水通道蛋白1在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达情况分析

吴美富 王燕(通讯作者)

100191北京大学公共卫生学院

水通道蛋白1在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达情况分析

吴美富 王燕(通讯作者)

100191北京大学公共卫生学院

目的：探讨妊娠期高血压患者胎盘组织中水通道蛋白1的表达情况。方法：收治妊娠期高血压患者60例为研究组，以同期正常足月剖宫产孕妇60例为对照组。结果：各组孕妇胎盘组织中均有AQP1的表达；AQP1阳性表达率：重度子痫前期组＞轻度子痫前期组＞妊娠期高血压组＞对照组(P＜0.05)。结论：AQP1在胎盘组织中的表达与妊娠期高血压疾病的发生及病情轻重程度有关。

水通道蛋白1；胎盘；高血压；妊娠期

妊娠期高血压是妊娠期特有的并发症，常发生在妊娠20周后，孕妇出现高血压、蛋白尿、水肿，严重者出现以溶血(H)、肝酶升高(EL)和血小板减少(LP)为特点的HELLP综合征，这是导致孕产妇和围产儿死亡的重要原因[1]。水通道蛋白1(AQP1)是水通道蛋白(AQPs)家族中唯一在内皮细胞表达的蛋白，参与跨细胞膜转运水。有学者认为胎盘血管内皮细胞、合体滋养细胞、胎膜的羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜的滋养细胞是表达AQP1的主要细胞[2]。刘慧姝等运用RT-PCR法、Western印迹和免疫组织化学方法检测的结果与上述结果一致[3]，并提示AQP1在胎盘和胎膜中的表达对母胎液体交换及羊水平衡发挥重要的作用。目前关于AQP1与妊娠期高血压疾病的相关性研究，国内外只有少量报道。Aralla等认为AQP1在胎盘和胎膜组织中的表达水平可能是影响妊娠期高血压病情的因素之一[4]，可能在妊娠期高血压的发生、发展过程中发挥作用。本研究通过分析、比较妊娠期高血压产妇与正常妊娠产妇的胎盘组织中AQP1的表达情况，探讨其与妊娠期高血压疾病的关系。

资料与方法

纳入标准：单胎、孕妇无烟酒嗜好、无其他妊娠合并症(研究组患妊娠期高血压疾病)。排除孕前急慢性病史者。且此次妊娠无药物服用史及缩宫素引产史。研究组：选取2013年1月-2014年1月在北京大兴部分医院产科定期产检检出患有妊娠期高血压疾病的孕妇，且最终在该院产科住院，经解痉治疗后病情控制仍不满意，最终行剖宫产分娩的产妇60例作为研究组，其中妊娠期高血压21例、重度子痫前期20例、轻度子痫前期19例。依据《妇产科学》第7版中妊娠期高血压诊断标准：①妊娠期高血压：血压≥140/90 mmHg，妊娠期首次出现，并于产后12周血压恢复正常；尿蛋白(-)；可伴有上腹部不适或血小板减少，产后方可确诊。②重度子痫前期：血压≥160/110 mmHg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或(++)；血肌酐＞106 μmol/L；血小板＜100×109/L；微血管病性溶血(血LDH升高)；血清ALT或AST升高；持续头痛、其他脑神经或视觉障碍；持续性上腹不适。③轻度子痫前期：孕20周后出现血压≥140/90 mmHg；尿蛋白≥300 mg/24 h或(+)；可伴有上腹不适、头痛等症状。对照组：选取同期正常足月妊娠，因头盆不称、漏斗骨盆、胎儿窘迫等因素行剖宫产分娩的产妇，并经产妇和家属知情同意，纳入60例为对照组。

标本采集：在产妇胎盘娩出后30 min内剪取胎盘组织，应避开梗死、出血及钙化区，生理盐水漂洗去除血液，10%的中性福尔马林固定24～48 h以上，石蜡包埋用于免疫组化检测。

实验方法：采用免疫组化SP法对胎盘组织中的AQP1的表达进行检测，一抗为浓缩型兔抗人AQP1多克隆抗体。切片脱蜡入水，组织抗原微波修复，先中高火7 min，停3 min，再中高火7 min，停5 min；PBS 5 min，2次；3%H2O2阻断过氧化物酶活性10 min；PBS 3 min，3次；用正常山羊血清于室温下孵育10 min；相应的一抗4℃过夜，PBS 5 min，3次；生物素标记二抗室温孵育30 min，PBS 3 min，3次；DAB显色，显微镜观察，水洗终止；苏木素复染1 min；梯度酒精脱水各3 min；透明二甲苯各5 min；中性树胶封片，显微镜下观察。

结果判定：评分标准参照Fromowitz等的综合计分法进行分析，细胞膜或细胞质无着色或与背景颜色一致的为阴性细胞，被染呈棕黄色为阳性细胞。染色强度评分标准：深棕褐色3分，棕褐色2分，浅棕褐色1分，不着色0分。每张切片随机观察10个视野，高倍镜下计数细胞总数和阳性细胞数。阳性细胞数：＞50%为3分，26%～49%为2分，6%～25%为1分，＜5%为0分。阳性细胞数和强度相加得出的结果：0～1分为(-)，2.0分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)，将(+)、(++)、(+++)视为阳性。

统计学方法：本研究所获得的数据资料采用SPSS 13.0软件进行处理和分析。用(±s)描述研究对象的年龄、孕期、胎次，采用趋势χ2检验比较对照组、妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组4组中AQP1的表达阳性比例是否呈线性变化。检验水准为α=0.05，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

表1 两组研究对象一般临床资料比较(±s)

表1 两组研究对象一般临床资料比较(±s)

项目对照组研究组FP例数6060年龄(岁)27.7±2.728.5±2.40.6390.108孕期(d)268.0±10.2259.0±9.52.2600.135产次1.57±0.71.63±0.70.8200.620

表2 两组之间AQP1阳性率表达情况的比较(n)

结果

一般情况：研究组平均年龄(28.5± 2.4)岁，平均孕期(259.0±9.5)d，平均孕次(1.63±0.7)。对照组平均年龄(27.7± 2.7)岁，平均孕期(268.0±10.2)d，平均孕次(1.57±0.7)。比较两组产妇的年龄、孕期和产次，经统计学检验，差异不具有统计学意义(P＞0.05)。见表1。

AQP1分布及表达情况：AQP1主要分布于细胞膜或细胞质内，在胎盘绒毛滋养细胞、血管内皮细胞、细胞滋养细胞中表达。且正常产妇胎盘组织的胎盘绒毛滋养细胞正常，血管及毛细血管部分内皮细胞的胞膜及胞质中可见浅棕黄色染色，而重度子痫前期的胎盘绒毛滋养细胞增生，血管及毛细血管内皮细胞的胞膜和胞质呈深棕黄染色，见图1和图2。

研究组AQP1的阳性表达率高于对照组。进一步分析表明，各子组胎盘组织中AQP1的阳性表达率：重度子痫前期组＞轻度子痫前期组＞妊娠期高血压组＞对照组，χ2=27.233，P＜0.05，差异具有统计学意义，见表2。

图1 AQP1在正常产妇胎盘组织中的表达(SP染色×200)

图2 AQP1在重度子痫前期产妇胎盘组织中的表达(SP染色×200)

讨论

胎盘是维持妊娠和促进胎儿生长发育的重要器官，能够分泌多种激素，进行母体和胎体之间的物质交换。而构成胎盘的主要细胞是滋养细胞，维持胎盘的正常妊娠功能。胎盘功能异常会引发自然流产、妊娠期高血压及胎儿生长受限等[5]。妊娠期高血压在产妇分娩后症状消失，提示胎盘与妊娠期高血压存在关联，但目前其病理机制尚不清楚，有待于进一步研究。

AQPs是细胞膜或细胞内囊泡中具有透水功能的蛋白分子，其表达或功能不仅对妊娠期母胎之间的液体交换及羊水的生成和代谢密切相关水分子的传输产生影响，而且许多疾病如高血压、心肾功能衰竭、脑水肿、肺水肿及视网膜水肿等均可能与AQPs功能异常或调节失控有关。

目前共发现了13种AQPs，即AQP0-AQP12[6，7]；在胎盘组织中已发现有表达的AQPs包括：AQP1、3、4、8、9，但是胎盘血管内皮细胞只能表达AQP1。

本研究采用形同的方式(免疫组化法)检测两组孕妇妊娠期AQP1的表达水平，检测结果显示，与正常妊娠孕妇组相比，妊娠期高血压组孕妇胎盘组织具有更高的AQP1阳性表达率，并且在研究组的3个子组中，发现随着病情的加重，AQP1的阳性表达率呈逐渐增强的趋势，重度子痫前期组AQP1的阳性表达率最高，与国内学者Chen等的研究结果相一致[8]；并同时应用趋势χ2检验，差异具有统计学意义。说明AQP1在胎盘组织中的表达情况与妊娠期高血压相关。提示AQP1可能在妊娠期高血压疾病的发生、发展中起了重要作用。推测可能的发病机制：①在妊娠期高血压疾病中，随着病情的加重，AQP1表达增高，导致胎盘局部组织缺血缺氧，降低胎盘抗凋亡基因表达，引起滋养细胞凋亡，导致胎盘血管生理性重铸障碍，引发妊娠期高血压；②AQP1的表达升高导致血管内皮生长因子减少，损伤血管内膜完整性，从而抑制内皮细胞生长和分化，减少胎盘血管生成，导致胎盘血流灌注不足，血管舒缩因子失衡，引起子宫动脉痉挛，引发妊娠期高血压。

综上所述，妊娠期高血压患者胎盘组织中AQP1表达异常，可能与妊娠期高血压疾病的发生、发展有关，但有待于进一步深入的研究证实，以探索妊娠期高血压疾病的防治新方法，这对减少围产期母儿死亡有重要意义。

[1]乐杰.妇产科学[M].北京:人民卫生出版社, 2008:92-99.

[2]Zhu XQ,Jiang SS,Zhu XJ,et al.Expression of aquaporin 1 and aquaporin 3 in fetal membranes and placenta in human term pregnancies with oligohydramnios[J].Placenta,2009, 30(8):670-676.

[3]陈利琼,安慧敏,朱雪琼.AQP1和AQP3在子痫前期患者胎盘和胎膜上的表达及意义[J].医学研究杂志,2012,41(5):94-96.

[4]刘慧姝,宋晓飞,郝荣增.水通道蛋白1在人胎盘和胎膜中的表达[J].南方医科大学学报,2008,28(3):99-101.

[5]Eide IP,Isaksen CV,Salvesen KA,et al. growth restriction is associated with reduced FasL expression by decidual cells[J].J Reprod Immunol,2007,74(2):7-14.

[6]Damiano AE.Review:water channel proteins in the human placenta and fetal membranes [J].Placenta,2011,32(2):207-211.

[7]Skowronski MT,Skowronska A,Nielsen S. Fluctuation of aquaporin 1,5,and 9 expression in the pig oviduct during the estrous cycle and early pregnancy[J].J Histochem Cytochem,2011,59(4):419.

[8]Aralla M,Mobasheri A,Groppetti D,et al.Expression of aquaporin water channels in canine fetal adnexa in respect to the regulation of amniotic fluid production and absorption [J].Placenta,2012,33(6):502-510.

Clinical analysis of AQP1 expression in placenta of the patients with hypertensive disorder complicating pregnancy

Wu Meifu,Wang Yan(Corresponding author)
School of Public Health of Peking University 100191

Objective:To investigate the expression of aquaporin 1(AQP1)in placenta tissue from the patients with different subsets of gestational hypertension.Methods:60 pregnant women who were diagnosed as gestational hypertension were enrolled in the study group,and 60 cases of the normal full-term cesarean section at the same period as the control group.Results:The expression of AQP1 in placental tissue of pregnant women in each group;the positive rate of AQP1 expression:the severe preeclampsia group＞mild preeclampsia group＞gestational hypertension group＞the control group(P＜0.05).Conclusion:The expression of AQP1 in placenta related to the incidence and severity of hypertensive disorder complicating pregnancy.

Aquaporin 1;Placenta;Hypertension;Gestation period

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.13.54