舒畅饮丸中二苯乙烯苷的含量测定研究

甘向辉王 正童学飞＊

（1 湖北省十堰市中医医院药剂科，湖北 十堰 442012；2 湖北省十堰市中医医院神农武当中医药研究所，湖北 十堰 442012）

舒畅饮丸中二苯乙烯苷的含量测定研究

甘向辉1王 正2童学飞2＊

（1 湖北省十堰市中医医院药剂科，湖北 十堰 442012；2 湖北省十堰市中医医院神农武当中医药研究所，湖北 十堰 442012）

目的建立舒畅饮丸中二苯乙烯苷的含量测定方法。方法采用岛津LC-20A HPLC系统测定，色谱柱：symmetryC18（4.6 mm×150 mm，5 µm）；流动相为乙腈：水溶液=19∶81；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：320 nm。结果二苯乙烯苷在其检测的线性范围内线性良好，平均回收率为100.23%，RSD为1.49%。结论所建立的方法快速、准确、重复性好，可以控制舒畅饮丸的质量。

舒畅饮丸；二苯乙烯苷；含量测定；高效液相色谱法

舒畅饮丸是我院院内制剂由何首乌、白芍、甘草等14味药制成的浓缩丸，具有柔肝缓急，生津通络，宁心安神的功效。用于重症神经衰弱及心脑功能失调等症。其中何首乌为本方的君药，具有补肝肾、益精血、强筋骨之功效，而二苯乙烯苷为其主要有效成分[1]。本文以二苯乙烯苷为对照品，采用高效液相色谱法对其在舒畅饮丸中的含量进行了考察，以期能更好的控制该制剂的质量，保证临床用药疗效。

1 材 料

岛津LC-20A HPLC：紫外检测器、柱温箱、自动进样器、四元梯度泵、真空脱气机、岛津工作站；万分之一分析天平（上海越平科学仪器有限公司）；超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；超纯水机（上海精密仪器仪表有限公司）；高速离心机（盐城市凯特实验仪器有限公司）。

二苯乙烯苷（供含量测定用，批号110844-201004，购自中国食品药品检定研究院），舒畅饮丸由十堰市中医医院制剂室生产，所用乙腈为色谱纯（德国默克），水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。色谱柱：symmetry C18（4.6 mm×150 mm，5 µm）。柱温：30 ℃。流速：1.0 mL/min。流动相为乙腈：水溶液=19∶81。检测波长：320 nm。

2.2 供试品溶液的制备：选择30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇作为溶剂对要药材进行超声提取和回流提取的考察，发现60%乙醇超声提取效果最好，然后考察了10 min、20 min、30 min、40 min内提取效率，发现超声提取30 min所测定的二苯乙烯苷含量最高。

精密称取粉碎（过40目筛）的舒畅饮丸1 g，精密加入60%乙醇25 mL超声提取30 min，冷却，补重，过滤，取取续滤液，离心（10 min），取上清液即得供试品。

2.3 对照品溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备：取二苯乙烯苷对照品适量，加乙醇制成1 mg/mL的溶液，精密吸取此溶液2 mL加入10 mL的容量瓶中，即得0.2 mg/mL的对照品溶液。

2.3.2 专属性考察：按拟定色谱条件，精密吸取阴性对照溶液（缺何首乌）、对照品溶液、供试品溶液各20 µL，注入HPLC，观察色谱图，记录见图1。发现阴性对照无干扰，且对照品分离度良好，专属性较好。

图1 A为阴性对照溶液；B为对照品溶液；C为供试品溶液

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察：精密吸取对照品溶液2 µL、4 µL、5 µL、10 µL、20 µL，按拟定色谱条件，注入HPLC中测定峰面积。进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制工作曲线，计算得回归方程y=9×108x-23108，r=0.9996。表明二苯乙烯苷在线性范围内线性良好。

2.4.2 精密度试验：取舒畅饮丸（批号140120），按照“供试品溶液的制备”项制成供试品，按色谱条件连续进样5次，测得二苯乙烯苷峰面积的RSD为1.72%，表明试验精密度良好。

2.4.3 重复性试验：取舒畅饮丸（批号140120）5份，按照“供试品溶液的制备”项制成供试品，按色谱条件分别进样，测得二苯乙烯苷峰面积的RSD为1.37%，表明试验重复性良好。

2.4.4 稳定性试验：取舒畅饮丸（批号140815），按照“供试品溶液的制备”项制成供试品，按色谱条件，分别于0、1、2、4、6、8、12、24 h分别进样，测得二苯乙烯苷峰面积的RSD为1.86%，表明样品24 h内稳定性良好。

2.4.5 加样回收率试验：精密称取已知含量的同一批舒畅饮丸0.5 g（批号140524），平行操作6份，分别精密加入一定量的对照品溶液，按照“供试品溶液的制备”项制成供试品，按色谱条件分别进样，计算回收率，平均回收率为100.23%，RSD值为1.49%。

2.5 含量测定：分别取不同批号的舒畅饮丸，按照“供试品溶液的制备”项制成供试品，分别精密吸取20 μL，按色谱条件注入HPLC中，测定二苯乙烯苷的含量，结果见表1。

表1 五批舒畅饮丸中二苯乙烯苷的含量测定结果

3 讨 论

本实验在考察供试品溶液制备方法时，综合考察了提取溶剂、提取方式、提取时间，发现60%乙醇溶液超声提取30 min所得二苯乙烯苷含量最高。超声提取法具有省时、节能、提取效率高等优点，且提取中无加热过程，可避免加热因素引起的药物成分结构发生变化，能用于热敏性成分的提取，在中药质量检测的样品处理中已广泛使用[2]。采用HPLC法测定舒畅饮丸中二苯乙烯苷的含量，进一步提升了该制剂的质量控制。

[1] 方红玫,朱延焱.何首乌有效成分、毒性作用和相关研究进展[J].国际药学研究杂志,2010,37(4):283-286.

[2] 钟玲,尹蓉莉,张仲林.超声提取技术在中药提取中的研究进展[J].西南军医,2007,9(6):84-87.

Determination of Stilbene Glucoside in Shuchangyinwan by HPLC

GAN Xiang-hui1, WANG Zheng2, TONG Xue-fei2
(1 Department of Pharmacy, Shiyan TCM Hospital, Shiyan 442012, China; 2 Shen Nong Wudang Institute of Chinese Medicine, Shiyan TCM Hospital, Shiyan 442012, China)

ObjectiveTo establish a method for the determination of stilbene glucoside in shuchangyinwan.MethodsThe chromatographic separation was performed on the symmetryC18(4.6 mm×150 mm, 5 µm) with isocratic elution of acetonitrile and water(19∶81) at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃. The detection wavelength was set as 320 nm.ResultsThe method for determining stilbene glucoside showed good linearity in the test ranges.The average recoveries were 100.23% and the RSD was 1.49%.ConclusionsThe methods developed are rapid, accurate and reproducible, which is applicable to the quality control of shuchangyinwan.

Shuchangyinwan; Stilbene glucoside; Content determination; HPLC

R282.710.5

B

1671-8194（2017）12-0021-02

*通讯作者:E-mail: 13797822055@163.com