带状疱疹患者T细胞亚群的检测

蒋 思 郑楷平 刘 琴 杜田锴 黎 锦 宋继权



·论著·

带状疱疹患者T细胞亚群的检测

蒋 思1郑楷平1刘 琴1杜田锴1黎 锦2宋继权1

目的： 检测带状疱疹患者外周血T细胞亚群表达水平。方法： 采用流式细胞仪检测116例带状疱疹患者及80名健康对照者外周血T细胞亚群。结果： 带状疱疹患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞均显著高于健康人群，患者不同年龄组间、不同病程组间CD3+T细胞、CD4+T细胞无明显差异。结论：带状疱疹患者CD3+T细胞、CD4+T细胞升高，提示特异性细胞免疫得以重建。

带状疱疹； T细胞亚群

带状疱疹病原体为水痘带状疱疹病毒(VZV)，初次感染后，VZV便潜伏于颅神经及背根感觉神经节，当其再次活化时则可引起健康人或免疫抑制患者发生带状疱疹[1,2]。本病的发生发展与细胞免疫功能密切相关，VZV特异性细胞免疫水平下降是诱发带状疱疹的关键[3]，但发病后常获终生免疫力，提示带状疱疹患者患病后重建VZV特异性免疫力。为进一步探索带状疱疹患者细胞免疫过程，笔者对116例带状疱疹患者进行了T细胞亚群分析。

1 资料和方法

1.1 研究对象 选取2016年1～9月我院皮肤科病房住院治疗的带状疱疹患者116例为研究对象，同时选取相同时间段来我院体检中心体检的健康人群80名为对照组。所有带状疱疹患者均具有典型的临床表现，符合诊断标准[4]。排除标准：合并恶性肿瘤；合并自身免疫性疾病；使用免疫抑制剂者；HIV患者；妊娠及哺乳期妇女。发病年龄为20～90岁，平均(59.72±13.805)岁；发病时间为1～15天，平均(5.69±2.671)天。

分组情况：研究证明VZV特异性细胞免疫水平40岁时达最高峰，之后随年龄增长而下降[5]，而60岁以上人群为带状疱疹高发人群，故按发病年龄分为4组，即≤40岁、41～50岁、51～60岁、≥61岁；根据病毒感染后免疫应答的时相变化，通常感染后3天效应性T细胞即开始活化、8～9天达到高峰，故按发病时间分为3组，即≤3天、4～7天、≥8天。正常对照组年龄17～89岁，两组间年龄与性别构成均无统计学差异，具有可比性。

1.2 检测方法 100 μL抗凝血加入FITC标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体孵育(所有抗体均购自Abcam公司)，上流式细胞术仪检测(美国BD公司生产)，配套软件分析，计算CD3+、CD4+、CD8+各细胞群的相对比值。

2 结果

2.1 带状疱疹患者与健康人群相比，外周血总T细胞(CD3+T细胞)百分比与CD3+CD4+T细胞百分比均升高，差异有统计学意义，两组间CD8+T细胞百分比差异无统计学意义(表1)。以正常参考范围作参照，116例带状疱疹患者仅有1例CD3+T细胞低于正常值下限，52.6%位于正常范围，47.4%高出正常值上限(图 1)；33.6%的患者CD3+CD4+T细胞位于正常参考范围，66.4%超过正常值上限(图2)。

图1 CD3+T细胞(%)正常参考范围为38.56%～70.06%(两条红线之间的范围)。116例带状疱疹患者仅有1例T细胞低于正常值下限，52.5%的位于正常值范围，47.4%高出正常值上限 图2 CD3+CD4+T细胞(%)正常参考范围为14.21%～36.99%(两条红线之间的范围)。116例带状疱疹患者33.6%位于正常参考范围，66.4%超过正常值上限

表1 带状疱疹患者与健康人群外周血T细胞亚群检测结果 %

2.2 带状疱疹患者不同年龄组相比，各年龄组间外周血总T细胞(CD3+T细胞)、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞百分比差异均无统计学意义(表2)。

表2 带状疱疹患者不同年龄组间T细胞亚群检测结果 %

2.3 带状疱疹患者不同病程组间比较，≤3天、4～7天、≥8天各组间外周血总T细胞(CD3+T细胞)、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞百分比差异均无统计学意义(表3)。

表3 带状疱疹患者不同病程组间T细胞亚群检测结果 %

3 讨论

带状疱疹发生与VZV特异性T细胞免疫有关。人类初次感染水痘带状疱疹病毒后表现为水痘，之后该病毒便长期潜伏于颅神经及背根神经节，同时获得VZV特异性细胞免疫并维持在一定水平[6]，当机体免疫力下降时可诱发带状疱疹。但本文研究结果发现，检测带状疱疹患者T细胞亚群并未出现“免疫力低下”，反而呈现“免疫力增强”现象，说明带状疱疹患者患病后特异性细胞免疫力得以重建。

潜伏病毒的亚临床再活化是终生存在的，但并不会发病，这得益于该病毒特异性T细胞免疫的存在。但随年龄增长(>40岁)或存在免疫抑制情况时，水痘带状疱疹病毒特异性T细胞免疫水平下降，当该免疫水平下降至某一临界值后则不足以抑制潜伏的水痘带状疱疹病毒，结果导致病毒播散引发神经节炎，临床表现为神经支配区域的皮肤神经痛以及随之而出现的水疱[5]。

T细胞是机体介导细胞免疫的重要细胞群，各T细胞亚群相互协作共同完成免疫应答，若T细胞总数或不同亚群的比值发生改变，可能与某些疾病的发生发展有关[7]。CD4+T细胞在抗病毒免疫反应中发挥极其重要的作用[8]。本文研究结果显示带状疱疹患者CD3+T细胞与CD4+T细胞较正常人群显著升高，CD3+T细胞升高主要由CD4+T细胞升高所致，说明CD4+T细胞与带状疱疹特异性细胞免疫关系密切。带状疱疹发病期间，大量VZV活化复制，激活免疫系统使得原本下降的VZV特异性细胞免疫水平回升，并维持在一定水平，这便为免疫力正常人群几乎不会再次发病提供了合理的解释[9]。

Weinberg等对753名健康人群定期随访检测水痘带状疱疹病毒特异性细胞免疫水平，在观察时间内其中73例发生带状疱疹，从而将发生带状疱疹人群患病前后的细胞免疫水平与未发生带状疱疹人群的免疫水平进行比较。结果发现，患病人群在发病前的细胞免疫水平显著低于未患病人群的细胞免疫水平，但VZV特异性效应T细胞反应快速上升并在带状疱疹皮疹出现后的1～3周达到峰值，第3～6周快速下降，在随后至少2年维持稳定水平。VZV特异性记忆T细胞上升慢，在皮疹出现后3～6周达到高峰，在感染后第1年内下降，此后2年或更长时间以稳定水平维持[10]。该研究结果揭示了带状疱疹患者特异性细胞免疫水平在发病前下降、发病后上升并维持稳定水平的变化特点。本文检测结果与Weinberg等[10]的结果一致。另有研究者通过VZV特异性IFN-γ释放试验，间接证实带状疱疹患者围患病期的特异性细胞免疫水平呈升高状态[3]。上述研究结果均证明带状疱疹患者患病后特异性细胞免疫水平得以重建。

CD8+T细胞具有特异性杀伤病毒感染细胞的功能，在感染恢复中起重要作用，但本文未发现带状疱疹患者与正常人群CD8+T细胞之间具有显著差异。另外，本文也未发现不同年龄组间、不同病程组间CD3+T细胞百分比、CD3+CD4+T细胞百分比和CD3+CD8+T细胞百分比有显著差异，说明患病短期内获得的细胞免疫水平可能与年龄关系不大。拟后期进一步扩大样本量和后期定期随访检测T细胞亚群，探索特异性细胞免疫水平随病程延长及年龄增长的变化趋势。

4 小结

VZV特异性细胞免疫水平的下降或升高与带状疱疹发病与否关系密切，其中CD4+T细胞发挥重要作用。带状疱疹患者发病前因各种因素使该细胞免疫水平下降，但发病后又迅速升高，并通常可获终生免疫力，提示VZV特异性细胞免疫在潜伏VZV病毒再活化刺激下得以重建。另外，VZV特异性细胞免疫力升高可以降低带状疱疹的严重程度及带状疱疹后遗神经痛的发生率[11]。T细胞亚群测定可反映患者细胞免疫水平的高低，从而有助于评估病情与判断预后。

[1] Cohen J, Straus S. Arvin AVaricella-zoster virus[M]. 5th edn. Philadelphia: Lippincott-Williams & Wilkins,2007.2547-2586.

[2] Zerboni L, Arvin AM. The patho- genesis of varicella zoster virus neurotropism and infection.In:Carol R (ed) Neurotropic viral infections[M]. New York: Cambridge Press,2008.225-250.

[3] Otani N, Yamanishi K, Sakaguchi Y, et al. Varicella-zoster virus-specific cell- medamediated immunity in subjects with herpes zoster[J]. J Immunol Methods,2012,377(1-2):53-55.

[4] 赵辨.临床皮肤病学[M].3版.南京：江苏科学技术出版社，2001.301.

[5] Allison A, Ann AM, Moffat JF. Varicella-zoster Virus[M]. New York: Springer,2010.342.

[6] Rotbart HA, Levin MJ, Hayward AR. Immune responses to varicella zoster virus infections in healthy children[J]. J Infect Dis,1993,167(1):195-199.

[7] 龚非力.医学免疫学[M].3版.北京：科学出版社，2009. 118.

[8] Whitmire JK. Induction and function of virus-specific CD4+ T cell responses[J]. Virology,2011,411(2):216-228.

[9] Hope-Simpson RE. The nature of herpes zoster:a long-term study and a new hypothesis[J]. Proc R Soc Med,1965,58:9-20.

[10] Weinberg A, Zhang JH, Oxman MN. Varicella-zoster virus-specific immune responses to herpes zoster in elderly participants in a trial of a clinically effective zoster vaccine[J]. J Infect Dis,2009,200(7):1068-1077.

[11] Malavige GN, Jones L, Kamaladasa SD, et al. Viral load, clinical disease severitand cellular immune responses in primary varicella zoster virus infection in Sri Lanka[J]. PLoS One,2008,3(11):e3789.

(收稿：2016-10-29 修回：2016-12-05)

Detection of peripheral T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster

JIANGSi1,ZHENGKaiping1,LIUQin1,DUTiankai1,LIJin2,SONGJiquan1.

1.DepartmentofDermatology,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China

SONGJiquan,E-mail:songjiq@126.com

Objective: To detect the level of T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster. Methods: T-lymphocyte subsets in 116 patients with herpes zoster and 80 healthy controls were detected by flow cytometry. Results: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster were higher than those in healthy controls. There was no significant difference in the levels of CD3+, CD4+lymphocyte among the patients in different age and duration of the disease. Conclusion: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster are increased, which indicates the reconstruction of of cellular immunity.

Herpes zoster; T-lymphocyte subsets

1武汉大学中南医院皮肤科，湖北武汉，430071 2武汉大学中南医院检验科，湖北武汉，430071

宋继权，E-mail：songjiq@126.com