鲁北地区猪瘟疫苗免疫血清抗体测定及分析

魏 凤，张文通，李 峰，沈志强，

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

鲁北地区猪瘟疫苗免疫血清抗体测定及分析

魏 凤1，张文通2，李 峰1，沈志强1，2

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的，以淋巴结周边出血、脾脏边缘出血性梗死、回盲部淋巴纽扣状肿和肾脏密集点状出血等为特征性病理变化的猪的重大传染病[1-2]。CSF被国际动物卫生组织（OIE）列为A类动物传染病，我国将其列为一类动物传染病。目前，尽管猪瘟疫苗已普及使用，但在本单位接诊的病例中仍检测到比较高比例的猪瘟病毒[3-4]。因此猪瘟仍是危害养猪业健康发展的最重要传染病。合格的猪瘟疫苗，已被公认能够较好预防猪瘟病毒。但猪瘟病毒仍大量发生，猪瘟疫苗免疫情况存疑。为弄清楚鲁北地区猪瘟疫苗免疫效果情况，对2016年滨州畜牧兽医研究院门诊部收集的1 902份猪血清进行检测及分析，其目的是获得该区域猪瘟疫苗免疫效果情况，为防控本区域CSF提供科学参考。

1 材料和方法

1.1 材料

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分离 血液采集方法：所有采集血液的猪场或散养户均免疫猪瘟疫苗（或免疫猪瘟脾淋苗或免疫猪瘟细胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的猪均为保育阶段仔猪。

为便于统计与分析将血液来源猪场按规模分为4种类型：散养户、小型养猪场、中型养猪场及大型养猪场。其中散养户为年出栏商品猪100头以下；小型养猪场为年出栏商品猪1 000头以下；中型养猪场为年出栏商品猪5 000头以下；大型养猪场为年出栏商品猪5 000头以上。散养户每户采集6份血液，小型养猪场每个猪场采集15份血液，中型养猪场和大型养猪场每个猪场均采集30份血液。

血清分离：采用颈部静脉采集，血液37℃放置1 h，4℃静置过夜；4 000 r/min离心10 min。

1.2.2 血清ELISA抗体测定 按照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书对收集的1 902份血清进行测定。

2 结果

2.1 猪瘟脾淋苗免疫ELISA抗体测定结果

所采血清的猪场均来自猪瘟脾淋苗猪场。按照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒判定标准：ELISA（S/P值）大于0.17为免疫合格（血清ELISA抗体S/P值大于或等于0.17，相当于猪瘟正向间接血凝抗体大于或等于25）。表1结果显示，大型和中型养猪场CSFV ELISA抗体免疫合格的猪场数较高，分别达91.7%和70.0%；而小型养猪场和散养户CSFV免疫合格猪场数较低，分别为50.0%和33.3%。大型养猪场血清总免疫合格率为85.0%；而中型养猪场、小型养猪场及散养户总免疫合格率分别为56.3%、42.0%、45.6%。

表1 猪瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗体测定结果统计

2.2 猪瘟细胞毒苗免疫ELISA抗体测定结果

所采血清的猪场均来自猪瘟细胞毒苗猪场。试剂盒判定标准如2.1中所述。表2结果显示，大型和中型养猪场CSFV ELISA抗体免疫合格的猪场数较高，分别达91.7%和83.3%；而小型养猪场和散养户CSFV免疫合格猪场数较低，分别为 57.1%和50.0%。大型养猪场和中型养猪场血清总免疫合格率分别为93.9%和87.2%；而小型养猪场及散养户总免疫合格率分别为53.8%、54.2%。

表2 猪瘟细胞毒苗免疫血清ELISA抗体测定结果统计

3 分析与讨论

本单位门诊2016年接诊来自鲁北区域猪病病例403例，实验室检测到猪瘟野毒病例108例，比例为26.8%。这说明本区域猪瘟仍在不同程度的流行。为弄清楚猪瘟野毒发生率如此高的原因，对本区域免疫猪瘟疫苗的不同规模猪场免疫效果情况进行调查。

现在市售猪瘟疫苗主要有猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞毒疫苗，因此在检测时特别区分了两种疫苗。并且还对不同规模猪场免疫猪瘟疫苗情况检测时进行了细分。从检测结果看，不论是用脾淋苗还是细胞毒苗大型和中型猪场免疫效果均优于小型养猪场和散养户。从实际检测猪场数或总血清数，猪瘟细胞毒苗稍优于猪瘟脾淋苗。

在上述检测结果的基础上对免疫不合格的猪场进行了详细调查，并收集了12种猪瘟疫苗（其中猪瘟脾淋苗6种、猪瘟细胞毒苗6种）。对这12种猪瘟疫苗进行了效力检验（测疫苗种兔体感染量）发现，4种猪瘟脾淋苗和1种猪瘟细胞毒苗不合格。这说明猪瘟免疫失败疫苗不合格是一个重要原因，但不是唯一原因。

该课题的研究结果提示鲁北养猪行业在猪瘟防疫过程中，一方面要选择合格猪瘟疫苗，另一方面要正确使用猪瘟疫苗。

[1]单虎，李明义，沈志强．现代兽医兽药大全[M]．北京：中国农业大学出版社，2011：304-307．

[2]蔡宝祥主编．家畜传染病学[M]．北京：中国农业出版社，1999：147-151．

[3]蔡奕琪，朱燕秋，王悦彬．2001—2008年猪瘟抗体和猪瘟病毒监测结果分析[J]．养猪，2009（3）：73-74．

[4]杨慧君．浅谈猪瘟流行新特点与防治措施[J]．农业科技与信息，2009（3）：5．

（编辑：郭玉翠）

中国科学家用活病毒创造疫苗

【香港《南华早报》网站12月2日报道】题：中国科学家的突破敲响了致命病毒的丧钟吗？

中国科学家或许已经找到了创造有效疫苗对付世界最致命病毒的关键—通过打破传统疫苗学的两种禁忌。北京大学一个科研团队开展的研究被赞为疫苗领域的“革命”。研究论文周五刊登在美国《科学》周刊上。该团队打破疫苗研究领域的两大禁忌：先是用具备完全感染力的活病毒创造一种疫苗，然后把疫苗注入感染这种病毒的濒死动物体内。论文说，这些动物在接受注射之后都彻底痊愈。这项突破有望简化疫苗的研发过程，帮助科学家在疫情暴发几周内就得到有效的疫苗甚至疗法，以对付禽流感、非典、埃博拉和艾滋病等各类病毒。研究人员调整活病毒的遗传密码，使病毒株的自我复制机制失效。但是，他们保留了病毒的感染力，从而使宿主细胞生成免疫力。使用具有完全感染力的活病毒之前被视为一种禁忌，因为病毒会迅速传播。目前广泛销售和使用的疫苗通常含有的病毒要么已死要么毒性微弱。获准临床使用的活病毒疫苗通常都经过结构上的处理，使得毒性减弱，但这影响了疫苗的效力。此外，很多致命的病毒都没有相应的疫苗。

这项研究的带头人、北京大学药学院教授周德敏说，此前，研究界与病毒的斗争是一场必败之战。他说：“现在我们有了新的武器……能够消灭几乎任何一种病毒及其变体。这可以改变这场战斗。”

据《科学》周刊称，周的团队开展了三项实验，用活体禽流感病毒制作疫苗。他们对小鼠、雪貂和豚鼠使用了这种疫苗，它们都产生了免疫力。

分析还显示，这种人造病毒与野生病毒重组，从而使生成的病毒不能自我复制。

周说：“这不仅是一种疫苗，也是一种药物。”这种疫苗使用的禽流感病毒与天然禽流感病毒有99%以上的相似度。

周的研究团队仅仅调整了病毒DNA的3个碱基—病毒通常有几十万个这种碱基。

病毒需要食物才能存活，而氨基酸就是食物的一个来源。野生病毒几乎任何氨基酸都吃，但周德敏团队培育的基因经修改的病毒却只接受一种特定形式的氨基酸。这种非天然的氨基酸只能在实验室里制造，动物或人体内都不存在。周说：“所以，把这些病毒注入宿主体内以后，因为缺少（适合的）氨基酸，它们就无法自我复制，最终会‘饿’死。”周的团队在人造细胞系里制造这些病毒，细胞里充满了非天然的氨基酸。病毒随后将在这些人造细胞里大量自我复制。

假设疫情暴发，研究人员可以迅速从患者体内分离出未知的病毒株，修改病毒的3个碱基，然后用这种基因经修改的病毒生产疫苗提供给公众。这一切只需几周就可实现。

疫苗还可以注射给已感染病毒的患者。

周说：“副作用非常小，接种者几乎没有感觉。”他说，他相信这项技术“很快”就将造福患者。

（转自参考消息[N]，2016-12-03）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)02-0116-02

2017-01-19

山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目（SDAIT -08-17）

魏 凤（1979-），女，河南遂平人，助理研究员，硕士，主要从事兽用生物制品研究工作.E-mail：hzndzwt1@163.com