危重症手足口病患儿108例免疫功能分析*

邓慧玲，吴晓康，张玉凤，马超锋，余鹏博，陈海龙

1.西安市儿童医院感染二科(西安710003)，2.西安交通大学第二附属医院(西安710004)， 3.西安市疾病预防控制中心(西安710054)，4.陕西省疾病预防控制中心(西安710054)

·临床研究·

危重症手足口病患儿108例免疫功能分析*

邓慧玲1，吴晓康2，张玉凤1，马超锋3，余鹏博4，陈海龙3

1.西安市儿童医院感染二科(西安710003)，2.西安交通大学第二附属医院(西安710004)， 3.西安市疾病预防控制中心(西安710054)，4.陕西省疾病预防控制中心(西安710054)

目的：探讨手足口病危重症患儿的免疫功能变化及免疫学发病机制。方法：将220例经临床和实验室确诊为EV71感染的手足口病患儿根据病情分为普通型组(112 例)和危重症组(108例)，以同期门诊健康体检儿50例作为正常对照组，采用流式细胞术检测各组患儿血液中T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞(CD19+)和NK(CD16+CD56+)细胞百分比的变化。结果：手足口病患儿尤其危重症组血液中T淋巴细胞(CD3+)和NK(CD16+CD56+)细胞百分比较正常对照组显著下降(P<0.05)，B淋巴细胞(CD19+)百分比较正常对照组显著升高(P<0.05)；普通型和危重症患儿恢复期T淋巴细胞(CD3+)较急性期显著增加(P<0.05)，B淋巴细胞(CD19+)和急性期相比无显著差异(P>0.05)，而NK(CD16+CD56+)细胞却显著降低(P<0.05)。结论：手足口病患儿存在细胞免疫和体液免疫功能紊乱，对手足口病患儿免疫功能了解有助于判断病情、指导治疗。

手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease, HFMD)是由肠道病毒引起的常见传染病，多发生于5岁以下儿童，以发热，手、足、口腔等部位的疱疹或溃疡为主要表现，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎，急性驰缓性麻痹等并发症，个别重症患儿病情发展快，可导致死亡。引发手足口病的肠道病毒有20多种，柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型，B组的2、5型，以及肠道病毒71型，均为手足口病较常见的病原体，其中以柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16, CoxA16)和肠道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)最为常见[1]。本研究对不同类型患儿(危重症、普通型)及不同病程(急性期、恢复期)的手足口病患儿进行了细胞及体液免疫功能分析，以期能为研究该疾病的发病机制和治疗提供参考。

资料与方法

1 一般资料 选取2014年1月至2015 年12月在西安市儿童医院住院的HFMD 患儿220例，均符合卫生部公布的《手足口病诊疗指南(2010年版)》的诊断标准，且经西安市疾病预防控制中心病原核酸PCR检测结果均为EV71阳性感染者。220例手足口病患儿均纳入病例组，且经治疗后均临床治愈出院，其中普通型组患儿112例(男62例，女50例)，平均年龄(2.21±1.46)岁；危重症组患儿108例(男58例，女50例)，平均年龄(2.15±1.61)岁。正常对照组50例(男27例，女23例)，平均年龄(2.32±1.47)岁，为随机选取同期健康体检的正常儿童。本研究得到患者及家属的知情同意，符合医学伦理标准，经医院伦理委员会批准，三组患儿在性别、年龄等方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2 研究方法 病例组患儿于入院24 h内及恢复期(发病2～4周内)采静脉血2 ml，对照组儿童当日体检时抽取静脉血2 ml，应用Beckman Coulter XL流式细胞仪检测T淋巴细胞(CD3+)、NK细胞(CD16+CD56+)和B淋巴细胞(CD19+)百分比。新鲜全血100 μl用EDTA-K2抗凝，试管分别加相应单克隆抗体(CD3+-FITC/CD16+CD56+-PE/CD19+-PerCP Cy5.5)20μl，室温暗处放置15～20 min，用OptiLyse C溶解红细胞10 min，加PBS缓冲液500 μl洗涤，1500 r/min离心5 min，弃上清，加500 μl PBS缓冲液，制成细胞悬液。流式细胞仪分析10000个以上细胞，所用仪器及试剂均购自美国Beckman Coulter公司。

结 果

1 各组患儿急性期淋巴细胞亚群水平比较 见表1。三组患儿急性期T淋巴细胞(CD3+)、NK细胞(CD16+CD56+)、B淋巴细胞(CD19+)比较差异有统计学意义(P<0.05)，其中T淋巴细胞(CD3+)、NK细胞(CD16+CD56+)在危重症组和普通型组均较正常对照组降低(P<0.05)，且危重症组较普通型组降低更显著(P<0.05)；B淋巴细胞(CD19+)在危重症组和普通型组均较正常对照组升高(P<0.05)，且危重症组较普通型组升高更显著(P<0.05)。

表1 各组患儿急性期淋巴细胞亚群水平比较

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与普通型组比较，△P<0.05

2 不同时期淋巴细胞亚群水平比较 见表2。普通型和危重症患儿T淋巴细胞(CD3+)、NK细胞(CD16+CD56+)急性期、恢复期百分比差异有统计学意义(P<0.05)，其中恢复期T淋巴细胞(CD3+)百分比较急性期显著增加(P<0.05)，NK细胞(CD16+CD56+)却显著降低(P<0.05)，而普通型和危重症患儿急性期、恢复期B淋巴细胞(CD19+)百分比无显著差异(P>0.05)。

表2 急性期与恢复期淋巴细胞亚群水平比较(%)

注：与急性期比较，*P<0.05

讨 论

手足口病是近年来高发于婴幼儿的一种常见传染病，大多数患儿症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征，少数患儿可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。引起手足口病的肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行，其中以EV71感染引起重症病例的比例较大[2]。

机体的抗感染能力与免疫状态密切相关，免疫功能降低或紊乱是患各种感染性疾病的重要原因[3]。手足口病的发生、转归和预后与机体免疫功能状态紧密相关。本团队前期研究发现手足口病尤重型患儿存在较明显的细胞免疫功能低下，在抗感染治疗的同时，应注意免疫调节治疗[4]。在临床治疗中应用具有免疫调节作用的药物可有效缩短热退时间，缩短手足皮疹消退时间及口腔溃疡愈合时间，提高临床药物的疗效及患者治愈率，减轻患儿痛苦[5]。有研究报道EV71感染可致细胞免疫功能紊乱及细胞因子过度产生[6]。EV71感染患儿机体免疫功能随病情程度而变化，轻症患者处于全身炎症反应状态，重症或危重症病例处于代偿性炎症反应或混合性拮抗反应状态，外周血T淋巴细胞、NK细胞逐渐降低[6]。张克昌等[7]对手足口病患儿淋巴细胞亚群及细胞因子浓度的研究发现手足口病患儿细胞免疫和体液免疫功能存在显著变化，其中重症患儿外周血T淋巴细胞含量明显低于轻症患儿及正常儿童，两组患儿NK细胞无显著差异，但重症患儿治疗后NK细胞却下降，两组B淋巴细胞无显著差异。梁小娟等[8]检测手足口病患儿T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞表明，CD3+、CD3+CD4+以及CD3-CD16+CD56+淋巴细胞亚群百分比均较对照组下降，且重症患儿低于普通患儿，而 CD3-CD19+和CD19+CD23+淋巴细胞亚群百分比均较对照组升高。付建军等[9]对EV71型手足口病患儿免疫功能分析发现重症手足口病患儿细胞免疫功能低于正常儿童，而NK细胞无显著差异。

本研究结果与已报道研究有相似之处，HFMD患儿细胞免疫功能降低，而体液免疫水平有增强的趋势，其中危重症组患儿细胞免疫降低和体液免疫水平增高更加显著。文献报道[8]，对于病毒感染，尤其是肠道病毒感染，参与防御的主要是T淋巴细胞或是NK细胞，在病毒入侵机体时，首先参与应答的是NK 细胞，NK 细胞作为固有免疫应答细胞，无需抗原致敏，就可以直接杀伤病毒感染的靶细胞，是机体防御病毒感染的第一道防线。NK细胞活化后，通过分泌(γ干扰素)IFN-γ、(白细胞介素-2)IL-2、(肿瘤坏死因子)TNF等细胞因子，诱导Th1型免疫反应，上调Th1/Th2表达，从而发挥免疫调节作用。而T细胞可以释放多种细胞因子，参与机体免疫应答，在机体抗感染包括抗病毒感染中发挥重要作用。机体抗病毒能力降低、体液免疫水平增高造成炎症反应，有可能是疾病发生的重要机制。随着疾病的恢复，细胞免疫功能水平有所改善和提高，验证了手足口病的发生发展可能与机体细胞免疫功能具有密切关系，而恢复期NK细胞降低有可能免疫过度，造成NK细胞功能的损伤短期内无法修复。

[1] 赵成松,赵顺英.手足口病的流行概况和应对策略[J].中国实用儿科杂志，2009，24(6):419-421.

[2] 刘永梅,刘 芳,曹 明.手足口病171例病原学与临床特点分析[J].陕西医学杂志，2016,45(3):347-347,373.

[3] 程小丽,陈 葳,杨玉琮,等.支气管肺炎患儿机体免疫功能变化的分析[J].免疫学杂志，2012,28(6):506-509.

[4] 邓慧玲,张玉凤,符 佳,等.手足口病患儿机体免疫功能变化及细胞因子水平的相关研究[J].医学临床研究,2015,32(2):209-211,214.

[5] 张玉凤,邓慧玲,符 佳,等.喜炎平与双金口服液配伍治疗小儿手足口病200例对照观察[J].陕西医学杂志,2016,45(5):598-600.

[6] 蔡莉芬,孙梅花,王立静,等.EV71感染手足口病患儿免疫功能研究及其临床意义[J].河北医药,2011,33(7):1055-1057.

[7] 张克昌,曹明杰,李维春,等.手足口病患儿体内淋巴细胞亚群和细胞因子水平变化及意义[J].山东医药,2013,53(7):19-22.

[8] 梁小娟,王 艳.喜炎平注射液治疗小儿手足口病38例[J].陕西中医，2014,35(3)：285-286.

[9] 付建军,王 烨,王巧侠,等.西安地区肠道病毒71型手足口病患儿细胞免疫功能的临床研究[J].陕西医学杂志,2014,43(9):1135-1137.

(收稿：2016-05-20)

Analysis on immunologic function of 108 cases of children with critical hand, foot and mouth disease

Deng Huiling, Wu Xiaokang, Zhang Yufeng, et al.

Second Department of Infection, Xi’an Children’s Hospital (Xi’an 710003)

Objective: To investigate immunologic functional status and immunological pathogenesis of patients with critical hand, foot and mouth disease. Methods: 220 children with hand, foot and mouth disease were collected and confirmed as EV71positive through clinical and laboratory diagnosis. According to the patient's condition, samples were divided into normal group (112 cases) and critical group (108 cases). At the same time, another 50 healthy children were recruited as controls. The levels of T cell subgroups(CD3+, CD19+and CD16+CD56+)in the blood of children were detected by flow cytometry. Results: The percentages of T lymphocytes (CD3+) and NK cells (CD16+CD56+) in the blood decreased in HFMD patients versus those in controls(P<0.05), and B lymphocyte (CD19+) was just the opposite (P<0.05), especially in critical cases. In recovery stage, the percentages of T lymphocytes (CD3+) in the blood increased significantly compared to acute stage(P<0.05)，and no significant difference in the percentages of B lymphocytes (CD19+), while the percentages of NK cells (CD16+CD56+) were dramatically decreased(P<0.05). Conclusion: Dysfunction of cellular immunity and humoral immunity occur to the patients with hand, foot and mouth disease. To know more about immunity of children with hand, foot and mouth disease is beneficial to judge the condition of disease and guide the therapy.

Hand, foot and mouth disease/blood T-lymphocytes/metabolism B-lymphocyte/ metabolism Critical disease Children

*陕西省科学技术研究发展项目(2011K12-82)

手足口病/血液 T淋巴细胞/代谢 B淋巴细胞/代谢 危重病 儿童

R725.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.05.004

陕西省科技统筹重点产业创新链工程计划项目(2016KTZDSF02-04)

西安市科学技术局医疗卫生研究项目(2016052SF/YX08)