右江流域壮族人群酒精依赖程度与ADH和ALDH基因多态性的关联性研究

李克明++唐汉庆++赵玉峰++赵秋华++郑建宙++朱晓莹++窦锡彬

【摘要】目的研究右江流域壯族人群乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）基因多态性的分布，为筛选壮族酒精高易感性人群提供参考。

方法通过问卷进行流行病学调查，明确右江流域壮族人群饮酒状况；采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）技术，在分子生物学层面，检测对照组（100例）和酗酒组（90例）ADH和ALDH基因型并明确其在样本中的分布。

结果问卷调查结果显示，严重依赖酒精的占17.8%，月均饮酒量3000 ml以上的占16.7%；对照组ADH2基因型中异常纯合型（异纯型）32例，占32.0%，酗酒组ADH2基因型中异纯型6例，占6.7%，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.001）。对照组ALDH2基因型中纯合型20例，占20.0%，酗酒组ALDH2基因型中纯合型62例，占68.9%，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.001）。

结论低异纯型ADH2基因频数和高纯合型ALDH2基因频数在壮族酗酒人群中具有特征性，可供筛选壮族酒精高易感性人群参考。

[HJ1*3][HJ]【关键词】壮族；乙醇脱氢酶；乙醛脱氢酶；基因多态性

中图分类号：R345.41；R394.2文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.01.007

[HJ1*3][HJ]

A study on relationship between alcohol dependence and gene polymorphisms of ADH and ALDH in Zhuang population in Youjiang Basin

[HJ1*3][HJ]

LI Keming，TANG Hanqing▲，ZHAO Yufeng，ZHAO Qiuhua，ZHENG Jianzhou，ZHU Xiaoying，DOU Xibin

（Key Laboratory of Ethnic Minorities of Guangxi Universities，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China）

[HJ1*3][HJ]

【Abstract】ObjectiveTo explore the distribution of gene polymorphisms of alcohol dehydrogenase（ADH） and acetaldehyde dehydrogenase（ALDH） in Zhuang nationality in Youjiang Basin and provide reference to filter high alcohol sensitive Zhuang nationality people.

Methods Epidemiological investigation was conducted to determine drinking status of Zhuang people in Youjiang Basin.Polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism（PCRRFLP） technique was used to detect ADH and ALDH genotypes of control group（100 cases） and excessive drinking group（90 cases） in molecular biology，and distributions of them in the sample were defined.

ResultsQuestionnaire results showed that patients who heavily depended on alcohol accounted for 17.8%，and monthly average alcohol consumption over 3000 ml accounted for more than 16.7%.In the control group，there were 32 cases of ADH2 abnormal homozygotic genetype，accounting for 32.0%，while there were 6 cases of ADH2 abnormal homozygotic genetype in the excessive drinking group，accounting for 6.7%，difference was statistically significant（P<0.001）.In the control group，there were 20 cases of ALDH2 homozygous genetype，accounting for 20.0%，while there were 62 cases of ALDH2 homozygous genetype，accounting for 68.9%，difference was statistically significant（P<0.001）.

ConclusionFrequency of low ADH2 abnormal homozygotic genetype and frequency of high ALDH2 homozygous genetype has characteristics in Zhuang people with excessive drinking，which might provide reference for filtering out the high alcohol sensitive Zhuang nationality people.

【Key words】Zhuang nationality；ADH； ALDH；gene polymorphism

酗酒对人体健康危害甚大，不但是一个卫生健康问题，而且还是一个社会问题，成为现代社会面临的现实问题。如何筛选“酒精高易感性”或称“酒精高暴露”人群具有研究意义，国外许多国家都已开展酒精依赖的相关研究，证明酒精依赖与遗传、地域环境、种族、民族、文化传统等均有关系。在我国，2002年全国营养与健康状况调查显示我国居民中过量饮酒比例为4.7%，其中男性为8.4%，女性为0.8%。过量饮酒的健康危害主要由酒精及其中间代谢产物乙醛引起，对肝、肾均有损害[1]，涉及乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）2个关键酶，其中ADH2和ALDH2两个亚型起主要作用，各自又分为野生型（ADH21和ALDH21）和突变型（ADH22和ALDH22）。ADH2基因和ALDH2基因在不同民族具有多态性，已有对我国汉族、回族、蒙古族、维吾尔族、白族进行了ADH2基因和ALDH2基因多态性分布比较的研究[2]。右江流域是广西壮族人群的主要聚居地，壮族嗜好饮酒，有盛酒待客的传统习俗。对于壮族人群ADH和ALDH基因多态性的分布研究，尚未见报道。本研究通过问卷调查右江流域壮族人群饮酒状况和抽样检测酗酒人群ADH和ALDH基因多态性并明确其分布特点，为本地筛选酒精高易感性人群并采取有效的保护和干预措施提供参考。

1对象与方法

1.1研究对象

选择右江流域90例壮族个体作为酗酒组，男72例，女18例，年龄35～63岁，平均（48.2±4.6）岁。根据酗酒的纳入标准，纯酒精摄入量≥125 ml/d且持续6年及以上[3]。另外选取无酗酒史壮族个体100例为对照组，男60例，女40例，年龄35～65岁，平均（48.9±5.2）岁，纳入标准为每月饮酒量少于50 ml纯酒精。

1.2方法

1.2.1问卷调查

参考世界卫生组织的问卷调查而设定问卷调查表，一般内容包括年龄、性别、经济状况、对饮酒的态度，主要内容包括是否能戒酒、最近一个月的饮酒情况、是否因饮酒而出现医疗问题、月/日饮酒量、饮酒持续时间。

1.2.2聚合酶链式反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）检测ADH2和ALDH2基因型

采集外周静脉血4 ml，EDTA抗凝，DNA纯化试剂盒提取模板DNA，紫外分光光度计测定模板DNA含量，冻存备检。扩增ADH2基因的引物序列：5GCATTACAGGGTCAACTTGCATG3和5CACTACACTCAGCACAGTTCTCACT3；扩增ALDH2基因的引物序列：5CAGTTAGCAAGCTACAGGGTCAAC3和5ATTGCCGATTACGTCAATTGCTCAAT3。ADH2基因扩增反应参数：95℃预变性2 min→95℃变性45 s→60℃退火40 s→72℃延伸45 s，共35个循环，最后72℃延伸7 min。ALDH2基因扩增反应参数：94℃预变性3 min→94℃变性2 min→55℃退火50 s→70℃延伸50 s，共30个循环，最后70℃延伸5 min。以限制性内切酶MboⅡ酶切后经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染染色确定基因型。

1.3统计学方法

采用 SPSS 13.0软件进行数据处理和统计，计数资料以百分率表示，采用χ2检验，检验水准：α=0.05。

2结果

2.1问卷调查结果

共发放问卷调查表90份，由受调查者进行现场答题，答题完毕立即回收，回收率为100%。问卷调查结果显示严重依赖酒精的有16例占17.8%，对酒精存在不同程度依赖的70例占77.8%，曾经因为饮酒而住院的30例占33.3%。有23例（25.5%）觉得自己戒不了酒，饮酒史5年以下20例占22.2%，5～10年29例占32.2%，11～20年22例占24.4%，20年以上20例占22.2%。月均饮酒量的调查中500 ml以下32例占35.5%，500～1000 ml 30例占33.3%，1001～3000 ml 13例占14.4%，3000 ml以上的15例占16.7%。

2.2各组ADH2和ALDH2基因型分布比较

对照组ADH2基因型中异常纯合型（异纯型）32例，占32.0%，酗酒组ADH2基因型中异纯型6例，占6.7%，与对照组比较，差异有统计学意义（χ2=19.000，P<0.001）。对照组ALDH2基因型中纯合型20例，占20.0%，酗酒组ALDH2基因型中纯合型62例，占68.9%，与对照组比较，差异有统计学意义（χ2=46.151，P<0.001）。见表1。

表1各组ADH2基因和ALDH2基因多态性分布比较表[n（%）]

组别n

ADH2基因型纯合型杂合型异纯型

ALDH2基因型纯合型杂合型异纯型

对照组10032（32.0）36（36.0）32（32.0）20（20.0）48（48.0）32（32.0）

酗酒组9058（64.4）26（28.9）6（6.7）a62（68.9）a18（2.0）10（11.1）

注：与对照组比较，aP<0.001。

3讨论

酗酒不但损害身体健康也造成许多社会问题，如能筛选酒精高易感性人群并采取有效的保护和干预措施将可减少酗酒行为的发生，有利于人口素质提高和社会稳定。酒精在体内的转化主要依靠ADH和ALDH 两个关键酶，前者将酒精转化为乙醛，后者将乙醛转化为对人体无害的乙酸。

ADH和ALDH分为多个亚型，其中，起主要作用的是ADH2和ALDH2 两个亚型。ADH2和ALDH2 两个亚型各自又分为野生型ADH21和突变型ADH22以及野生型ALDH21和突变型ALDH22。ADH2基因和ALDH2基因在不同民族和个体中具有多态性，国外研究证实，就酒精轉化能力强弱而言，异纯型ADH2>杂合型ADH2>纯合型ADH2；乙醛转化能力比较，纯合型ALDH2>杂合型ALDH2>异纯型ALDH2[4]。国内学者对汉族、回族、蒙古族、维吾尔族、白族、黎族等进行了ADH2基因和ALDH2基因多态性以及酗酒流行病学的研究[2，5]，对蒙古族、汉族、朝鲜族和鄂伦春族人群ADH基因分布情况的研究[6]表明，蒙古族ADH1B*2等位基因频率显著低于汉族，鄂伦春族ADH1B*1等位基因频率要高于朝鲜族，说明不同民族间ADH基因多态位点的分布有着显著的差异。有学者[7]对我国十个少数民族ALDH基因多态性进行了分析，表明不同民族间存在ALDH基因的多态性，但关于这两个基因多态性在壮族群体分布规律与其他民族分布是否有差异，目前尚未有相关报道。

壮族受民族传统文化影响，嗜好饮酒。本研究问卷调查结果显示，严重依赖酒精的占17.8%，对酒精存在不同程度依赖的占77.8%，提示对嗜酒问题需要引起重视。此外，本研究表明，酗酒组异纯型ADH2基因所占频数较低、纯合型ALDH2基因型所占频数较高，与对照组比较有统计学意义，提示低异纯型ADH2基因频数和高纯合型ALDH2基因频数在酗酒人群中比较具有特征性，推测这可能与异纯型ADH2将酒精转化为乙醛能力较强以及纯合型ALDH2将乙醛转化为乙酸能力较强有关，因为具有此特征的酗酒人群，异纯型ADH2将酒精转化为乙醛能力有限，而这少量的乙醛却可被纯合型ALDH2很快转化为乙酸，从而减少乙醛积累，由于乙醛对心血管系统和神经系统具有刺激作用[8]，能抑制人体继续摄入酒精，客观上起到“戒酒”作用。因此，对于此特征的酗酒人群，一方面，酒精不能很快转化为乙醛，造成酒精蓄积；另一方面，缺乏乙醛及其所起到的抑制饮酒作用，此种状况若延续，会由于酒精蓄积刺激而对健康造成极大损害，这部分酗酒人群应是重点关注对象。

将ADH2基因和ALDH2基因多态性用于筛选酒精高易感性人群并采取有效的保护和干预措施，减少酗酒行为，对于移风易俗、养成健康生活方式、提高健康水平具有现实意义。本研究仅从酒精依赖程度与ADH和ALDH基因多态性的关联性进行，没有涉及相关肝功能指标的检测，因此，肝功能指标和基因型指标的相关性研究，需要在扩大样本量基础上作进一步研究。

参考文献

[1]李晓东，李胤祺.乙醛促进人肾小管上皮细胞表型变化并增加细胞平滑肌肌动蛋白的表达[J].细胞與分子免疫学杂志，2016，32（2）：221223.

[2]曹西蓉，吴德生.中国五个民族人群样本中酒精代谢相关酶基因多态型分布比较[J].卫生研究，2002，31（3）：156159.

[3]姜佐宁，万文鹏.药物滥用[M].北京：科学出版社，1992：72.

[4]Eng MY，Luczak SE，Wall TL，et al.ALDH2， ADH1B，and ADH1C genotypes in Asians：a literature review[J].Alcohol Res Health，2007，30（1）：2227.

[5]窦慧馨，张得钧.酒精性肝病分子发病机制研究进展[J].基因组学与应用生物学，2016，35（7）：16431647.

[6]曾芳芳，刘盛元，王滨有.乙醇脱氢酶基因多态性与饮酒行为及所致相关疾病的研究进展[J].疾病控制杂志，2008，12（2）：164167.

[7]徐玖瑾，陈良忠，金锋，等. 十个少数民族中乙醛脱氢酶的遗传多态性[J].人类学学报，1987，6（3）：196202.

[8]赵丽娟.酒精代谢相关基因多态性与酒依赖综合征的关联性研究[D].昆明：昆明医科大学，2013.

（收稿日期：2016-11-14修回日期：2017-01-03）

（编辑：潘明志）