利用GeneXpert检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

杨丹丹

（江苏省海门市人民医院检验科，江苏 海门 226100）

利用GeneXpert检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

杨丹丹

（江苏省海门市人民医院检验科，江苏 海门 226100）

目的研究GeneXpert检测在结核分支杆菌及其利福平耐药性检测中的应用。方法选取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片阳性的肺结核患者的痰液标本。对痰液标本中的结核分枝杆菌及福平耐药性行GeneXpert检测，均与传统的罗氏培养结果和药敏试验结果比较。结果GeneXpert检测对结核分支杆菌的诊断符合率为93.1%，对利福平耐药性的诊断符合率为97.2%。结论GeneXpert检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性，具有快速而准确的特点，为结核病的诊断和治疗提供可靠的依据。

结核分支杆菌；利福平；耐药；基因芯片

结核病是一种世界性的慢性传染疾病，它由结核分支杆菌感染而引起。结核分枝杆菌的耐药性会严重影响结核病的治疗效果，因此结核分枝杆菌的耐药性检测显得尤为重要[1]。传统的结核分枝杆菌耐药性检测方法主要采用以培养为基础的绝对浓度法，需要花费较长时间得到实验结果，导致诸多不便，不能满足临床的需要[2]。随着科学技术的发展，基因芯片被应用于结核分枝杆菌耐药性检测中，可以快速、准确的检测耐药性，得到临床医学的验证和支持。本文利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性，以期为临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 标本与菌株：选取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片阳性的肺结核患者的痰液标本。

1.2 试剂与仪器：天津仪美科技有限公司Cepheid检测仪，结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒（实时荧光PCR法），商品名称：Xpert MTB/RIF。珠海贝索生物技术有限公司罗氏培养管，自行配置4%氢氧化钠溶液，孵箱，安全柜，振荡器。

1.3 GeneXpert检测试验：①标本处理：准备所需试剂耗材，在前处理管和Cartridge反应盒上标记患者姓名及病例序号。取1 mL痰标本置有螺旋盖的前处理管中，接着加入相当于痰标本2倍体积的痰标本处理液，将前处理管在震荡器上涡旋震荡30 s左右，直至无可见块状痰标本存在。②加样：将前处理管在室温静置15 min后，打开Cartridge反应盒，用一次性无菌移样管取出2 mL处理后样品由加样孔缓慢加入反应盒内。③测试：打开电脑和Gene-Xpert检测仪的电源开关，运行Gene-Xpert操作软件开始测试。④在电脑上阅读结核分枝杆菌及耐药结果。

1.4 结核分枝杆菌罗氏培养实验：①实验准备及标本处理：将培养管室温放置5～10 min，拭去管外壁的凝集水，在培养基斜面背面标记序号，患者姓名，日期。取无菌的前处理管标记患者姓名。用无菌吸管吸取痰标本1～3 mL至前处理管中，视标本性状加1～2倍体积4%氢氧化钠溶液，涡旋震荡30～60 s后开始计时15 min，室温静置。②接种：弃掉凝固水，用无菌管吸取前处理的痰标本，接种0.1 mL至培养基斜面，拧紧管盖，放在斜面架上，保持斜面水平向上，37 ℃孵箱，24 h后，将培养管直立，继续培养。③定期观察生长情况。

2 结 果

2.1 GeneXpert检测实验与传统罗氏培养结果的比较：116份痰液标本，结果有108份结果相符，符合率为93.1%。基因芯片实验未检出的标本跟传统培养的快速生长菌株相吻合（后经南通疾控确诊为非结核分枝杆菌）。可见准确率很高。见表1。

表1 GeneXpert检测实验与传统罗氏培养结果的比较

2.2 GeneXpert检测与药敏试验对利福平耐药检测结果（数据来自南通疾控中心）的比较：108株结核分枝杆菌分离株，采用GeneXpert检测和药敏试验检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性，其中前者有8例耐药例，后者有7例耐药，其他都为敏感，符合率为97.2%。见表2。

表2 GeneXpert检测与药敏试验对利福平耐药检测结果

3 讨 论

结核病传统的检测方式是药敏试验，通过细菌培养试验的方式对结核分枝杆菌进行检测[3]。药敏试验检测结核分枝杆菌的最大问题在于，需要过长的时间导致在临床实践中的应用价值较低[4]。基因芯片技术被用于检测基因的突变，可以快速检测多个基因的突变位点及其类型，是检测结核分枝杆菌的有效检测方[5]。

随着科学技术的发展和分子生物学技术的进步，基金芯片被越来越多的应用于结核分枝杆菌的检测中。吴国兰[6]等探讨基因芯片对结核分枝杆菌的诊断价值和耐药性分析，结果显示基因芯片对结核分枝杆菌的诊断结果与药敏试验结果完全相符，对利福平耐药性的诊断符合率为93.7%，表明基因芯片技术对结核分枝杆菌及其利福平耐药性的检测具有极高的准确性。耿红[7]等探讨基因芯片检测结核分支杆菌对利福平耐药性的诊断效果，结果显示基因芯片与药敏试验相比，对利福平的总灵敏度为91%，特异度为96%，表明基因芯片技术检测利福平耐药性具有良好的诊断效果。李晓非[8]等评价基因芯片对结核分枝杆菌的诊断价值，结果显示基因芯片技术与培养法比较，对结核分枝杆菌的诊断符合率为100%，对利福平耐药性的诊断符合率为94.5%，表明基因芯片可以准确诊断结核分枝杆菌，并能快速检测利福平的耐药性，具有巨大的发展空间。本研究显示，基因芯片技术与药敏试验比较，对结核分枝杆菌的诊断符合率为91.8%，对利福平耐药性的诊断符合率为90.5%，与以上研究结果相符。

基因芯片是通过将探针固定在基片上，将样本核酸进行杂交，通过探针分子的杂交信号强度来获取样品分子的数量和序列信息。这一检测方法可以对样品进行大量序列的检测分析，与传统的低效率检测方式相比，大大提高了检测的效率。尤其是在检测结核分枝杆菌的耐药性方面，耗费的时间不超过3 d，却可以进行大量样本的试验，且准确率较高，具有广阔的应用前景。但基因芯片技术也存在一定的缺陷，不能检测所有的基因突变位点，可能对耐药检出率造成一定的影响，因此在目前尚不能完全取代药敏试验，但随着科学的发展和技术的改进，基因芯片技术将更加完善，检出结果将更为可靠。

综上，GeneXpert检测可以快速准确的鉴定结核分枝杆菌，同时对利福平耐药性检测具有良好的敏感性和特异性，值得临床应用和推广。

[1] 王胜芬,赵冰,宋媛媛,等.我国耐药结核病的危险因素——2007年全国结核病耐药基线调查资料分析[J].中国防痨杂志,2013, 35(4):221-226.

[2] 张伟.基因芯片与传统罗氏培养检测结核分支杆菌药敏结果分析[J].安徽医学,2015,36(12):1527-1529.

[3] 黄自坤,熊国亮,姜碧霞,等.显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究[J].重庆医学,2013,42(19):2194-2197.

[4] 王浩,赵青,陈妹红,等.Sensititre(R)结核药敏板检测结核分枝杆菌药敏的方法学研究[J].河北医科大学学报,2016,37(2):187-190.

[5] 孙炳奇,张娟,孙娇,等.基因芯片技术检测结核杆菌耐药的临床研究[J].中国实验诊断学,2014,18(3):434-436.

[6] 吴国兰,陈晓红,翁丽珍,等.基因芯片技术在鉴定分枝杆菌属及早期诊断耐药结核中的价值分析[J].中国医刊,2016,51(5):44-47.

[7] 耿红,李永文,李新旭,等.中国开展基因芯片检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药性的Meta分析[J].中华传染病杂志,2014, 32(6):357-363.

[8] 李晓非,梁桂亮,普冬,等.基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和结核耐药性检测中的应用及评价[J].中国实验诊断学,2015,19(2): 204-207.

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1671-8194（2017）12-0175-02