商品肉鸡禽流感疫苗不同免疫程序免疫效果观察

2017-05-12黄西梅李佳荣骆荣彪谭福林李子桥

中国畜牧兽医文摘 2017年4期

关键词：二联新城疫效价

黄西梅李佳荣骆荣彪谭福林李子桥

(1.广西百色市右江区动物疫病预防控制中心,广西百色 533000; 2.百色农业学校,广西百色 533000; 3.百色市右江区阳圩镇水产畜牧兽医站,广西百色 533000)

商品肉鸡禽流感疫苗不同免疫程序免疫效果观察

黄西梅1李佳荣2骆荣彪1谭福林1李子桥3

(1.广西百色市右江区动物疫病预防控制中心,广西百色 533000; 2.百色农业学校,广西百色 533000; 3.百色市右江区阳圩镇水产畜牧兽医站,广西百色 533000)

为了探索目前右江区使用的两种剂型的禽流感疫苗即重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rlH5-6株）采用不同方式进行接种免疫，机体产生抗体的情况，本研究以本地商品肉鸡为对象，制定了5种不同的免疫程序进行禽流感免疫，采集试验鸡30、45、65、85、105日龄的血清进行免疫抗体检测，通过对免疫抗体合格率和抗体效价的分析和比较，评价两种疫苗的免疫效果。结果显示，禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rlH5-6株）单独使用于商品肉鸡，免疫2次，抗体效价低于4log2；而重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）单独使用于商品肉鸡，免疫2次，免疫后30天抗体效价达9.64，免疫合格率达100%。两种疫苗交叉使用，免疫后30天抗体效价达8.04，合格率达96.00 %；单独使用同种疫苗，二免效果优于一免效果。

疫苗免疫方式免疫效果

世界卫生组织（OIE）规定的A类传染病中，禽类烈性传染病只有两种，分别是禽流感和新城疫，目前禽流感和新城疫的防控工作的主要途径和有效手段仍然是接种疫苗，在什么时间接种何种疫苗，用什么免疫方法才能提高抗体水平，一直是兽医工作者和养殖户关注的问题，重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rlH5-6株）都是政府采购苗，也是养殖户普遍使用的疫苗。右江区常年鸡存栏有250万左右，年出栏鸡有1000多万羽。随着养殖规模的扩大和禽类交易活动的日益频繁，禽类受禽流感和新城疫的威胁越来越大，为探索适合右江区气候和饲养特点的免疫程序，选择优质疫苗，找出免疫失败的原因，提高免疫效果和技术水平，确保公共安全和畜牧业的健康发展。我们于2016年7月至11月在百色农校的试验场的300只鸡分成五个试验组，一个对照组。分别进行禽流感H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rlH5-6株），用不同免疫方式免疫注射，采集鸡30、45、65、85、105日龄的血清，用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验进行抗体检测，掌握不同免疫方式，禽流感疫苗免疫机体抗体产生情况，为制定适合右江区养鸡特点的禽流感免疫程序提供参与依据。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验鸡

在农校实验鸡场选择未接种禽流感疫苗的健康商品肉鸡300只，随机分成6个组，每组50只，设一个对照组和5个试验组。按正常饲喂方式，由专人饲养管理。

1.1.2 免疫疫苗

禽流感H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株），由乾元浩生物股份有限公司郑州生物制药厂生产，生产批号：2016036，有效期：20170317；禽流感-新城疫二联疫苗（rlH5-6株），由哈尔滨维科生物技术开发公司生产，生产批号：2016013，有效期：20170320；

1.1.3 器材

微量移液器、一次性96孔V型血凝板、微量振荡器、1%红血球、灭菌生理盐水、被检血清。

1.1.4 诊断试剂

禽流感病毒H5亚型（Re-6株）血凝抑制抗原和阳性血清，由哈尔滨维科生物技术开发公司生产，抗原批号：2015024，有效期2年，阳性血清批号：2015017，有效期：2年。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组及免疫接种

对选择的健康鸡随机分成5组，分别为A、B、C、D、E、F组，每组50羽，五个试验组，一个对照组，免疫程序详见表1。

表1 不同组别的免疫方式

1.2.2 血清采集

无菌采集试验鸡30、45、65、85、105日龄的血样，所有鸡群选择翅膀内侧静脉穿刺采血，每组采集25份，6次不同日龄共采集900份，每羽鸡采血2～3ml左右，室温静置24h后分离血清，待用于检测抗体。

1.2.3 抗体检测

（1）抗体检测方法：采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，严格按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）的操作方法对采集的样品进行禽流感H5亚型抗体检测。首先用血凝试验检测禽流感抗原的血凝结，然后配制4单位抗原待用，无菌采集公鸡血10毫升，按常规方法配制1%的红血球待用。

结果判定：根据GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》制定的检验规程进行判定，H5亚型禽流感HI抗体效价≥5log2（滴度1：32以上）为免疫合格。

2 检测结果及分析

本次试验分别采集30、45、65、85、105日龄的鸡血清900份，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验进行禽流感和新城疫抗体检测，不同组，不同日龄阶段检测结果见表2.

表2 H5亚型禽流感抗体合格率和抗体效价（%、log2）

表3 H5亚型禽流感抗体效价趋势图

（1）试验A、B组在分别用禽流感-新城疫重组二联活疫苗免疫1次和2次，结果产生的禽流感抗体的合格率和抗体效价比较低，尽管是二免比一免高，但最高只有二免后65日龄抗体合格率和效价分别为44.0%、3.40，达不到国家对禽流感免疫抗体合格率达70%的要求。这一结果与曹立辉等[1]的报道有一致之处。据有关资料报道，禽流感最低保护临界值4log2-6log2 之间，且必须大于4log2[2]。如果鸡群禽流感抗体水平长期低于4log2就不实现有效保护。而据杨飞燕等[3]报道，禽流感-新城疫重组二联活疫苗的新城疫免疫效果要比禽流感的免疫效果好，使用H5-ND15一免、30日龄二免后45天新城疫抗体合格率和效价达峰值100%和7.3log2，禽流感的抗体效价低于4log2。原因可能是H5-ND二联苗是将表达禽流感H5亚型病毒抗原性的禽流感病毒基因片断插入鸡新城疫Lasota系弱毒毒株的基因链中，使其在表达鸡新城疫病毒抗原性的同时表达禽流感H5亚型病毒的抗原性。它所刺激鸡体产生的针对禽流感H5亚型病毒的抗体是由经重组的鸡新城疫Lasota弱毒株在鸡体内复制过程中附带产生的。因此，禽流感抗体的产生容易受鸡新城疫抗体的影响。也是使用H5-ND二联苗时新城疫抗体水平高于禽流感抗体水平的原因。这也是这种疫苗的优势所在。

另外，有研究以鸡痘病毒为载体表达H5亚型禽流感基因的重组疫苗接种SPF的试验结果也有类似情形，即免疫后抗体水平较低的情况下仍然使机体产生对强毒攻击的抵抗力[4]，禽流感-新城疫重组二联活疫苗是否也存在这种情况未见相关报道。基于实验室条件，不能开展强毒攻击保护实验，故不能排除这种可能。其他具体原因有待进一步研究证实。

（2）C组15日龄时用禽流感-新城疫重组二联活疫苗免疫一次，35日龄用重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫。结果首免到30日龄时，由于机体内不能产生体液免疫，禽流感抗体一直处于下降的状态，抗体的合格率维持在0的水平、但在鸡体内产生免疫记忆，使用重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）后10天，机体产生抗体较快，45日龄抗体合格率和效价分别已达到80.00、6.00，65日龄达最高96.00、8.04，之后一直维持较高水平。到105日龄处于保护期内。

（3）D、E组是用重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫1次和2次，结果显示同一种苗两次免疫后、抗体水平都比一次免疫的高。特别是重组禽流感病毒H5亚型二价疫苗（Re-6株+Re-8株），二次免疫后30天抗体合格率达100%，并能维持到105日龄。这也符合了灭活苗具有稳定及诱导产生的抗体水平均一的特点。