禽大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的诊断

2017-05-12贾国勇

中国畜牧兽医文摘 2017年4期

关键词：头孢曲松琼脂沙门氏菌

贾国勇

(青海省海南州畜牧兽医工作站,青海海南 813099)

禽大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的诊断

贾国勇

(青海省海南州畜牧兽医工作站,青海海南 813099)

利用采自贵德县清源土鸡场发病鸡的病料，通过细菌的分离培养鉴定和药敏试验对病原体、诊断与治疗进行了研究。结果：分离出大肠杆菌、沙门氏菌各1株。大肠杆菌对头孢曲松与头孢噻肟中度敏感；沙门氏菌对头孢曲松、丁胺卡那中度敏感；对头孢噻肟、庆大霉素、安普霉素、多西环素敏感。

大肠杆菌沙门氏菌药敏试验

2016年10月，贵德县清源土鸡场，患鸡突然出现精神沉郁，呆立，垂头缩颈，两翅下垂，羽毛松乱，食欲减少，饮欲增加。剖检发现肝脏表面有纤维素性渗出，肝脏表面散在有针尖大小坏死灶，气囊浑浊，肾脏苍白。患鸡多为15～30日龄，死亡率30%。经药物治疗无效，为确定其病因，我们进行了病原的分离培养鉴定和药敏试验。现将实验结果报告如下。

1 材料及方法

1.1 主要试剂

MH培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯琼脂、SS琼脂、生培养基均购自杭州天和微生物试剂有限公司。药敏纸片购于北京天坛药业生物技术开发公司。

1.2 细菌的分离培养

将病死鸡的肝脏、肺脏，分别划线接种于麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板上，37℃培养18～24h，挑取麦康凯琼脂平板上红色菌落接种于伊红亚甲蓝平板，37℃培养18～24h。对伊红亚甲蓝平板疑似大肠杆菌的菌落和SS平板上疑似沙门氏菌菌落进行纯化。分别挑取纯培养，进行革兰氏染色并进行形态及染色特性观察。

1.3 生化鉴定

将分离疑似沙门氏菌菌株接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、卫矛醇、尿素、硫化氢、枸橼酸盐、蛋白胨水和葡萄糖蛋白胨水等培养基中，置于37℃温箱培养，每日观察。将符合大肠杆菌形态特征的细菌接种于蔗糖、水杨酸、D-木糖、硫化氢、卫矛醇、乳糖、麦芽糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、间-肌醇、尿素酶、七叶苷水解、葡萄糖、山梨醇、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐、明胶液化等培养集中。

1.4 分离菌药物敏感性试验

用接种环于营养琼脂培养基上挑取分离纯化的大肠杆菌菌落4～5个，接种于3～5mlLB液体培养基中。37℃培养12h，用生理盐水稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度相同的浓度。在15min内，用贴无菌棉签蘸取菌液，并在管壁上挤去多余的菌液后均匀涂布于M-H琼脂平板上，待干。用无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定间隔在平板的不同区域，即两纸片间距不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm，37℃温箱培养24h观察结果[1，2]。沙门氏菌药敏试验同大肠杆菌。试验选取药敏片：阿莫西林、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、丁胺卡那、庆大霉素、安普霉素、多西环素、环丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩诺沙星、红霉素。

2 试验结果

2.1 菌落形态及染色结果

分离菌在麦康凯培养基上菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑湿润。另一种菌落为圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明中间呈黑色、边缘整齐、中等大小的菌落。将菌落转接在伊红亚甲蓝培养基上菌落呈紫黑色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。革兰氏染色为阴性的散在小杆菌。在SS培养基上形成无色透明，圆形、微凸、光滑湿润、边缘整齐菌落。革兰氏染色为阴性散在的小杆菌。

2.2 生化鉴定结果

采取病料，在实验室做了生化试验，结果详见表1和表2。

2.3 药敏试验结果

对分离菌做了药敏试验，结果详见表3。

由表3可知该次试验分离的大肠杆菌对于阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、安普霉素、环丙沙星、恩诺沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐药，对于多西环素、红霉素、丁胺卡那耐药，对于头孢曲松、头孢噻肟中度敏感。沙门氏菌高度耐受的药物有阿莫西林、环丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩诺沙星、红霉素。沙门氏菌对于氨苄西林耐药，对于头孢曲松、丁胺卡那中度敏感，对于头孢噻肟、庆大霉素、安普霉素、多西环素敏感。