高效液相色谱法测定参味益气口服液中五味子醇甲的含量

孔凡存　牛家丰　马梅芳

【摘要】 目的 建立测定参味益气口服液中五味子醇甲含量的高效液相色谱法（HPLC）。方法 色谱柱：Thermo-C18（4.6 mm×150 mm， 5 μm）， 流动相：甲醇-水（65：35）；检测波长：250 nm；流速：0.7 ml/min；柱温：40℃。结果 五味子醇甲在12.4～124.0 μg， 线性关系良好， 加样回收率99.03%， RSD=0.63%（n=6）。结论 该方法准确、稳定性好、重现性高， 易于操作， 可以作为控制参味益气口服液质量的重要方法。

【关键词】 高效液相色谱法；参味益气口服液；五味子醇甲；含量测定

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.12.097

【Abstract】 Objective To establish a method by high performance liquid chromatography （HPLC） to determine schisandrin content in Shenwei Yiqi oral liquid. Methods Chromatographic column was Thermo-C18 （4.6 mm×150 mm， 5 μm）， with mobile phase as methyl alcohol-water （65：35）. Measurement wavelength was 250 nm， with flow velocity as 0.7 ml/min and column temperature as 40℃. Results Schisandrin showed excellent linear relation in 12.4～124.0 μg， with sample adding recovery rate as 99.03%， RSD=0.63% （n=6）. Conclusion This method is accurate with excellent stability， high reproducibility and easy operation， and it can be taken as an important method to control quality of Shenwei Yiqi oral liquid.

【Key words】 High performance liquid chromatography； Shenwei Yiqi oral liquid； Schisandrin； Content determination

参味益气口服液为本院制剂， 收载于《山东省医疗机构制剂规范》第1版第1册， 由人参、黄芪、五味子、天花粉四味药物组成， 具有益气敛阴、清热生津、安神镇静之功效， 用于神经衰弱、病后体虚的治疗。为进一步控制药品质量， 本文探讨该制剂中五味子醇甲的含量测定方法， 采用高效液相色谱法对其含量进行测定， 取得满意的效果。

1 仪器与试剂

1. 1 仪器 高效液相色谱仪（日本岛津公司；LC—20AT liquid chromatograph；SPD—20A uv/vis detector；SIL—20A auto sampler；CTO—20A column oven；LC solution色譜工作站）；Thermo-C18色谱柱（4.6mm×150mm， 5 μm）；METTLER TOLEDO XS 205型分析天平（瑞士梅特勒公司）；纯水机（美国Millipore公司；FOEA26810D型）。

1. 2 试剂 甲醇（色谱纯， 天津大茂化学试剂有限公司）；水为新鲜制备的超纯水；乙酸乙酯（分析纯， 莱阳经济技术开发区精细化工厂）；五味子醇甲对照品（批号：110857-200507）：购自中国食品药品检定研究院；参味益气口服液样品（批号20150501、20150502、20150503）；缺少五味子的阴性对照样品（自制）。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件[1] 色谱柱：Thermo-C18（4.6 mm×150 mm， 5 μm）；流动相：甲醇-水（65：35）；检测波长：250 nm；流速：0.7 ml/min；柱温：40℃；理论塔板数按五味子醇甲峰计算不低于2000。

2. 2 检测波长的选择 精密称取适量五味子醇甲对照品， 用甲醇溶解， 配成适宜浓度的五味子醇甲对照品甲醇溶液， 按照光谱法扫描， 发现五味子醇甲在250 nm波长处有最大吸收， 该吸收峰形良好， 适合做定量分析， 因此选择250 nm作为检测波长。

2. 3 对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品适量， 加适量甲醇溶解并定容， 制成25 μg/ml的五味子醇甲对照品溶液。

2. 4 供试品溶液的制备 精密量取参味益气口服液样品5 ml， 置分液漏斗中， 加乙酸乙酯20 ml振摇提取， 提取3次， 将乙酸乙酯提取液合并， 置水浴蒸干， 残渣加适量甲醇溶解并分次转移至25 ml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。

2. 5 阴性对照溶液的制备 取缺少五味子的阴性对照样品， 按照供试品溶液的制备方法， 制备成阴性对照溶液。

2. 6 干扰试验 吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl， 按照2.1项下的色谱条件， 分别注入液相色谱仪， 测定。参味益气口服液供试品色谱中， 在与五味子醇甲对照品色谱相应的位置上， 有色谱峰出现， 而缺少五味子的阴性对照溶液在五味子醇甲色谱峰位置处无相应峰出现， 表明缺少五味子的阴性对照样品中， 其他组分对五味子醇甲的测定无干扰。见图1

甲

2. 7 线性关系考察 精密称取五味子醇甲对照品12.4 mg， 置100 ml容量瓶中， 加甲醇溶解并定容至刻度， 摇匀， 作为五味子醇甲对照品贮备液（浓度为0.124 mg/ml）。分别精密量取五味子醇甲对照品贮备液1、2、4、6、8、10 ml， 置10 ml容量瓶中， 用甲醇溶解并定容至刻度， 摇匀， 作为6个浓度的五味子醇甲对照品溶液， 分别精密吸取10 μl， 注入高效液相色谱仪， 按上述色谱条件测定色谱峰面积， 以五味子醇甲进样量C对吸收峰面积A进行线性回归， 求得回归方程为 A=15519C-3738（r=0.9999）。表明五味子醇甲在12.4～124.0 μg， 与吸收峰面积之间呈良好的线性关系。

2. 8 精密度实验 精密吸取五味子醇甲对照品溶液（24.8 μg/ml）

10 μl， 按2.1项下色谱条件， 重复进样6次， 色谱峰保留时间稳定， 测得五味子醇甲峰面积积分值分别为386154、386225、386094、386111、386358、386079， 平均值为386170， RSD=0.03%（n=6）。表面仪器的精密度良好。

2. 9 稳定性试验 按照供试品溶液的制备方法制备一批供试品溶液（批号20150501）， 室温下分别在制备后0、4、8、12、16、24 h进样测定， 记录色谱峰面积值分别为427566、427438、427110、427094、426995、426986， 平均值为427198， RSD=0.06%， 表明供试品溶液在室温下 10 h内基本稳定。

2. 10 重现性实验 对同一批参味益气口服液（批号20150502）分别制备6份供试品溶液， 按照2.1色谱条件测定， 计算含量分别为0.1439、0.1433、0.1438、0.1432、0.1439 、0.1437 mg/ml， 平均值为0.144 mg/ml， RSD=0.22%（n=6）。表明方法的重现性良好。

2. 11 加样回收率实验 取已知五味子醇甲含量为0.144 mg/ml的參味益气口服液9份， 分别精密加入一定量的五味子醇甲对照品， 按2.4项下供试品溶液制备方法操作， 依法制备供试品溶液， 进样量10 μl， 测定， 按下列公式计算回收率。见表1。

2. 12 样品含量测定 取三批参味益气口服液样品， 按2.4项下供试品溶液制备方法操作， 按2.1项下色谱条件， 依法测定。见表2。

3 讨论

3. 1 五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效， 是本制剂中的主要药材之一， 五味子醇甲是五味子的主要活性成分之一， 具有镇静、保护脑神经细胞等多方面的药理作用[2-8]， 因此选择五味子醇甲作为该制剂质量控制的指标， 既符合中医药君臣佐使配伍理论， 又能满足现代中药分析测试的要求， 科学合理， 可操作性强。

3. 2 实验的研究阶段， 作者从提取溶媒、提取条件等方面对供试品溶液的制备方法进行了优选。实验结果表明， 乙酸乙酯萃取易于分层， 后续操作简便；提取3次以后， 增加提取次数， 测得五味子醇甲含量不再增加；故确定供试品溶液的提取方法为乙酸乙酯萃取3次。

3. 3 实验结果表明， 高效液相色谱法测定参味益气口服液中五味子醇甲的含量， 结果准确、稳定性好、重现性高， 易于操作， 可以作为控制参味益气口服液质量的重要方法。

参考文献

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[收稿日期：2016-12-02]