RP-HPLC法测定卡博替尼原料药中卡博替尼的含量

徐 伟，詹长娟，王 华，王 翼，郭 琪（南京理工大学泰州科技学院环境与制药工程学院，江苏泰州225300）

RP-HPLC法测定卡博替尼原料药中卡博替尼的含量

徐 伟＊，詹长娟#，王 华，王 翼，郭 琪（南京理工大学泰州科技学院环境与制药工程学院，江苏泰州225300）

目的：建立测定卡博替尼原料药中卡博替尼含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Inertsil ODS-SP C18，流动相为乙腈-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH 5.2）（52∶48，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为241 nm，柱温为38 ，进样量为20 μL。结果：卡博替尼检测质量浓度线性范围为9.88～49.40 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限为11.46 ng，检测限为3.36 ng；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0%；加样回收率为98.5～101.7%（RSD＝1.2%，n＝9）。结论：该方法操作简便、结果准确，可用于卡博替尼原料药中卡博替尼的含量测定。

卡博替尼；反相高效液相色谱法；含量测定

卡博替尼（Cabozantinib）是一种多靶点分子靶向药物，具有显著的抗癌活性，可用于治疗甲状腺髓样癌（Medullary thyroid carcinoma，MTC），开创了MTC靶向治疗的新时代[1-2]。该药于2012年11月由FDA批准上市，用于不可手术切除的恶性局部晚期或转移性MTC的治疗[3-4]。临床试验已证实，其在治疗MTC时具有快速、明确且显著的临床疗效和安全性，其为进展性、转移性MTC患者带来了希望，具有良好的应用前景[5-7]。但目前尚未见测定卡博替尼原料药中卡博替尼含量的报道。因此，笔者采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）建立了测定卡博替尼原料药中卡博替尼的含量，以期为卡博替尼原料药的质量控制提供参考。

1 材料

1.1 仪器

LC-20AT型HPLC仪，包括UV-2450紫外分光光度计、SPD-20A检测器、CTO-10AS VP柱温箱、LC-20AT AB泵、DGU-20A3在线脱气机（日本Shimadzu公司）；MJF-300型超声波清洗机（无锡市美极超声波清洗机设备公司，功率：300 W，频率：40 kHz）；MP511型实验室pH计（上海精密仪器仪表有限公司）。

1.2 药品与试剂

卡博替尼原料药（南京理工大学泰州科技学院环境与制药工程学院实验室自制，批号：20150101、20150102、20150103）；卡博替尼对照品（南京理工大学泰州科技学院环境与制药工程学院实验室自制，批号：20141220，纯度：98.8%）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH 5.2）（52∶48，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：241 nm；柱温：38 ；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取卡博替尼对照品约50 mg，精密称定，置于500 mL量瓶中，加乙腈定容，称定质量，超声处理10 min使其溶解，放冷，再次称定质量，用乙腈补足减失的质量，摇匀，即得对照品贮备液。取上述对照品贮备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 取样品约50 mg，精密称定，置于500 mL量瓶中，加乙腈定容，称定质量，超声处理10 min使其溶解，放冷，再次称定质量，用乙腈补足减失的质量，摇匀，即得供试品贮备液。取上述供试品贮备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加乙腈定容，摇匀，即得。

2.2.3 空白溶液 取流动相适量作为空白溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度＞1.5；理论板数以卡博替尼峰计为13 698，保留时间为16.6 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加乙腈定容，摇匀，即得系列对照品溶液。取上述系列对照品溶液各20 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以卡博替尼质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得卡博替尼回归方程为y＝1.319× 108x+4.126×103（r＝0.999 9）。结果表明，卡博替尼检测质量浓度线性范围为9.88～49.40 μg/mL。

2.5 定量限与检测限考察

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得定量限（LOQ）；当信噪比为3∶1时，得检测限（LOD）。结果，卡博替尼的LOQ为11.46 ng，LOD为3.36 ng。

2.6 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液20 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，卡博替尼峰面积的RSD＝1.7%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20150101）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，卡博替尼峰面积的RSD＝1.4%（n＝5），表明供试品溶液在室温放置8 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取样品（批号：20150101）适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，卡博替尼的平均含量为97.8%，RSD＝1.4%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取样品（批号：20150101）约10 mg，共9份，分别置于100 mL量瓶中，加入低、中、高质量的卡博替尼对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Result of recovery test（n＝9）

2.10 样品含量测定

取3批样品（批号：20150101、20150102、20150103）各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算卡博替尼的含量。结果，3批样品中卡博替尼的含量分别为97.9%、98.3%、98.6%（n＝3）。

3 讨论

笔者曾考察乙腈-水、乙腈-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH5.2）作为本研究的流动相时对色谱峰分离的影响。结果，当乙腈-水为流动相时，调节流动相的比例，各色谱峰分离均不理想；当乙腈-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH5.2）为流动相时，乙腈与0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液体积比在45∶55～45∶55之间时各色谱峰均可达到基线分离，且乙腈比例越高，保留时间越小，因此选择乙腈-0.02 mol/L乙酸铵缓冲溶液（pH5.2）（52∶48，V/V）为本试验的流动相。

综上所述，本方法操作简便、结果准确，可用于卡博替尼原料药中卡博替尼的含量测定。

[1] Bowles DW，Kessler ER，Jimeno A.Multitargeted tyrosine kinase inhibitors in clinical development：focus on XL-184（cabozantinib）[J].Drugs Today：Barc，2011，47 （11）：857-868.

[2] 张秀颖，刘尧，白秋江，等.新型分子靶向抗癌药物卡博替尼[J].医药导报，2013，32（11）：1468-1470.

[3] 夏训明.美国FDA批准Cometriq（cabozantinib）治疗甲状腺髓样癌[J].广东药学院学报，2012，28（6）：627.

[4] 陈惠玲，张志叶，杨彦彪.治疗转移性甲状腺髓样癌的新药：Cabozantinib[J].中国药房，2014，25（29）：2766-2769.

[5] 郑希元，姜汉杰，蒲小平.抗甲状腺髓样癌新药卡博替尼[J].中国新药杂志，2013，22（17）：1990-1993.

[6] 吕娟丽，刘洋，孙慧萍.甲状腺髓样癌治疗新药Cabozantinib苹果酸盐[J].中国临床药学杂志，2014，23（1）：28-62.

[7] 赵锐，张喜全，孟庆义.以c-Met为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂的研究进展[J].药物与临床研究，2012，20 （6）：519-522.

（编辑：刘 柳）

Content Determination of Cabozantinib in Its Raw Material by RP-HPLC

XU Wei，ZHAN Changjuan，WANG Hua，WANG Yi，GUO Qi（School of Environmental and Pharmaceutical Engineering，Taizhou Institute of Sci.&Tech.，Nanjing University of Science&Technology，Jiangsu Taizhou 225300，China）

Cabozantinib；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2017）12-1696-03

2016-04-30

2017-01-12）

＊讲师，硕士。研究方向：药物化学。电话：0523-86150675。E-mail：541175674@qq.com

#通信作者：讲师，硕士。研究方向：药物分析。E-mail：Jenny_yz@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.12.31

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a method for the content determination of cabozantinib in its raw material.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Inertsil ODS-SP C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.02 mol/L ammonium acetate buffer（pH 5.2，52∶48，V/V）at the flow rate of 1.0 mL/min.Detection wavelength was set at 241 nm，the column temperature was 38 ，and sample size was 20 μL.RESULTS：The linear range of cabozantinib were 9.88-49.40 μg/mL（r＝0.999 9）.The limit of quantitation was 11.46 ng，and the limit of detection was 3.36 ng.The RSDs of precision，stability，repeatability tests were all lower than 2.0%；recoveries were 98.5%-101.7%（RSD＝1.2%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and suitable for the content determination of cabozantinib in its raw material.