苗药半截烂不同炮制品种的总黄酮含量测定

2017-06-08聂昌平冉海霞

中国民族民间医药·下半月 2017年5期

聂昌平++冉海霞

【摘要】目的：对比测定不同炮制方法的苗药半截烂总黄酮的含量。方法：以紫外分光光度法，在波长268nm下测定不同炮制方法的半截烂总黄酮含量。结果：9种不同炮制方法中总黄酮含量不同，其中以干品石灰炮制法含量最高。结论：此法操作简单，精密度高，稳定性和重复性良好，为半截烂的临床应用提供参考，也为半截烂质量标准的制定提供了实验依据。

【关键词】半截烂；紫外分光光度法；总黄酮

【中图分类号】R2842【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）10-0008-04

Determination of Total Flavonoids in Different Processed Varieties of the Miao Medicine Arisaema rhizomatum

NIE Changping1RAN Haixia1DU Jiang2*

1Zunyi Medicine and Pharmaceutical College ，Zunyi 563006，China；2Guiyang college of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， China

Abstract：Objective Comparison of the determination of different processing methods of Miao medicine Arisaema rhizomatum′s total flavonoids content. Methods Using the method of UV and the wavelength used was 268 nm for the determination of total flavonoids in different processed varieties of the Miao Medicine Arisaema rhizomatum.Results The content of total flavonoids in 9 kinds of different processing methods was different， and the content of dry lime was the highest. Conclusion This method is simple， accurate， stable and reproducible， which provides a reference for the clinical application of Arisaema rhizomatum and the experimental basis for the development of the quality standard.

Keywords：Arisaema Rhizomatum； UV Spectrophotometric ；Total Flavonoids

半截爛为天南星科（Araceae）植物雪里见（Arisaema rhizomatum CECFischer）块茎[1-2]，又名雪里见、大半夏、野包谷、独角莲等，是我国特有药材。其性辛、温，有毒，具有祛风除湿，活血止痛，解毒化瘀的功效，民间常用于治疗风湿疼痛[3]、跌打损伤、关节肿痛、毒蛇咬伤等，具有疗效确切、起效快、用量少等特点，是土家族、苗族医师常备药材，被称为“土家药四宝”之一[4]。现代研究发现半截烂在镇静、镇痛、抗心律失常等方面有显著疗效，并在风湿和类风湿关节炎等方面的活性受到越来越多的重视。但因对黏膜有强烈的刺激性，常可导致口唇刺痛、水肿、呼吸困难等[5]，其毒性反应与天南星科其他药物相似。民间常炮制后再进行服用，如将鲜品用灶灰土烫去外皮，再用童便浸泡7天后得到制半截烂后进行使用；或用半截烂泡酒服等[1，6]。研究表明，半截烂中所含的黄酮类成分与风湿疼痛的活性成分相关[7]；胡志平等[8]以芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作为指标性成分进行含量测定；吴曙光等[9]对半截烂不同炮制品种的刺激性研究发现，不同炮制品种、鲜品及干品的刺激性不同，鲜品刺激性最强，酒制后刺激性最低，但对于总黄酮与炮制方法之间的联系并没有相关报道。本文通过对不同炮制方法的半截烂之间的总黄酮含量进行测定，比较不同炮制品之间总黄酮含量，确定炮制方法对总黄酮的影响，选取最优的炮制方法，为其临床应用提供参考，也为半截烂质量标准制定提供实验依据。

1仪器与材料

11仪器UV-1800紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；AR1140电子分析天平（奥豪斯国际有限公司）；KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

12材料蒸馏水（实验室自制）、甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20131206）、芹菜素（贵州迪大科技有限责任公司，98%，批号：20150710）。半截烂药材经贵阳中医学院孙庆文老师鉴定为天南星科植物半截烂的根茎，由炮制实验室李玮老师指导炮制得到。

2药材炮法

21炮法取鲜品药材350g，置于炭火灰中烫去外皮，晒干。

22童便制法取鲜品药材350g，将童（男）便没过药材，摇匀，每天更换童（男）便，浸泡7 d，捞出，晒干。

23蒸法取鲜品药材350g，刮去粗皮，将生姜片置于下层，药材置于上层，蒸制2～3 h，取出晒干。

24酒泡法取鲜品药材350g，白酒没过药材，浸泡两天，取出晒干。

25石灰水泡法取解品药材350g，石灰水没过药材浸泡，密封，每天测量，保持pH值12以上，共浸泡10 d，取出晒干。

26石灰水浸泡后蒸制法取解品药材350g，石灰水没过药材浸泡，密封，每天测量，保持pH值12以上，共浸泡10 d，取出后蒸制2 h，晒干。

27酒蒸法取鲜品药材350g切片，用少量白酒拌匀，待酒被吸尽，放入蒸锅，蒸制2 h，取出放凉，晒干。

28干品石灰炮法取干品药材350g，与生石灰片错落叠放，多次、少量浇水，待整齐均匀冒出白烟后停止浇水，至药材可捏散时取出，晒干。

3方法与结果

31对照品溶液的制备准确称取120℃干燥恒重的芹菜素标准品107mg，甲醇溶解，定容至25mL，摇匀，得浓度为043 mg/mL的芹菜素标准溶液。

32吸收波长的选择分别取芹菜素标准溶液05mL，50%甲醇提取的供试品05mL，分别于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取各溶液适量至10mL比色皿中，用甲醇溶液作空白对照，在190～800nm波长范围内分别扫描对照品溶液及供试溶液的吸收曲线。结果显示两者在268nm处均有稳定的最大吸收，故选择此波长作为测定波长。见图1。

33标准曲线的制作分别精密吸取芹菜素对照品溶液004、005、006、007、008、009mg于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到5个不同浓度的对照品溶液，取各溶液适量至10mL比色皿中，以甲醇溶液作空白对照，在最大吸收波长处测定各溶液的吸光度A值，以浓度C对吸光度A作图，得回归方程A=007299C+012643，R=09997（C：μg/mL）。结果表明芹菜素在342～770μg/mL的范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系。

34方法学考察

341重复性试验取同一批药材（过40目筛）6份，按上述优选所得的提取工艺制备供试液，进行测定计算，根据标准曲线计算半截烂总黄酮含量，RSD%为066%（n=6），表明重复性好。见表1。

342稳定性试验取同一供试液，分别在0、20、30、40、50、60min测定其吸光度，计算RSD%为028%，表明样品在60min内稳定。见表2。

343精密度试验取4号芹菜素标准溶液依法连续测定6次，记录各吸光度，计算其RSD%为001%，表明仪器精密度良好。见表3。

35回收率试验精密称取半截烂药材粉末（总黄酮含量为40434mg/g，过40目筛）6份，每份05g，加入芹菜素对照品适量，依法制得供试液，精密吸取02mL供试液于5mL容量瓶中，甲醇定容，测定各供试品溶液的吸光度A值，计算其总黄酮回收率为10219%，RSD%为191，表明回收率良好。见表4。

36样品测定平行取半截烂各炮制品粉末（过40目筛）3份，每份10g，加入50%甲醇30mL，静置30min，超声提取40min，冷却后补重，过滤，精密吸取滤液测定其吸光度，按标准曲线计算各总黄酮含量。见表5。

实验结果可见，不同炮制方法的苗药半截烂总黄酮含量不同，并且“干品石灰炮”制法所测得总黄酮含量最高，“蒸法”、“童便制法”等总黄酮含量也较高，而“石灰浸后蒸制”、“石灰水泡”等制法測得半截烂总黄酮的含量则较低。

4讨论

苗药半截烂，苗族名为Xiex lil janb，主要分布于我国西藏东部、贵州、云南、四川南部、广西至湖南南部等[7]。对于半截烂的研究主要集中在其活性成分及毒性的研究。冉海霞等[9]对半截烂肝肾毒性的探讨，发现半截烂连续使用对小鼠肝脏的组织形态学有一定影响，对其功能无损伤；对肾的组织形态学无影响，但对其功能产生了一定损伤。何康等[11]对半截烂化学成分进行研究提取8个化合物，其中雪胆甲素、胸苷等4个化合物为首次从该属植物分离得到。刘育辰等[12]通过对半截烂草酸钙晶型的观察，建立了对草酸钙针晶的含量测定方法。但对其炮制品种的研究少之又少，而半截烂在炮制后其活性成分是否产生变化，则基本无研究。本文通过对半截烂总黄酮含量的测定发现，干品石灰炮法、蒸法、童便制法含量最高，与民间使用相符，而对于这几种方法炮制的难易度，可以选用蒸法作为其最佳的炮制方法进行推广。总黄酮为天南星药材中的有效成分之一[13]，半截烂与总黄酮之间也密切相关，因此建立半截烂炮制品与总黄酮之间的关系，有助于半截烂的进一步开发，也可与民间使用相结合，为未来临床应用及半截烂质量标准的制定提供实验依据。

参考文献

[1]吴绍敏，杨红艳. 土家名药半截烂资源调查及生药学研究[J]. 中国民族民间医药杂志，2005， 74（2）：177-178.

[2]中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志（第四十五卷）[M].北京：科学出版社，2004：42.

[3]万定荣，陈卫江，钱赬，等.鄂西土家常用抗风湿类植物药[J].中国中药杂志，1993（10）：581-584.

[4]潘永华.土家药四宝[J].中国民族医药杂志，1997，（04）：35-36.

[5]吴皓，葛秀允，郁红礼，等. 天南星科四种有毒中药针晶的晶型结构和毒性的比较[C]. 中华中医药学会中药炮制分会.2009.

[6]万定荣，陈卫江，钱赬，等.鄂西土家常用抗风湿类植物药[J].中国中药杂志，1993（10）：581-584.

[7]陈春霞.民族药材雪里见的生物活性及化学成分研究[D].武汉：华中科技大学，2012.

[8]胡志平，杜江.HPLC测定苗药半截烂中芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量[J].中国民族医药杂志，2015（3）：52-53.

[9]冉海霞，赵海，杜江，等.苗药半截烂对小鼠肝、肾毒性实验的初步研究[J].实验动物科学，2015（2）：27-30.

[10]吴曙光，冉海霞，赵海，等.炮制方法对半截烂毒性作用影响的实验研究[J].时珍国医国药，2016（7）：1629-1630.

[11]何康，王进喜，殷海，等.苗药半截烂的化学成分研究[J].中药材，2016（10）：2274-2276.