饲料中盐酸克伦特罗的测定

宋红霞

[摘 要] 目的：建立饲料中盐酸克伦特罗的检测方法。本文对农业行业标准《饲料中盐酸克伦特罗的测定-高效液相色谱法》中色谱条件和对照品处理进行改进，然后按标准方法进行样品处理。结果证明，该法无论是峰形、信号、还是分离效果均达到满意程度。

[关键词] 高效液相色谱法 盐酸克伦特罗 饲料

[中图分类号] S816 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2016）12-0087-01

盐酸克伦特罗是肾上腺类神经兴奋剂，被添加到动物饲料中用于增加动物的瘦肉率，故又称瘦肉精。人类长期食用含有盐酸克伦特罗的肉类会出现中毒，危害极其严重。因此，国家为从源头上扼制，便于2002年9月10日起出台了相关的法律法规，禁止在饲料和饮用水中使用盐酸克伦特罗，并在相关标准中规定为不得检出成分。严格控制饲料中盐酸克伦特罗的含量，直接关系到人们的生命健康安全。但是，目前的一些检测方法盐酸克伦特罗主成分峰信号小，甚至检测不到，并且峰形差，采取本文改进的方法测定，信号大，峰形尖锐，测定效果好。

1 材料

1.1 仪器设备

高效液相色谱仪：UltiMate 3000；紫外检测器。电子天平：型号FA2004B，d=0.1mg。超声波清洗器：HS3120型。高速离心机：TG16-WS型。电热恒温水浴锅：DZKW-3-4型。其它：实验室常用仪器设备。样品：市售配合饲料

1.2 试剂

盐酸克伦对照品：由国家标准物质中心提供。编号：BW8001 CWI020；纯度：99.0%±0.8%；规格：0.1g；批号：T150026，有效期至2018年11月。

甲醇、乙腈均为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

所用水为符合GB/T6682的一级水。

1.3 固相萃取小柱（SPE）

规格为3mL的Supelclean LC-WCX SPE固相萃取小柱

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Acclaim C18 柱，粒度 5um ，规格 4.6×150mm。

流动相：甲醇：乙腈：水（含1+1磷酸溶液0.5mL，PH值在3～4之间）=100：50：350，出峰时间在5分钟左右；检测波长：243nm；进样量20uL；温度：30℃；流速：1.00mL/min。

2.2 盐酸克伦特罗标准溶液的配制

2.2.1盐酸克伦特罗标准储备液200ug/mL：称取在P205干燥器中干燥53小时的盐酸克伦特罗对照品0.0100g，置50mL量瓶中，加0.02mol/L的盐酸溶液至刻度，摇匀。

2.2.2盐酸克伦特罗标准工作液2.00ug/mL：吸取1.00mL标准储备液至100mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。

2.3 样品溶液的制备：称取已磨细的试样5.0000g置150mL的三角瓶中，加入0.5%的偏磷酸溶液50.00mL并摇匀，超声提取15min，摇匀，静置，取上层液离心10min，转速4000r/min。吸取上清液10.00mL，置150mL分液漏斗中，用2mol/L氢氧化钠溶液调PH值至11～12，放置5分钟，检查PH值，如降低，需再加碱调节。溶液分别用30mL和25mL乙醚萃取两次，令萃取液通过装有无水硫酸钠的定量滤纸，过滤至50mL量瓶中，用少许乙醚淋洗分液漏斗和无水硫酸钠，并用乙醚定容至刻度。吸取25.00mL于50mL烧杯中，置通风橱内、低于70℃水浴上蒸干，残渣溶于2.00mL盐酸溶液（0.02mol/L），取1.00mL置于预先已分别用1mL甲醇和1mL去离子处理过的SPE小柱上，用注射器稍稍加压，使其过柱速度不超过1mL/min，再先后分别用1mLSPE淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和淋洗液-2（含2%氨水的30%甲醇水溶液）淋洗，最后用甲醇洗脱，洗脱液置（70±5）℃加热块或沙浴上，用氮气吹干。于净化、吹干的样品残渣中加入1.00mL盐酸溶液（0.02mol/L），充分振摇超声，使残渣溶解，过0.45um濾膜，上机测定。

3 结论

3.1 流动相比例的选择：当以甲醇+水=45+55为流动相（一）时，盐酸克伦特罗主色谱峰峰形不好，且信号差，易与杂峰相混甚至被掩盖；当以乙腈+甲醇+水=120+60+320为流动相（二）时，出峰时间在3分钟左右，峰形、信号、分离度虽好，但在做样品时，样品峰与杂峰呈未分离或分离差的状态，故选择乙腈+甲醇+水=100：50：350（三）的比例，出峰时间在5分钟左右，能获得较好的峰形、信号及分离度。

3.2 精密度的测定：

取标准工作液以20uL自动重复进样5次，峰面积分别为：1.2948、1.2941、1.2921、1.2917、1.2914，计算RSD为0.16%，说明该方法重现性好。

3.3 线性关系的考察：精密移取标准工作液1.25、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0mL，以流动相稀释至100mL，得到浓度为0.025、0.05、0.100、0.200、0.500、1.00ug/mL的标准系列溶液，并作空白。 以20uL分别自动进样2次，以峰面积Y为纵座标，浓度X为横座标，得到曲线方程：Y=0.6464X，r2=1.0000，证明该方法在此范围内有良好的线性关系。

3.4 回收率的测定：称取已知含量为0.3157ug/mL、0.3180ug/mL、0.3166 ug/mL的试样4.7491g、4.7497g、4.7493g共3份，分别按50%、100%、150%加入标准工作液1.5mL、3.0 mL、4.5 mL，测得回收率分别为93.59%、94.07%、94.15%，平均回收率为93.94%，RSD值为 0.33%。

3.5 对照品处理上，分别采用以甲醇和0.02mol/L的盐酸溶液为溶剂作储备液，再以流动相（一）、（二）、（三）为溶剂制得六种标准工作液，在三种流动相中进行检测并对比，结果显示以0.02mol/L的盐酸溶液为溶剂的储备液，用乙腈+甲醇+水=100+50+350作稀释溶剂及流动相，峰形尖锐，信号强，效果最好。

与其他方法相比，本方法的建立，能够满足质量控制的要求，可用于饲料中盐酸克伦特罗的检测。

参考文献

[1]化验员读本. 下册：仪器分析/刘珍主编 ；黄沛成，于世林，周心如编著.-4版.北京：化学工业出版社，2003.12

[2]中国卫生检验杂志2005年8月第15卷第8期，畜肉中克伦特罗残留的HPLC法测定，作者仲娜，卢京光，王小如