或单纯抗-HBc阳性的OBI献血者标本中，可以检测到低水平HBV DNA，且这种血液制品能够具有感染性［13-15］。

酶免阴性、HBV DNA阳性标本后期可进一步做核酸定量检测及基因型研究，分析献血者感染的HBV基因型、血清学和病毒特征之间的关系。由于核酸实验中可能存在的假阳性，各家血站可在后期建立对淘汰献血者的定期追踪随访，假阳性不仅会增加血液的报废率，更会影响献血者的献血积极性。另外，定期追踪随访可确认乙肝感染真实情况，同时也有助于对ELISA和NAT检测不一致时结果的解释和分析。乙肝核酸检测作为ELISA检测的互补实验，能及时有效测出ELISA阴性标本中“窗口期”和HBV隐匿性感染的标本。2遍血清学检测和1遍核酸检测组成的互补血液筛查模式，可有效降低输血感染病毒风险，保障临床用血安全。

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Analysis of Blood Concentration Detection in Southern Anhui

HUANG Hui，CHEN Xiu-lan，WU Jie，et al .
Wuhu Blood Center Station，Wuhu 241000

Objective To explore the significance of nucleic acid tests for centralized blood screening in southernAnhui. Methods Qualified samples from five blood stations were detected，with two sets of nucleic acid blood screening systems for HBV DNA，HCV RNA and HIV RNA. The samples with negative ELISA and positive NAT were further identified for hepatitis B. Finally，the positive rates of nucleic acids in five blood stations were analyzed. Results During the centralized detection，39616 samples were tested and 39 HBV positive samples were found，including 12 in Wuhu，16 in Anqing，3 in Chizhou，5 in Huangshan，and 3 in Tongling. Conclusion NAT screening can find positive samples from negative samples tested by ELISA .NAT effectively reduced the risk of diseases through blood transfusion. Nucleic acid concentration detection may improve the quality of blood and blood safety.

ELISA detection Blood concentration detection Blood safety

R446.6

A

1671-2587（2017）03-0291-04

2016-09-25）

（本文编辑：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.03.023

241000 安徽省芜湖市中心血站

黄慧（1983–），女，安徽芜湖人，主管检验师，硕士，主要从事免疫血液学及分子生物学研究，（Tel）18155366038（E-mail）handyhh@163.com。