QuEChERS dSPE EMR—Lipid—LC—MS—MS测定鸡蛋中3种聚醚だ嗫骨虺嬉┪锊辛

臧国栋 符靖雯 杨钦沾 黄子敬 陈孟君

摘要[目的]利用 Agilent Bond Elut增强型脂质去除EMR-Lipid技术，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 为前处理测定鸡蛋中3种聚醚类药物残留的液相色谱-质谱联用（LC-MS-MS）方法。[方法]鸡蛋经酸化乙腈提取，Bond Elut EMR-Lipid QuEChERS净化，采用HPLC-MS-MS上机检测。[结果]3种聚醚类药物残留在2.0～100.0 μg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系（r>0.999），回收率在84.6%～107.0%。[结论]该方法前处理方便快捷、定量结果准确、再现性好，适用于鸡蛋中3种聚醚类药物残留的测定。

关键词QuEChERS;EMR-Lipid;液相色谱串联质谱;聚醚类

中图分类号S851.34+7文献标识码

A文章编号0517-6611（2017）32-0075-02

Determination of Three Kinds of Polyether Drug Residues in Eggs by QuEChERS dSPE EMR-Lipid-LC-MS-MS

ZANG Guodong，FU Jingwen，YANG Qinzhan et al（Huizhou Center for Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing，Huizhou ，Guangdong 516008 ）

Abstract[Objective]To establish a LCMS-MS method for the determination of three kinds of polyether residues in eggs by QuEChERS dSPE EMRLipid as a pretreatment using Agilent Bond Elut enhanced lipid removal EMRLipid technology.[Method]Egg was extracted by acidified acetonitrile，purified by Bond Elut EMRLipid QuEChERS，and detected by HPLCMSMS.[Resul]There was a good linear relationship between the three kinds of polyether residues in the range of 2.0-100.0 μg/L，r>0.999.The recoveries ranged from 84.6% to 107.0%.[Conclusion]The method is convenient and accurate，and the quantitative results are accurate and reproducible.It is suitable for the determination of three kinds of polyether residues in eggs.

Key wordsQuEChERS;EMRLipid;Liquid phase tandem mass spectrometry;Polyether

聚醚類抗生素药物是现在使用最广泛的鸡用抗球虫药，在我国普遍用于治疗鸡球虫病。球虫病是由艾美球虫属原球虫感染所得[1]，可破坏家禽肠道的寄生虫疾病。感染球虫病后将会严重影响禽类的肉和蛋的产量，感染严重可导致禽类死亡。但过量添加聚醚类抗生素会增加动物肌肉和蛋中药物的残留，食用后会对人类身体健康不利，甚至可能会加重心血管患者的病情。目前报道的聚醚类抗生素残留检测方法，主要有比色法、微生物法[2]、薄层法、免疫分析法[3]、液相色谱法[4-6] 和液相色谱-串联质谱法[7-13]。比色法、微生物法、薄层法和免疫学法只能检测单一的药物残留，且结果不够准确;液相色谱法需要衍生化，操作繁琐;而液相色谱-串联质谱法灵敏度高，基质效应小，是聚醚类抗生素比较理想的检测方法。笔者采用 Agilent Bond Elut增强型脂质去除EMR-Lipid技术，建立了以QuEChERS dSPE EMR-Lipid 为前处理测定鸡蛋中3种聚醚类药物残留的高效液相色谱-串联质谱法，前處理过程简单快速，无需衍生，无需固相萃取净化，检出限较低，回收率好且再现性高，适用于鸡蛋中聚醚类抗生素残留的检测分析。

1材料与方法

1.1材料

Agilent G6460 三重串联四极杆质谱仪，美国Agilent 公司，配电喷雾离子源，配Agilent 1290 超高效液相色谱仪; TGL-16M 高速冷冻离心机，湘仪离心机公司;微孔滤膜（0.22 μm），天津津腾公司。莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素，纯度均大于95.0%，均来自德国Dr.Ehrenstorfer公司;甲醇、乙腈均为色谱纯，MERCK公司;甲酸，色谱纯，广州化学试剂厂;试验用水为Milli-Q 纯水仪净化的超纯水，美国密理博公司。

1.2标准溶液制备

标物储备液：准确称取3种标准物质，用甲醇溶解配制成100 μg/mL 标准储备液，-18 ℃保存。

混合工作液：准确量取上述各储备液适量，甲醇逐级稀释制备成1.0 μg/mL混合标准工作液，4 ℃保存。

1.3样品前处理

准确称取去壳搅拌均匀的鸡蛋样品2.0 g于50 mL离心管内，然后加入10 mL 5%甲酸乙腈提取溶液，涡旋1 min，8 ℃、12 000 r/min离心5 min，取上清液待用。dSPE EMR-Lipid吸附剂先用5 mL水活化，加入5 mL上述待用上清液，涡旋1 min，在8 ℃、12 000 r /min离心5 min，然后取5 mL上清液加入已装有NaCl和无水Na2SO4的EMR-Polish管中，充分振动盐析，8 ℃、12 000 r/min离心5 min，取适量上层乙腈过0.22 μm滤膜，供液质分析。

1.4液相色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse PlusC18柱（2.1 mm×50 mm×1.8 μm），Agilent 公司;柱温30 ℃; 流速0.3 mL/min; 进样量5 μL;流动相A为0.1% 甲酸水溶液，B为甲醇; 梯度洗脱程序见表1。

1.5质谱条件

电离方式为电喷雾电离源（ESI），正离子模式扫描，多反应监测（MRM），离子源温度为350 ℃;气体为氮气;干燥氣流速6 L/min;雾化器压力310 kPa; 鞘气温度350 ℃;通过对毛细管电压、碰撞能等质谱参数的最佳优化，最终确定3种聚醚类药物质谱条件见表2。

2结果与分析

2.1线性关系及检出限

配制3种聚醚类药物混合标准溶液浓度从2.0～100.0 μg/L进行分析，结果表明：在2.0、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/L的浓度范围内，3种药物都具有良好的线性，线性相關系数r大于0.999，记录各待测组分色谱峰面积，以各组分的进样量为横坐标（X），各组分的峰面积为纵坐标（Y）进行回归分析，以3倍信噪比（S/N=3） 对应的浓度作为方法检出限（LOD），检出限为0.2～0.5 μg/kg，结果见表3。

2.2回收率及精密度

在鸡蛋空白样品中添加2.0、5.0 以

3讨论

未来兽药残留检测的趋势是快速、简便、准确以及高通量[14]。该试验将Agilent公司新产品dSPE EMR-Lipid 去除脂质增强型产品结合标准QuEChERS方法，应用于含脂量高的鸡蛋样品，获得了理想的除脂净化效果，相比于GB/T 20364—2006《动物源产品中聚醚类残留量的测定》[15]，前处理过程简单快速，不需要固相萃取净化，定量结果准确，回收

率高，能够满足平时检测或大批量筛查的需要。

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