烟雾病患者外周血来源内皮祖细胞体外培养的能力探讨

2017-05-13张文高赵志煌李亚斌尹港峰

中国卫生标准管理 2017年1期

张文高赵志煌李亚斌尹港峰

张文高赵志煌李亚斌尹港峰

目的探讨烟雾病患者外周血来源内皮祖细胞体外培养的能力。方法收集近几年我院因脑缺血或脑出血入院的烟雾病患者，定义为实验组，对照组为同期我院健康志愿者。结果（1）实验组和对照组培养第9 d、12 d增殖速率差异存在统计学意义（P＜0．05），实验组和对照组培养第3 d、6 d、12 d、15 d增殖速率差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）实验组和对照组EPCs迁移细胞数（26．67±2．333）、（29．30±2．679），差异无统计学意义（P＞0．05）。（3）实验组和对照组EPCs迁移细胞数（23．12±2．36）、（23．61±2．14），差异无统计学意义（P＞0．05）。结论本文推测烟雾病患者中，内皮祖细胞与正常血管存在类似形态与增值、粘附、迁移功能。

烟雾病；内皮祖细胞；体外培养

烟雾病是一类颅内血管病变，表现为颈内动脉主干或大分支外径减小，管壁膜增厚，呈“洋葱皮状”，导致前循环流量减低。众多研究指出[1]烟雾病与众多脑血管病存在共性：血管损伤与修复的失衡或异常导致出现相应症状。1997年，国外学者体外分离出循环内皮祖细胞（EPCs），发现了新的血管内皮损伤再修复的细胞来源[1]。还有学者[2]提出EPCs减少可增加动脉粥样硬化心血管事件发生。还有研究指出[2]烟雾状脑缺血、脑出血患者增厚的血管内膜中发现EPCs的持续增高。本文拟收集近几年我院烟雾病患者，分析内皮祖细胞在疾病中所扮演的角色，对揭示该疾病的发生过程提供思考。

1 资料与方法

1.1 资料

收集近几年我院因脑缺血或脑出血入院的烟雾病患者14例，定义为实验组。对照组为同期我院健康志愿者14例。实验组平均年龄（53.4±15.4）岁，其中男8例，女6例；对照组平均年龄（52.1±16.2）岁，其中男9例，女5例，两组性别、年龄等对比，P＞0.05，差异无统计学意义。

1.2 入选标准

（1）入院后行全脑DSA检查，诊断为烟雾病。（2）性别不限。

1.3 排除标准

（1）中枢神经系统血管炎者。（2）自身免疫系统疾病者。（3）心脑血管疾病者。

1.4 主要试剂盒设备

（1）主要试剂：Ficoll淋巴细胞分离液、M199培养液、胎牛血清、VEGF、bFGF、D-Hank's平衡液、纤维连接蛋白、CCK-8试剂盒等。（2）主要设备：CO2培养箱、工作台、低温离心机、超纯水装置、显微镜、低温冰箱等。

1.5 实验方法与观察指标

（1）循环内皮祖细胞的分离和培养：采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，单个核细胞初步培养和EPCs方向诱导分化。（2）细胞荧光鉴定。（3）细胞的活动性鉴定：细胞增殖能力、细胞迁移能力、细胞粘附能力测定。

1.6 观察指标

对比不同培养时间内两组EPCs吸光度，以及两组细胞迁移能力及粘附能力。

2 结果

2.1 不同培养时间内两组EPCs吸光度

实验组和对照组培养第9 d、12 d增殖速率对比，差异存在统计学意义（P＜0.05），实验组和对照组培养第3 d、6 d、12 d、15 d增殖速率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 两组细胞迁移能力对比

实验组和对照组EPCs迁移细胞数（26.670±2.333）、（29.300± 2.679），两者迁移能力相似（P＞0.05）。

2.3 两组细胞粘附能力对比

实验组和对照组EPCs迁移细胞数（23.12±2.36）、（23.61± 2.14），差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

烟雾病为医嘱颅内血管病变，血管狭窄或闭塞，致前循环血量减低，可有脑缺血、脑出血等症状[3]。国外学者在1969年首次提出“烟雾状血管”的命名，其发生机制受到广泛的研究[4]。

3.1 血管内皮细胞生物学行为

以往观念认为血管内皮细胞是不稳定细胞，参与血管内皮损伤后得修复。1997年国外学者通过磁珠标记技术发现表达CD133亚型循环内皮祖细胞，骨髓动员后分化成为血管内皮细胞[5]。

烟雾病与动脉粥样硬化、先天性颅内血管改变、动脉瘤破裂、免疫介导炎性改变有众多相同点。有学者[6]对1名73岁烟雾血管患者Willis环狭窄处大动脉进行病理解剖，管壁内膜增厚约为正常血管2～3倍，弹力层结构断裂，内膜增厚呈洋葱状，狭窄动脉增厚的内膜可见原位于中膜的合体平滑肌细胞向内膜迁移增生，未见炎症细胞、钙化。内皮细胞参与血管生成、组织灌注、免疫、凝血等功能[6-7]。

3.2 成人烟雾病患者培养出与健康人相近功能的内皮祖细胞

研究指出，烟雾病存在血管闭塞、脑组织缺血等现象，同时内皮祖细胞存在升高，并诱导新生血管生成有关。有学者通过病理解剖，发现VEGFR-2阳性细胞在闭塞动脉处聚集。还有研究指出脑梗塞与脑出血的风险与内皮祖细胞增高存在正相关。本次研究结果发现实验组和对照组培养第3 d、6 d、12 d、15 d增殖速率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），同时两组细胞迁移能力、粘附能力基本类似。我们推测烟雾病患者中，内皮祖细胞与正常血管存在类似形态与增殖、粘附、迁移功能。

[1] 冯雨，陈劲草，于加省，等．手术治疗降低烟雾病脑出血发生率的研究[D]．湖北：华中科技大学，2010：58-59．

[2] 陈劲草，刘斌，李正伟，等． CT灌注成像对烟雾病行脑血管重建术的疗效评价[J]．中华神经外科杂志，2009，25（6）：537-540．

[3] 李正伟，陈劲草，于加省，等．烟雾病行STA-MCA分流术前后脑血流的TCD检测[J]．中国临床神经外科杂志，2009，14（7）：397-400．

[4] 李柏，王忠诚，孙异临，等． Moyamoya病脑血管的超微形态学研究[J]．中华神经外科杂志，1987，3（2）： 14．

[5] 陈劲草，周平，欧一博，等．联合血管重建术治疗烟雾病疗效分析[J]．中国临床神经外科杂志，2011，16（10）： 581-583．

[6] 耿万杰, 李正侠．单侧烟雾病临床特点的分析[J]．临床荟萃, 2012, 27（1）：520-522

[7] 李德生, 咸鹏, 杨伟中, 等．单侧烟雾病的临床特征[J]．中国卒中杂志, 2013, 8（5）：511-516

Study the Ability of Endothelial Progenitor Cells From Peripheral Blood in Patients With Smoke Disease

ZHANG Wengao ZHAO Zhihuang LI Yabin YIN Gangfeng The Third Department of Neurosurgery , Cangzhou Central Hospital, Cangzhou Hebei 161001, China

ObjectiveTo investigate the ability of peripheral blood derived endothelial progenitor cells from peripheral blood in patients with smoke disease.MethodsIn recent years, patients with cerebral ischemia or cerebral hemorrhage admitted to hospital were defined as experimental group. Control group for the same period in our hospital healthy volunteers.Results(1) experimental group and control group were cultured for ninth days and 12 days. The proliferation rate was different (P＜0.05). The proliferation rate of the experimental group and the control group was 3 days, 6 days, 12 days and 15 days. (2)there was no differernt in the number of migrating cells in the experimental group and the control group was (26.67 ±2.333), (29.30 ± 2.679), and the migration ability was similar (P＞0.05). (3) there was no differernt in the number of migrating cells in the experimental group and the control group was (23.12 ± 2.36), (23.61 ± 2.14) (P＞0.05).ConclusionIn this paper, we hypothesized that endothelial progenitor cells and normal vascular endothelial progenitor cells have similar morphology and proliferation, adhesion and migration.

smoke disease;endothelial progenitor cells;vitro culture