猪血抗凝剂的筛选与抗凝条件优化研究

章斌 侯小桢 杨胜远 黄诺恩

摘要[目的]筛选抗凝剂配方并优化抗凝条件。[方法]以新鲜猪血液为试材，以血液黏度、血红蛋白OD414nm值、血红细胞数量为指标，研究添加不同抗凝剂后的猪血理化与生化特性。[结果]抗凝效果最佳的抗凝剂组合与条件为柠檬酸钠100%，pH 9.19，添加量6 g/L，4 ℃冷藏保存；或六偏磷酸钠100%，pH 1.76，添加量4 g/L，常温或4 ℃保存。[结论] 对比该试验与他人研究结果，选用单一或复合型抗凝剂有待进一步探讨。

关键词猪血；抗凝剂；抗凝条件

中图分类号S879.9文献标识码

A文章编号0517-6611（2017）12-0076-03

Abstract[Objective] To screen and optimize the anticoagulant formula and condition. [Method] Taking fresh pig blood as test material and blood viscosity， OD414nm value as well as blood cell count as main indexes， physicochemical and biochemical characteristics of pig blood with addition of different anticoagulants were measured. [Result] Conditions and formula with best anticoagulant effect was 100% of sodium citrate， pH 9.19， adding amount 6 g/L and stored in 4 ℃， or sodium hexametaphosphate 100%， pH 1.76， adding amount 4 g/L and stored at room temperature or in 4 ℃. [Conclusion] Comparing experiments results got in this paper with others， using single or compound anticoagulant needs further study.

Key wordsPig blood；Anticoagulant；Anticoagulant conditions

伴随肉类加工业的快速发展，随之产生的畜禽血液数量巨大，仅猪血每月就可采集12万t[1]；而目前猪血的加工利用水平相对较低，除少量用于制备蛋白饲料外[2]，大部分直接排放，浪费资源，污染环境。据有关调查显示，猪全血中蛋白质含量18.9%，比鸡蛋高6.2%，比大米高12.7%。猪全血蛋白质中含18种氨基酸，包括8种必需氨基酸和2种半必需氨基酸；其中赖氨酸含量高达14.1%，是肉、乳、蛋含量的2倍[3]。另外，猪血浆富含大量功能性蛋白质，如白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原及凝血酶等；除此之外，猪血还含有多种生物酶、低分子氨化物、葡萄糖、维生素等多种营养物质。因此，研究并优化猪血抗凝剂，对高值化利用猪血及其产品加工有较强的实际意义。

目前，较常用的抗凝剂有肝素钠、EDTA、草酸盐、氟化钠、柠檬酸钠[4]。郭晋育等[5]比较了4种猪血抗凝剂的抗溶血效果，其研究结果表明，由25%柠檬酸钠、25%三聚磷酸钠、25%山梨糖醇、5%食盐、20%EDTA-2Na组成的复合抗凝剂在浓度15%、添加比例4.5‰条件下效果较好。施刘翠等[6]在2种磷酸钠盐对新鲜猪血抗凝特性影响的试验研究中得出，添加0.6%六偏磷酸钠和0.8%以上焦磷酸钠，可获得较佳的原血抗凝效果。笔者对比7种常用的单一或复合抗凝血剂并进行适宜组合筛选，旨在为畜禽血液抗凝血剂配方与条件优化提供试验参考。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1原料及主要试剂。新鲜猪血，取自潮州市肉类联合加工厂有限公司；主要试剂有柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、六偏磷酸钠、氯化钠、磷酸二氢钠、柠檬酸钠、三聚磷酸钠、山梨糖醇、食盐、EDTA-2Na。

1.1.2主要仪器设备。TGL-16gR型高速台式冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；NDJ系列数显黏度计，上海方瑞仪器有限公司；PHSJ-3F型pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司；JY3002型电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；血球计数板，上海市求精生化试剂仪器有限公司；B204型学生数码显微镜，重庆奥特光学仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1抗凝血剂组合确定。

组合1（A），柠檬酸10.19%、柠檬酸钠 81.98%、磷酸二氢钠 7.82%；

组合2（B），柠檬酸26.67%、柠檬酸钠 73.33%；

组合3（C），柠檬酸钠 100%；

组合4（D），柠檬酸2.63%、柠檬酸钠 19.71%、六偏磷酸钠 12.35%、氯化钠 65.31%；

组合5（E），柠檬酸2.63%、柠檬酸钠 19.71%、磷酸二氢钠 12.35%、氯化钠 65.31%；

组合6（F），六偏磷酸钠100%；组合7（G），柠檬酸钠25%、三聚磷酸钠25%、山梨糖醇25%、食盐5%、 EDTA-2Na 20%。

准确称取上述抗凝血剂组合各2.50 g，用蒸馏水定容至25 mL，测定pH；再分别与475 mL新鲜猪血充分混合（即抗凝血剂使用量为5 g/L），于室温和4 ℃下保存24和48 h后观察抗凝效果。

1.2.2指标测定。选取添加“1.2.1”各抗凝血剂组合后不產生凝结的猪血为对象，测定如下指标：①血液黏度测定。采用NDJ系列数显黏度计测定。②血红蛋白OD414nm值。量取20 mL猪血，于4 000 r/min离心10 min后取血浆液，用生理盐水稀释至10倍，于414 nm波长下测定吸光度。③血红细胞计数。取一定量的新鲜猪血于4 ℃、4 000 r/min条件下高速冷冻离心20 min，然后去血浆收集血红球，加入约1倍体积的A～G抗凝血剂，搅拌混匀后再于4 ℃、4 000 r/min条件下离心20 min，去上清液取沉淀，即得血红细胞；用计数板对血红细胞进行计数。

2结果与分析

2.1抗凝剂配方优选

2.1.1抗凝剂pH测定和抗凝效果描述。

不同抗凝剂引起的猪血液混合体系pH变化较大，对猪血所含成分的稳定性会产生不同的影响，如猪血含丰富的血红蛋白等成分，这些蛋白成分易在等电点范圍发生沉集凝固而使猪血结块凝固。该试验测得“1.2.1”所配制的7种抗凝剂A～G pH结果依次为5.46、4.84、7.69、4.94、4.96、2.48、8.55，其对猪血的相应抗凝效果如表1所示。

从表1可看出，组合C、F在常温和冷藏条件下的抗凝效果均最佳，其次为抗凝剂B、D、G在常温下和抗凝剂D、G在4 ℃也表现出较好的抗凝效果；而加入A、E组合抗凝剂的猪血凝结现象严重，不列为抗凝剂筛选组合。同时，结合各抗凝剂测定结果，进一步优化抗凝剂C、F的pH并观察其抗凝效果，结果见表2。

从表2可看出，对于添加抗凝剂并于常温条件贮放的猪血而言，抗凝剂F在pH 1.76～3.76范围内表现出较好的抗凝效果，且pH 1.76时的效果最佳；抗凝剂C在pH 9.19时表现出较好的抗凝效果。另一方面，对于添加抗凝剂并于4 ℃贮放的猪血而言，抗凝剂F和抗凝剂C分别在pH 1.26、8.69时有较好的抗凝效果。因此，该试验确定抗凝剂C的最佳pH为9.19，抗凝剂F的最佳pH为1.26。

2.1.2抗凝剂对血液黏度的影响。黏度是流体黏滞性的一种量度和流体流动力对其内部摩擦现象的直观反映。在“2.1.1”试验结果基础上，对常温和冷藏条件抗凝效果较好的猪血进行黏度测定，结果如表3所示。

由表3可知，在常温和4 ℃条件下，添加抗凝剂C的猪血黏度最低，抗凝效果最佳；抗凝剂F对4 ℃贮放的猪血同样也表现出较好的抗凝效果。

2.1.3抗凝剂对血红蛋白OD414 nm值的影响。对“2.1.1”中常温和冷藏条件下抗凝效果较好的猪血进行血红蛋白的吸光度值测定，结果如表4所示。

由表4可知，常温和4 ℃条件贮放的猪血，添加抗凝剂C所分离的血红蛋白OD值最低，其次为添加抗凝剂F。

2.1.4抗凝剂对血红细胞数量的影响。由表5可见，常温和4 ℃条件贮放的猪血，添加抗凝剂C、F、G的猪血血红细胞数量最多，其他几种抗凝剂影响差异不大。综合上述不同抗凝剂对猪血贮放状态、猪血液的黏度值、血红蛋白OD414 nm值、血红细胞数量分析，该试验选择C、F为适宜抗凝剂。

2.2抗凝剂添加量对抗凝效果的影响在“2.1”试验结果的基础上，进一步考察抗凝剂C、F的添加量对猪血常温和4 ℃的抗凝效果，结果见表6。

从表6可看出，添加6 g/L的抗凝剂C对贮放于常温和4 ℃的猪血总体表现出较好的抗凝效果；而添加4和6 g/L的抗凝剂F对贮放于常温和4 ℃的猪血总体表现出较好的抗凝效果。

3结论

根据抗凝剂加入猪血后的现象，以及猪血黏度值、OD值和血红细胞数量的综合分析，抗凝剂C在pH 9.19、添加量6 g/L、4 ℃保存条件下，表现出较好的抗凝效果；抗凝剂F在pH 1.76、添加量4 g/L、常温和4 ℃保存条件下，对猪血有较好的抗凝效果。郭晋育等[5]的研究表明，复合型抗凝剂较单一化合物有更好的抗凝血效果，该试验研究与其结论存在较明显差异，可能受到猪血本身的新鲜程度、贮放环境条件等客观因素所限，还有待进一步探讨。

猪血与抗凝剂混合体系的pH对猪血中血红蛋白等蛋白成分的存在状态有较大影响，从而对猪血凝结与否有较直接的作用。该研究仅在特定的几组抗凝剂范围内开展了抗凝效果和条件研究，适于猪血抗凝的配方与条件需做进一步筛选。

参考文献

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[2] 唐精，方怀义，梁广尧，等.草鱼对血球蛋白粉离体消化的研究[J].饲料工业，2006，27（1）：50-51.

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[4] 凌云霄，王雅静.正交实验优化新型血液抗凝剂的使用条件[J].肉类工业，2015（1）：35-38.

[5] 郭晋育，吴明文，张立娟，等.四种猪血抗凝剂抗溶血效果比较及新复合型抗凝剂最佳使用条件研究[J].畜牧与饲料科学，2011，32（8）：5-6.

[6] 施刘翠，陈从贵，蔡克周，等.两种磷酸钠盐对新鲜猪血抗凝特性影响的实验研究[J].食品工业科技，2012，33（3）：95-98.