卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF表达变化及意义

2017-05-03张艳慧冯艳奇张爱萍

山东医药 2017年10期

关键词：卵巢癌生存率淋巴结

张艳慧, 冯艳奇,张爱萍

(1黄河科技学院医学院,郑州450063；2河南医学高等专科学校；3郑州市中医院)

卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF表达变化及意义

张艳慧1, 冯艳奇2,张爱萍3

(1黄河科技学院医学院,郑州450063；2河南医学高等专科学校；3郑州市中医院)

目的观察卵巢癌患者组织中切除修复交叉互补基因(ERCC1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化，并探讨其临床意义。方法收集60例卵巢癌患者的癌组织及其20例癌旁正常组织，采用免疫组化SP法检测ERCC1、MMP-2、VEGF，分析三者与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。结果卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF阳性表达率均高于癌旁正常组织(P均<0.05)，临床分期高的卵巢癌组织ERCC1表达高于临床分期低者(P<0.05)，分化程度低、临床分期高和有淋巴结转移卵巢癌组织MMP-2、VEGF表达高于分化程度高、临床分期低和无淋巴结转移者(P均<0.05)。MMP-2、VEGF阳性表达与阴性表达者5年生存率比较差异无统计学意义(P均>0.05)，ERCC1阳性表达者5年生存率高于阴性表达者(P<0.05)。结论卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF表达增加，三者均在卵巢癌的发生、发展中起重要作用，且ERCC1可作为卵巢癌患者预后判断的参考指标。

卵巢癌；切除修复交叉互补基因；基质金属蛋白酶2；血管内皮生长因子

卵巢癌是病死率最高的一类妇科恶性肿瘤，70%诊断时已有卵巢癌浸润、盆腹腔转移[1]。肿瘤转移是多基因、多阶段、多步骤相互作用的级联反应，形成肿瘤新生血管与降解细胞外基质金属是此过程中两个至关重要的环节[2]。切除修复交叉互补基因(ERCC1)参与DNA的修复，与肿瘤的生长分化密切相关；基质金属蛋白酶2(MMP-2)与多种肿瘤的转移、侵袭有关；血管内皮生长因子(VEGF)能够诱导血管生成，导致肿瘤的生长、侵袭及远处转移。本研究观察了卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF的表达，分析其表达与卵巢癌患者临床病理因素及预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2004年6月～2008年6月黄河科技学院附属医院进行手术治疗的卵巢癌患者60例，年龄37～66岁。病理类型：黏液性囊腺癌15例，浆液性囊腺癌33例，子宫内膜样癌10例，其他类型2例；组织高分化 28 例，中分化 22例，低分化 10例；临床分期Ⅰ～Ⅱ期 44例，Ⅲ～Ⅳ期16例；有淋巴结转移27例，无淋巴结转移33例；单侧发病48例，双侧发病12例；术前均未接受过化疗、放疗或免疫治疗。术中收集所有患者的癌组织及其20例癌旁正常组织，术后均经病理确诊。患者术后均进行30个月的随访，末次随访至2011年10月。

1.2 ERCC1、MMP-2、VEGF检测方法所有组织标本用4%甲醛固定，脱水，包埋，切片，切片厚度为4 μm。先将切片进行抗原修复，在0.01 mmol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)中放入切片，置入水浴锅内煮20 min后取出；切片冷却后用PBS液洗3次，加入一抗，置入4 ℃冰箱过夜；第2天取出后再用PBS液洗3×3 min，加入二抗(En Vision法)试剂，置入37 ℃水浴箱30 min；取出后用PBS液洗3次，DAB显色10 min；最后，用苏木精衬染、分化、蓝化，脱水，树脂封片。结果判定：染色结果由两名有经验的病理科医生阅片审核，所有标本置于10×40倍光学显微镜下观察。每例随机选取5个视野，计数每个视野阳性细胞所占的比例，取平均值。ERCC1定位于细胞核内，MMP-2与VEGF定位于细胞质中，均以出现棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞。染色强度评分标准: 不着色 0 分,黄色1分,棕黄色2 分，黄褐色3 分。阳性细胞所占比例评分标准: 阳性细胞数﹤5%者0 分，5%～﹤30% 者 1 分，30%～﹤70%者2 分，≥71%者3分。两种评分相乘≥3者视为免疫染色阳性。

1.3 统计学方法采用SPSS16.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，采用Kaplan-Meier进行生存分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌及其癌旁正常组织ERCC1、MMP-2、VEGF表达比较卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF阳性率分别为40.00%(24/60)、78.33%(47/60)、86.67%(52/60)，均高于癌旁正常组织的0、10.00%(2/20)、20.00%(4/20)，差异有统计学意义(P均<0.05)。

2.2 ERCC1、MMP-2、VEGF表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系临床分期高的卵巢癌组织ERCC1表达高于临床分期低者(P<0.05)，分化程度低、临床分期高和有淋巴结转移卵巢癌组织MMP-2、VEGF表达高于分化程度高、临床分期低和无淋巴结转移者(P均<0.05)。见表1 。

表1 ERCC1、MMP-2、VEGF表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系

2.3 ERCC1、MMP-2、VEGF表达与患者生存率的关系 Kaplan-Meier生存分析显示，MMP-2、VEGF阳性表达者5年生存率分别为19.41%、20.28%，MMP-2、VEGF阴性表达者分别为21.52%、22.41%，差异无统计学意义(P均>0.05)；ERCC1阳性表达者5年生存率为18.41%，高于阴性表达者的11.23%(P<0.05)。

3 讨论

卵巢癌是妇科疾病中常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，严重威胁妇女的生命健康[3，4]。由于卵巢的发育、解剖结构及内分泌功能较复杂，疾病的早期症状不典型，很难在术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及其良恶程度[5]。卵巢上皮癌是卵巢恶性肿瘤中最多见的一种，其次是恶性生殖细胞肿瘤[6]。大约30%的卵巢上皮癌患者在手术中发现其肿瘤仍局限于卵巢，多数患者在手术时发现病变已扩散到子宫、大网膜、附件及盆腔各器官，侵袭和转移是恶性肿瘤患者治疗失败和致死的主要原因之一。所以，早期诊断卵巢癌、及时进行手术治疗是临床上面临上的一大难题[7，8]。

ERCC1参与核苷酸剪切修复，是其家族中具有特异性的重要成员之一，在19号染色体表达，可编码297个氨基酸的蛋白，作用于DNA单链受损处5′端，参与多种肿瘤的发生、发展及增殖[9]。有研究[10]报道，ERCC1表达阳性的患者其术后生存期高于ERCC1表达阴性的患者;亦有研究[11]报道，ERCC1的表达与非小细胞肺癌的临床分期、组织学类型及预后密切相关。本研究结果显示，临床分期高者ERCC-1表达高于临床分期低者，且ERCC1阳性表达者总生存率高于阴性表达者。说明ERCC1的表达与生存显著相关，影响患者预后，该结论与上述研究相符。MMP-2在血管生成过程中参与血管基底膜和细胞外基质的降解，而降解细胞外基质可为肿瘤侵袭与转移提供路径[12]。有研究[13]报道，MMP-2能够破坏基底膜的完整性，致使癌细胞向其他部位转移，且MMP-2阳性表达率在伴有淋巴结转移的卵巢癌患者明显高于无淋巴结转移的患者。VEGF是血管内皮特异性的有丝分裂原，参与血管内皮细胞的增殖、迁移和血管构建的调控。VEGF可使血管的渗透性增加，为肿瘤转移提供基质[14]。本研究结果显示，ERCC1、MMP-2、VEGF在卵巢癌组织中的阳性表达率均高于癌旁正常组织，MMP-2、VEGF表达与卵巢癌的浸润程度、临床分期和淋巴结转移有关，而与患者年龄、肿块大小、病理类型及发生部位无关。

综上所述，肿瘤的形成、发展及转移都是一个多基因相互作用的复杂过程。卵巢癌组织中ERCC1、MMP-2、VEGF表达增加，且ERCC1表达与患者预后关系密切。因此，MMP-2、VEGF参与了卵巢癌的发生、侵袭和转移，检测ERCC1、MMP-2、VEGF的表达水平可作为卵巢癌患者病情及预后判断的重要参考指标。

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张爱萍(E-mail: 389974090@qq.com)