恩施硒茶中儿茶素含量测定

黄思勇

（恩施职业技术学院，湖北 恩施 445000）

恩施硒茶中儿茶素含量测定

黄思勇

（恩施职业技术学院，湖北 恩施 445000）

以不同企业生产的恩施硒茶为供试材料，采用高效液相色谱法检测分析3种主要儿茶素成分含量。结果表明：恩施硒茶中儿茶素含量为94.9～147.8 mg/g，平均含量为122.5 mg/g，儿茶素品质指数为539～1 234，平均值为856。不同企业生产的恩施硒茶中儿茶素的含量差别较大，儿茶素品质指数也高低不一，且儿茶素品质指数与儿茶素总含量不呈比例关系，需要根据恩施硒茶的开发目的选育实用的茶树品种。

恩施硒茶；儿茶素；品质指数

儿茶素属于黄烷醇类化合物，是茶叶中的主要化学成分之一，因具有抗氧化、防癌抗癌、抑菌、降低胆固醇、抗突变、抗辐射等多种生物活性而受到广泛关注[1-4]。在茶叶中，各种儿茶素单体的含量与绿茶品质均有相关性，这种相关性可以用儿茶素品质指数来衡量，阮宇成等[5]指出指数愈大绿茶品质愈好。

恩施州现有茶园面积近10万hm2，是湖北省最大的产茶区，“恩施硒茶”已经成为恩施州的地域公共品牌，其品牌价值估算达6亿元[6]，但对恩施硒茶资源开发利用不够，存在茶制品单一，保健茶、饮料茶等产品开发尚未起步的窘境[7]。笔者通过测定恩施硒茶中儿茶素的含量，分析了市面销售恩施硒茶的儿茶素品质指数，为恩施硒茶的品种选定提供参考，为合理开发恩施硒茶资源提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药材与试剂

恩施硒茶为硒露茶叶有限责任公司、恩施亲硒源硒茶产业发展有限公司、凯迪克富硒茶叶有限公司、湖北施州实业有限公司、恩施市春归商贸有限公司、恩施维春农业开发有限责任公司、湖北绿可生态茶叶有限公司、恩施亲硒源硒茶产业发展有限公司（恩施硒茶8号、9号、10号由该公司提供）等公司生产，均为市售品。表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）对照品纯度均不低于98.5%，由上海融禾医药科技有限公司提供。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯净水。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪：DIONEX（U3000）；色谱工作站：Chromeleon；检测器：VWD 3100；色谱柱：Acclaim 120 C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；紫外可见分光光度计：UV2600（上海天美科学仪器有限公司）；分析天平：AL204（METTLER TOLEDO）；超声波清洗仪：KQ-2500（昆山市超声仪器有限公司）。

1.3 色谱条件

以Acclaim 120 C18为色谱柱；以乙腈为流动相A，以冰醋酸为流动相B，水为流动相C，按照表1中确定的梯度进行洗脱；柱温为30℃；检测波长为278 nm；进样量为10 μL[8]。

表1 流动相梯度洗脱表

1.4 供试品溶液的制备

精密称取恩施硒茶试样粗粉约0.2 g于10 mL离心管中，加入70℃预热过的70%甲醇溶液5 mL，立即放入70℃水浴中浸提10 min（隔5 min搅拌1次），浸提后冷却至室温，离心10 min（3 500 r/min），将上清液转移至10 mL量瓶中。残渣重复提取1次。合并两次提取液定容至10 mL，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液2.0 mL至10 mL量瓶中，70%甲醇定容，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液[9]。

1.5 对照品溶液的制备

分别精密称取EGCG、ECG、EGC对照品适量，用甲醇溶解制成EGC浓度为2.9 mg/mL、EGCG浓度为4.3 mg/mL、ECG浓度为3.9 mg/mL的溶液，0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液即为对照品溶液。

1.6 数据分析

按公式（1）计算儿茶素品质指数。

儿茶素品质指数=100×（EGCG +ECG）/EGC （1）

2 结果与分析

2.1 色谱条件优化

参照《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的测定方法》（GB/T 8313—2008）的方法，对流动相的组成进行优化，结合儿茶素类化合物的性质选取了乙腈、冰醋酸、水作为流动相体系，采用梯度洗脱，可以使EGCG、ECG、EGC和相邻的化合物完全分离，且满足高效液相色谱法系统适用性的要求。色谱图见图1。

2.2 线性回归方程与相关系数

分别精密吸取各对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL至10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释定容，配成系列浓度标准溶液，按确定的色谱条件测定各对照品峰面积。以进样浓度C（mg/mL）为横坐标，峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，计算EGCG、ECG、EGC的线性回归方程及线性相关系数见表2。

2.3 精密度试验

精密吸取2.2中儿茶素各2.0 mL系列浓度标准溶液（EGCG浓度0.86 mg/mL、EGC浓度0.58 mg/mL、ECG浓度0.78 mg/mL）重复进样6次，按照确定的色谱条件测定EGCG、ECG、EGC的峰面积，计算其RSD分别为1.35%、1.26%、1.48%，表明该方法具有良好的精密度。

图1 供试品的HPLC图谱

表2 EGCG、ECG、EGC的线性回归方程及线性相关系数

2.4 稳定性试验

精密吸取低温（4℃）下放置不同时间（0、2、4、8、12 h）的供试品溶液分别注入液相色谱仪，测定EGCG、ECG、EGC的峰面积，考察儿茶素各组分的含量变化，计算其RSD分别为1.54%、1.43%、1.65%，表明供试品溶液至少在放置12 h内比较稳定。

2.5 重复性试验

取同一恩施硒茶6份，按照供试品溶液的制备方法制备，按确定的色谱条件测定EGCG、ECG、EGC的峰面积，按外标法计算。测得恩施硒茶中各儿茶素的平均含量：EGCG为105.5 mg/g、EGC为10.3 mg/g、ECG为7.2 mg/g，其RSD分别为1.14%、1.26%、1.62%，表明该方法重复性良好。

2.6 回收率试验

精密称取已知含量的恩施硒茶粉末约0.1 g，分别置于50 mL量瓶中，分别加入EGCG、ECG、EGC对照品溶液0.50 mL，按照供试品溶液相同的方法制备，并按照确定的色谱条件测定EGCG、ECG、EGC的峰面积，计算EGCG、ECG、EGC的加样回收率分别为100.30%、98.85%、101.08%，其RSD分别为1.08%、0.96%、1.55%，表明该方法准确度较好，满足测定要求。

2.7 儿茶素含量测定

取恩施硒茶，照上述方法测定，按外标法以峰面积计算恩施硒茶的儿茶素含量，并计算儿茶素品质指数。从表3可以看出，恩施硒茶中儿茶素含量为94.9～147.8 mg/g，平均含量为122.5 mg/g，儿茶素品质指数为539～1 234，平均值为856。在各儿茶素中以EGCG含量最高，ECG含量最低，且儿茶素总含量与EGCG含量呈正相关，但儿茶素品质指数与EGCG含量高低没有相关性，与儿茶素总含量也不呈比例关系，故在用儿茶素品质指数来衡量绿茶品质时应注意儿茶素的总含量。

表3 恩施硒茶样品儿茶素含量测定

3 结论与讨论

试验中曾采用甲醇-水-冰醋酸的溶剂系统作为流动相，也曾尝试采用乙腈-水-冰醋酸的溶剂系统等度洗脱，结果表明：用甲醇-冰醋酸-水的溶剂系统得到的色谱峰的对称性很差，存在拖尾峰，而采用乙腈-水-冰醋酸等度洗脱各成分的分离度难以达到要求，且分析时间偏长，分离效率不高，故采用乙腈-水-冰醋酸溶剂系统梯度洗脱效果较为理想。

试验对不同企业生产的恩施硒茶中EGCG、EGC、ECG的含量进行了测定，并计算了儿茶素品质指数。从测定结果来看，不同企业生产的恩施硒茶中EGCG、EGC、ECG的含量差别较大，儿茶素总含量也有差别，儿茶素品质指数也高低不一，这可能与不同企业所产恩施硒茶的茶树品种、生长环境、采摘时机、加工方法等有关系[10]，还需要对其进一步的研究和完善。

儿茶素品质指数主要是采用酯型儿茶素（EGCG、ECG）的含量之和除以非酯型儿茶素（EGC）的含量，这为选育茶树品种可以提供很大的帮助，但从恩施硒茶的儿茶素品质指数结果来看，儿茶素品质指数高的不一定儿茶素总含量就高，故在用儿茶素品质指数来衡量绿茶品质时还应注意儿茶素的总含量，这在利用用恩施硒茶作为原料加工保健茶、饮料茶等产品时显得尤为重要。

[1] 伍红良，凌月福，黄岚珍，等. EGCG对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及survivin、VEGF表达的影响[J]. 实用医学杂志，2011，27（7）：1138-1141.

[2] 李浩榕，王亚楠，范春雷. 表没食子儿茶素没食子酸酯抑制LDL的氧化修饰和小鼠巨噬细胞摄取ox-LDL[J]. 中国药理学通报，2011，27（4）：584-585.

[3] 张星海，唐德松，沈生荣，等. EGCG防癌抗癌的药理药效研究进展[J]. 茶叶，2001，27（4）：43～48.

[4] 朱忠超，刘志苏，艾中立，等. 表没食子儿茶素没食子酸酯诱导肝癌细胞凋亡并伴随端粒酶活性下调[J]. 武汉大学学报（医学版），2004，25（6）：663-668.

[5] 阮宇成，程启坤. 茶儿茶素的组成与绿茶品质的关系[J]. 园艺学报，1964，3（3）：287-300.

[6] 田代明,郑承荣. “恩施硒茶”公共品牌价值6亿元[N/OL]. 恩施日报，2016-12-14.

[7] 黄思勇. 茶叶下脚料中表没食子儿茶素没食子酸酯分离纯化工艺研究[D]. 武汉：湖北中医药大学，2012.

[8] 黄思勇，干国平. 茶叶下脚料中表没食子儿茶素没食子酸酯含量测定研究[J]. 中国药师，2012，15（2）：676-677.

[9] GB/T 8313—2008，茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的测定方法[S].

[10] 林俐莎，葛 建，杨晶晶，等. 高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素含量[J]. 医药导报，2012，30（12）：1639-1641.

（责任编辑：夏亚男）

DeterminationofCatechininEnshiSeleniumTea

HUANG Si-yong
（Enshi Technical College, Enshi 445000, PRC）

The content of 3 main catechins in Enshi Selenium Tea from different enterprises were determined by high performance liquid chromatography (HPLC).The results showed that the content of catechin in Enshi Selenium Tea was 94.9～147.8 mg/g, the mean content was 122.5 mg/g, the catechin quality index was 539～1234, with an average value 856. Catechins in Enshi Selenium Tea had significant difference from different enterprises, and catechin quality index was also different. There was no proportionate relationship between catechin quality index and total catechin content. It is necessary to select the practical tea varieties according to the purpose. It is need to select practical tea tree varieties according to the development purpose of Enshi tea.

Enshi Selenium Tea; catechins; quality index

TS272

A

1006-060X（2017）05-0091-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2017.005.026

2017-02-18

黄思勇（1982-），男，土家族，湖北建始县人，讲师，主要从事药品与食品质量控制研究。