小儿清肺止咳口服液对烟雾诱发的急性支气管炎大鼠的血清IL-4及IFN-γ水平的影响

李 敏，魏朝霞

(1.山东省东营市广饶县中医院儿科，山东 东营 257300；2.东营胜利油田中心医院儿科，山东 东营 257300)

小儿清肺止咳口服液对烟雾诱发的急性支气管炎大鼠的血清IL-4及IFN-γ水平的影响

李 敏1，魏朝霞2

(1.山东省东营市广饶县中医院儿科，山东 东营 257300；2.东营胜利油田中心医院儿科，山东 东营 257300)

目的 分析小儿清肺止咳口服液对烟雾诱发的急性支气管炎大鼠的血清白介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响。方法 2013年3月至2015年3月选取山东省东营市广饶县中医院实验室的120只大鼠作为研究对象，所有的大鼠均接受烟雾刺激从而制作急性支气管炎的模型，采取随机数字表法分为试验组和对照组，每组各60只，试验组胃灌注小儿清肺止咳口服液，对照组则胃灌注同等剂量的生理盐水，对比两组大鼠血清中IL-4、IFN-γ水平的变化情况以及大鼠的存活情况。结果 试验组与观察组治疗后血清中IL-4浓度水平较治疗前相比均明显提高(t值分别为6.56、4.34，均P<0.05)。但试验组血清中IL-4浓度水平较对照组相比提高更加显著(t=5.92，P=0.023<0.05)。试验组与观察组治疗后血清中IFN-γ浓度水平较治疗前相比均明显降低(t值分别为7.56、6.11，均P<0.05)。但试验组血清中IFN-γ浓度水平较对照组相比提高更加显著(t=7.18，P<0.05)。试验组大鼠的生存率为96.67%，对照组大鼠的生存率为75.00%，组间相比具有显著性差异(χ2=6.56，P<0.05)。结论 小儿清肺止咳口服液对治疗烟雾诱发的急性支气管炎大鼠可显著增加血清中IL-4的含量，降低血清中IFN-γ的含量，在调节细胞因子方面发挥一定作用，具有积极的临床价值，可以作为一种理想方法应用于临床工作中。

小儿清肺止咳口服液；烟雾诱发的急性支气管炎大鼠；血清白介素-4；血清扰素-γ

小儿急性支气管炎属于儿童时期常见的一种呼吸系统性疾病，尤其多见于3岁以下的婴幼儿，且近年来，小儿急性支气管炎的发病率呈逐年增长趋势。小儿急性支气管炎主要的临床表现为咳嗽、咳痰、发热等，但是其预后大多数会恢复正常。但是若患儿的家属未及时送往治疗、医院治疗不当、生活饮食照顾不合适等均会导致小儿的病情反复发作，加之患儿的年龄较小、自身的免疫能力较低可能会进一步加重小儿的病情，严重影响患儿生长发育，在一定程度上可能会增加患儿成年后肺炎发病的机率，而此观点值得临床医师对其进行探讨[1]。山东省东营市广饶县中医院现针对小儿清肺止咳口服液的研究应用于120只急性支气管炎的大鼠模型中，对比其临床疗效，现将结果总结报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

2013年3月至2015年3月选取山东省东营市广饶县实验室的120只大鼠作为研究对象，所有的大鼠均接受烟雾刺激从而制作急性支气管炎的模型，采取随机数字表法分为试验组和对照组，每组各60只。试验组中雄鼠有29只，雌鼠31只，年龄在4至5周，平均年龄为(4.4±2.3)周，平均体重在(21.2±2.1)g。对照组中雄鼠有31只，雌鼠29只，年龄在4至5周，平均年龄为(4.5±1.9)周，平均体重在(22.1±2.2)g。

1.2治疗方法

1.2.1试验组

从实验室取回大鼠后正常饲养1～2天，观察无异常者开始进行模型的制作。参照《使用中医动物模型学》，对大鼠使用烟熏刺激的方法进行模型的制作。主要使用烟草进行烟熏，每次烟熏刺激的时间为30～45min。每天早晚各1次，持续1周时间。模型制作成功的表现为大鼠开始精神不振、体重下降、咳嗽、呼吸急促、扎堆聚集等，并从大鼠气管处取病理以确定急性支气管炎(图1)。急性支气管炎模型制作后，试验组大鼠开始胃灌注小儿清肺止咳口服液，每天灌注1次，持续灌注2周。停止治疗后，测量大鼠的体重，摘除其眼球，使用无菌的试剂管采集血液，立即送往实验室进行一系列操作，以便测量血清中白介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)浓度水平的变化情况。

图1 大鼠气管处病理组织切片

Fig.1 Pathological biopsy of rat trachea

1.2.2对照组

模型制作过程与试验组相同。急性支气管炎模型制作后，对照组大鼠开始胃灌注等量的生理盐水，每天灌注1次，持续灌注2周。采集标本与测量方法同试验组。

1.3观察指标

观察并对比两组大鼠血清中IL-4、IFN-γ水平的变化情况以及大鼠的3个月生存率。正常情况下血清中IL-4的浓度水平为(44.56±1.85)pg/mL，急性支气管炎时血清中IL-4的浓度水平开始下降并低于正常值，治疗好转后浓度开始增加并高于正常值。正常情况下血清中IFN-γ的浓度水平为(140.23±5.12)pg/mL，急性支气管炎时IFN-γ的浓度开始升高并高于正常值，治疗好转后开始下降并低于正常值。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件对本次研究所取得的数据进行分析，计量资料采取t检验，以均数±标准差的形式对数据进行表示，计数资料采取χ2检验，以P<0.05代表有统计学意义。

2结果

2.1两组大鼠血清中白介素-4浓度水平情况的对比

试验组与观察组治疗前血清中IL-4浓度水平无明显差异(P>0.05)，试验组与观察组治疗后血清中IL-4浓度水平较治疗前相比均明显提高，但试验组血清中IL-4浓度水平较对照组相比提高更加显著(P=0.023<0.05),见表1。

2.2两组大鼠血清中干扰素-γ浓度水平情况的对比

试验组与观察组治疗前血清中IFN-γ浓度水平无明显差异(P>0.05)，试验组与观察组治疗后血清中IFN-γ浓度水平较治疗前相比均明显降低，但试验组血清中IFN-γ浓度水平较对照组相比降低更加显著(P<0.05),见表2。

2.3两组大鼠生存率对比

试验组大鼠的生存率为96.67%，对照组大鼠的生存率为75.00%，试验组大鼠的生存率明显高于对照组(χ2=6.56，P<0.05)。

组别数量(n)治疗前治疗后tP试验组6037.45±1.7950.32±1.936.560.003对照组6037.53±1.8740.33±1.854.340.010t1.315.92P0.780.023

组别数量(n)治疗前治疗后tP试验组60164.27±5,72139.21±5.327.560.003对照组60163.24±5.71152.17±6.156.110.012t1.287.18P0.920.009

3讨论

3.1烟雾诱发的急性支气管炎作用机制

烟雾诱发的急性支气管动物模型的建立可作为开展本次研究的基础，目前较为常用的方法包括二氧化硫吸入法、脂多糖吸入法、混合烟雾吸入法等。但给予吸入过量的二氧化硫易造成大鼠呼吸道粘膜的损伤，严重时可加重细胞退变及死亡，导致呼吸道急性炎症的发生而致模型死亡。而给予脂多糖吸入法虽在一定程度上避免了对气道粘膜造成的损伤，但易引起急性肺损伤的出现，安全性较差，为此，我们采用了混合烟雾吸入法建立急性支气管炎大鼠模型。其作用机制可总结为：当混合烟雾进入大鼠呼吸道内后可诱发气道及支气管腺体的增生肥大、粘膜柱状上皮细胞纤毛损伤，引起气道壁结构的改变，发生呼吸道远段扩大或部分狭窄等症状，并伴随发生炎性细胞浸润、炎性标志物水平的变化等。本研究为烟雾诱发支气管炎症，与通常感染导致的支气管炎有较大区别。

3.2白介素-4及干扰素-γ在急性支气管炎发病中的作用意义

IL-4主要由Th2分泌，具有多种生物学活性，可以加快内皮因子的表达，并加快大量炎症细胞向炎症组织外移动并在一定程度上控制炎症的发生[2-3]。IL-4在促进T细胞分化的方面发挥一定的作用。IFN-γ是一种促进炎症发生的细胞因子，可以快速活化单核巨噬细胞，进而激活T细胞[4-5]。同时，IFN-γ可以明显增强肿瘤坏死因子的介导作用，并在一定程度上加重支气管的炎症反应。临床上急性支气管炎的治疗方面主张使用抗生素进行控制，并加上相应的对症治疗。但是抗生素容易发生耐药性、再次感染以及脏器损伤等不良作用，止咳类药物也会产生一定的不良反应，同时停药后较易再次发病[6]。故而，中医药治疗本病已然受到越来越多的重视。小儿清肺止咳口服液的主要配方为黄岑、大青叶、桑白皮、五味子、甘草、射干等[7]。

3.3小儿清肺止咳口服液的临床作用功效

本次研究结果显示，治疗后试验组血清中IL-4的浓度水平明显高于对照组，试验组血清中IFN-γ的浓度水平明显低于对照组，结果提示小儿清肺止咳口服液在调节急性支气管炎模型体内细胞因子方面具有显著的疗效。大量临床研究结果显示，小儿清肺止咳口服液的药品配方比较严谨，药品组合符合医学伦理要求，根据患儿咳嗽咳痰的发病原理，方正切合，突显了中医中药在辨证治疗方面发挥的优势作用。此外，通过现代药理学的大量研究，小儿清肺止咳口服液中的多种中药成分具有抵抗病原微生物、清热解毒、止咳化痰、缓解呼吸困难等作用[8]。黄岑与大青叶味苦、性寒，可以清热、解毒、去火。桑白皮味甘，归肺经，可以清肺、止咳。五味子性温，可以补气。射干在清热、消炎等方面发挥作用。

综上所述，小儿清肺止咳口服液对治疗小儿急性支气管炎具有较好的疗效，可以显著增加血清中IL-4的含量，降低血清中IFN-γ的含量，在调节细胞因子方面发挥一定作用，具有积极的临床价值，可以作为一种理想方法应用于临床工作中。

[1]Jiang D X, Chen Y S, Hou X T,etal. Influence of Paeonia lactiflora roots extract on cAMP-phosphodiesterase activity and related anti-inflammatory action[J]. Journal of Ethnopharmacology,2011,137(1):914-920.

[2]王有鹏,景伟超,谭杰军.儿童支原体肺炎IFN-γ、IL-4水平中西医研究现状[J].中医药学报,2014,42(04):133-134.

[3]Carroll W D, Wildhaber J, Brand P L. Parent misperception of control in childhood/ adolescent asthma: the Room to Breathe survey[J]. Eur Respir J,2012,39(39):90-96.

[4]Papadopoulos N G, Arakawa H, Carlsen K H,etal. International consensus on (ICON) pediatric asthma[J].Allergy,2012,67(8):976-997.

[5]Kwong K Y, Eghrari-Sabet J S, Mendoza G R,etal. The benefits of specific immunoglobulin E testing in the primary care setting.[J]. American Journal of Managed Care,2011,17(suppl 17):447-459.

[6]孙洪德,于晓芳,黄严,等.川贝清肺糖浆对支原体肺炎患儿血清INF-γ、IL-2的影响[J].中国实用医药,2012,7(16):177-178.

[7]田新磊.小儿清肺止咳口服液对急性支气管炎模型小鼠肺组织GATA-3、T-bet影响的研究[D].郑州河南中医学院,2013.

[8]Joung U, Jang J E, Nam J W,etal. Anti-respiratory syncytial virus (RSV) activity of timosaponin A-III from the rhizomes of Anemarrhena asphodeloides[J]. Journal of Medicinal Plants Research,2011,5(7):1062-1065.

[专业责任编辑：侯 伟]

Influence of pediatric clearing lung cough oral liquid on serum levels of IL-4 and IFN-γ in rats with smoke induced acute bronchitis

LI Min1, WEI Zhao-xia2

(1.DepartmentofPediatrics,GuangraoCountyHospitalofTraditionalChineseMdicineinDongying,ShandongDongying257300,China;2.DepartmentofPediatrics,DongyingCentralHospitalofShengliOilField,ShandongDongying257300,China)

Objective To explore and analyze the influence of pediatric clearing lung cough oral liquid on serum levels of IL-4 and IFN-γ in rats with smoke induced acute bronchitis. Methods Totally 120 rats were selected as research objects from laboratory of Guangrao County Hospital of Traditional Chinese Medicine in Dongying, and all the rats accepted smoke stimulation to make models of acute bronchitis. They were divided into experimental group and control group according to random number table method with 60 in each group. In the experimental group pediatric lung cough oral liquid was perfused, while equal dose of normal saline was given the control group. The changes of serum IL-4 and IFN-γ levels as well as the survival were compared between two groups. Results In both groups serum IL-4 levels rose obviously after treatment (tvalue was 6.56 and 4.34, respectively, bothP<0.05), but the increase of serum IL-4 levels in the experimental group was greater than the control group (t=5.92,P=0.023<0.05). Serum concentrations of IFN-γ of two groups increased after treatment (tvalue was 7.56 and 6.11, respectively, bothP<0.05), but the increase of IFN-γ levels was greater in the experimental group than the control group (t=7.18,P<0.05). The survival rate was 96.67% and 75.00% in the experimental group and the control group, respectively, and the difference between them was significant (χ2=6.56,P<0.05).Conclusion The pediatric clearing lung cough oral liquid has good curative effect on enhancing serum IL-4 level and reducing concentration of serum IFN-γ in rats with smoke induced acute bronchitis. It plays a role in regulating cell factor and has positive clinical value, so it can be used as a kind of ideal method in clinical work.

pediatric clearing lung cough oral liquid; rats with smoke induced acute bronchitis; serum IL-4; serum IFN-γ

2015-05-12

李 敏(1977-)，女，主治医师，主要从事儿科临床医疗工作。

魏朝霞，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.05.012

R725.6

A

1673-5293(2017)05-0524-02