参芪生血颗粒的制备及质量研究

倪加影+薛蕾

摘 要：本文对参芪生血颗粒的制备工艺和质量标准进行研究。最佳的提取工艺为提取二次，提取液倍数为12倍，10倍，提取时间为120分钟，60分钟。本方法可靠、简单，可用于生产。

关键词：参芪生血颗粒；制备；工艺

地黄为参芪生血颗粒主要成分。地黄（拉丁学名：Rehmannia glutinosa （Gaetn.） Libosch. ex Fisch. et Mey.），玄參科地黄属多年生草本植物，其根部为传统中药之一，最早出典于《神农本草经》。《纲目》记载：“填骨髓，长肌肉，生精血，补五脏、内伤不足，通血脉，利耳目，黑须发，男子五劳七伤，女子伤中胞漏，经候不调，胎产百病。”地黄具有有强心、利尿、抗心脑血管疾病、神经保护、抗糖尿病、抗骨质疏松、增强免疫等多种药理作用[1-3]。本实验以地黄中梓醇为指标对参芪生血颗粒制备工艺进行研究。

1 仪器与试药

R-1050大型旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；GM-0.33II隔膜真空泵（上海笛柏实验设备有限公司）；UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）；美国必能信DHA1000超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；LC600A液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；SG-4050C双列四孔恒温水浴锅（上海硕光电子科技有限公司）；1810-B石英自动双重蒸馏水器（上海康路仪器设备有限公司）。乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）、甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）、乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）。

2 提取方法

2.1 提取方法的选择

2.1.1 粉碎目数的选择

分别将参芪生血颗粒原料粉碎过20目、30目、40目、50目。称取参芪生血颗粒原料细粉，提取工艺为提取二次，提取液倍数为12倍，10倍，提取时间为120分钟，60分钟，过滤，合并滤液，静止48小时，取上清液浓缩适量。采用高效液相测定浓缩膏梓醇的含量，计算提取率。实验结果表明将参芪生血颗粒原料粉碎过20目、30目、40目、50目无明显差异，所以选择粉碎20目。

2.1.2 加水倍数的选择

将参芪生血颗粒原料粉碎过20目。分别称取参芪生血颗粒原料细粉，提取二次，分别采用加水倍数为14倍，12倍；12倍，10倍；10倍，8倍；8倍，6倍；提取时间为120分钟，60分钟，过滤，合并滤液，静止48小时，取上清液浓缩适量。采用高效液相测定浓缩膏梓醇的含量，计算提取率。实验结果表明加水倍数为14倍，12倍和12倍，10倍收率无明显差别，加水倍数为12倍，10倍收率高于加水倍数为10倍，8倍和8倍，6倍，所以选择加水倍数为12倍，10倍。

2.2 颗粒制备

取浓缩膏，喷雾干燥。取干膏粉，加适量糊精和乙醇，采用槽型混合机混合，采用摇摆制粒机制粒，60摄氏度干燥，采用振动筛整粒。

3 含量测定

3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[4-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18色谱柱（4.6*250*5u）；乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）为流动相；检测波长为210nm；流速1.0mLomin-1；柱温：30℃。理论板数按梓醇峰计算应不得低于2000。

3.2 供试品溶液的制备

取参芪生血颗粒适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理提取10分钟，放置至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.3 对照品溶液的制备

精密称取梓醇对照品约10mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，量取5毫升，至50毫升容量瓶内，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含梓醇20μg）。

3.4 阴性干扰试验

取除地黄的原料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与梓醇相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与梓醇相同保留时间处不存在吸收峰，因此说明选定的条件测定梓醇无干扰，具有较强的专属性。

3.5 标准曲线的制备

制备浓度为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μgomL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，梓醇对照品在5～50μgomL-1范围内线性关系良好。

3.6 精密度试验

依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取梓醇对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.86%。结果表明，本实验精密度良好。

3.7 重现性试验

分别称取同批参芪生血颗粒样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值为0.76%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

3.8 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品梓醇峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明梓醇至少在4小时内稳定。

3.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的梓醇对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.76%。

4 讨论

本实验对参芪生血颗粒提取工艺的加水倍数和药材粉碎目数进行研究。确定最佳的提取工艺为提取二次，提取液倍数为12倍，10倍，提取时间为120分钟，60分钟。

参考文献

[1]杜红阳，李东宁，付海燕，包翠芬，秦书俭.地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经样细胞分化中对Notch信号通路的影响[J].山东大学学报（医学版），2013（12）

[2]孟祥龙，肖洋，薛非非，潘飞，李坤，王明芳，马俊楠，张朔生.地黄研究前沿、热点及发展趋势——基于知识图谱的“地黄”可视化研究[J].中华中医药学刊，2016（06）.

[3]蔡春沉，王洪玺，王肃.地黄多糖对肥胖糖尿病大鼠模型的治疗作用及对血清中GLP-1、GIP水平的影响[J].中国老年学杂志，2013（18）.

[4]罗燕燕，张绍青，索建政，孙东豫，崔晓聪.高效液相色谱法测定地黄中梓醇的含量[J].中国药学杂志，1994（01）.

[5]李康清，崔亚玲，张虹，王洪磊.反相高效液相色谱法检测咽喉康口服液中梓醇的含量[J].中国实验方剂学杂志，1996（04）.