酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中药对对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影响*

李峰杰，何 萍，赵 乐，郝 伟，李贻奎

（中国中医科学院西苑医院李连达院士研究室，北京 100091）

·实验研究·

酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中药对对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影响*

李峰杰，何 萍，赵 乐，郝 伟，李贻奎△

（中国中医科学院西苑医院李连达院士研究室，北京 100091）

目的观察酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中药对失眠模型大鼠睡眠作用的影响。方法 大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）混悬液制备大鼠失眠模型。将造模成功大鼠随机分为模型对照组、地西泮组、酸枣仁组、石菖蒲组、夜交藤组、百合组、郁金组，另设空白对照组。地西泮组（1 g／kg）、酸枣仁组（18 g／kg）、石菖蒲组（12 g／kg）、夜交藤组（18 g／kg）、百合组（14.4 g／kg）、郁金组（12 g／kg）大鼠连续7 d给予相应浓度药液，模型对照组和空白对照组连续7 d给予生理盐水灌胃。给药期间，观察大鼠一般状态；给药结束后，观察大鼠体质量变化、睡眠潜伏期、总睡眠时间。结果 地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组、郁金组、石菖蒲组大鼠的睡眠潜伏期明显短于模型对照组，其中地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组大鼠的睡眠潜伏期有显著性缩短（P＜0.01）；地西泮组、酸枣仁组、百合组、郁金组大鼠的睡眠持续时间明显长于模型对照组，其中地西泮组大鼠的睡眠持续时间延长最显著（P＜0.01），酸枣仁组、百合组、郁金组有延长趋势。结论 酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金单味药对改善失眠大鼠模型睡眠作用具有一定效果，但尚需进一步深入研究。

失眠；大鼠；酸枣仁；石菖蒲；夜交藤；百合；郁金；对氯苯丙氨酸

失眠有3个症状特点，即入睡困难，睡眠不深且易惊醒，早醒且醒后疲乏或缺乏清醒感。西医主要依靠化学药物进行治疗，如苯二氮 类、抗抑郁药、巴比妥类等，虽有一定疗效，但易成瘾，产生依赖性，长期应用还会产生一定的耐药性或不良反应，出现健忘、注意力不集中、无力、情绪低落等现象。目前研究表明，中药治疗失眠不良反应小，无药物依赖性和成瘾性。本研究中选择临床常用的具有失眠治疗作用的5种单味中药——酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金对失眠模型大鼠睡眠的作用进行实验研究，旨在为临床中医药治疗失眠提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 动物与试药

1.1.1 动物

Wistar大鼠，雄性，清洁级，100只，体质量为150～170 g，购于京华阜康科技股份有限公司，大鼠饲养于中国中医科学院西苑医院普通动物房。实验动物使用许可证号为SYXK（京）2009-0001。饲养温度21～26℃，相对湿度40%～70%，10／14 h明暗交替照明。

1.1.2 试药及制备

对氯苯丙氨酸（PCPA，美国 Sigma公司，批号为SHBG8045V）。

地西泮（北京益民药业有限公司，批号为20150903），取8片地西泮（20 mg），加入200 mL生理盐水，制备质量浓度为0.1 g／L的水溶液。

酸枣仁（河北百草康神药业有限公司，批号为1606011），精密称取酸枣仁378 g，加5倍量蒸馏水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1.8 g／mL。

石菖蒲（河北百草康神药业有限公司，批号为1601012），精密称取石菖蒲252 g，加5倍量蒸馏水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1.2 g／mL。

夜交藤（河北百草康神药业有限公司，批号为1605021），精密称取夜交藤378 g，加5倍量蒸馏水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1.8 g／mL。

百合（河北百草康神药业有限公司，批号为1606011），精密称取百合302.4 g，加5倍量蒸馏水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1.44 g／mL。

郁金（河北百草康神药业有限公司，批号为1601012），精密称取郁金252 g，加5倍量蒸馏水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1.2 g／mL。

1.2 造模

1.2.1 造模方法

将大鼠适应性喂养3 d，大鼠自由进食饲料和水。3 d后称定体质量，随机分成空白对照组和造模组。造模组腹腔注射PCPA混悬液，连续注射2 d，PCPA临用前按大鼠体质量，用量350 mg／kg，用弱碱性生理盐水配置成混悬液备用，空白对照组腹腔注射等体积弱碱性生理盐水，第1次腹腔注射36 h后，大鼠出现昼夜节律缺失，日间与夜晚皆活动不断。戊巴比妥钠翻正试验，空白对照组与造模组睡眠潜伏期、总睡眠时间差异有统计学意义，提示造模成功。

1.2.2 造模成功的判定

第1次腹腔注造模药36 h后，空白对照组和造模组均腹腔注射戊巴比妥钠50 mg／kg（预试验测得引起100.00%大鼠睡眠的最小阈剂量），提起大鼠尾巴，将大鼠腹部朝上放在垫块上。记录大鼠的睡眠潜伏期及睡眠持续时间，以翻正反射消失为发生睡眠，以翻正反射恢复为觉醒。如果怀疑翻正反射是否确定复原，于第1次翻正后马上重新背位平躺，如在1 min之内又自动翻过来则前1次的时间即为复原时间，否则以第2次翻过来的时间为准。空白对照组与造模组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），表示造模成功。详见表1和图1。

表1 两组大鼠造模结束时戊巴比妥钠翻正试验结果比较（±s，min）

表1 两组大鼠造模结束时戊巴比妥钠翻正试验结果比较（±s，min）

注：与空白对照组比较，*P＜0.01。表2同。

组别空白对照组（n＝11）造模组（n＝75）睡眠潜伏期3.27±0.65 5.48±1.02*睡眠持续时间89.45±11.69 72.08±7.25*

图1 大鼠造模结构戊巴比妥钠翻正试验柱状图

1.3 动物分组及给药

空白对照组(11只)大鼠连续7 d给予生理盐水灌胃。将造模成功的大鼠分为7组，其中模型对照组、地西泮组各10只，酸枣仁组、石菖蒲组、夜交藤组、百合组、郁金组各11只。模型对照组大鼠腹腔注射PCPA后，连续7 d给予生理盐水灌胃；地西泮组(1 g／kg)、酸枣仁组(18 g／kg)、石菖蒲组(12 g／kg)、夜交藤组(18 g／kg)、百合组(14.4 g／kg)、郁金组(12 g／kg)，大鼠腹腔注射PCPA后，分别连续7 d灌胃相应药液。

1.4 观察指标

1.4.1 一般状态

观察大鼠的一般情况，包括精神状态、皮毛颜色、取食量、饮水量、对外界刺激的反应、死亡情况等。

体质量变化：分别于分组给药前和试验结束时称定体质量，观察其增加量。

1.4.2 睡眠潜伏期、总睡眠时间

第1次腹腔注射造模药36 h后，各组均腹腔注射戊巴比妥钠50 mg／kg（预试验测得引起100.00%大鼠睡眠的最小阈剂量），提起大鼠尾巴，将大鼠腹部朝上放在垫块上。记录大鼠的睡眠潜伏期及睡眠持续时间，以翻正反射消失为发生睡眠，以翻正反射恢复为觉醒。如怀疑翻正反射是否真正复原，于第1次翻正后立即重新背位平躺，如在1 min内又自动翻过来则前1次的时间即为恢复时间，否则以第2次翻过来的时间为准。从给药到翻正反射消失的时间为睡眠潜伏期，从翻正反射消失到恢复的时间为总的睡眠时间。

1.5 统计学处理

采用SPSS 16.0统计学软件进行分析。数据用均值±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本 t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般状态

空白对照组大鼠精神状态良好，活动机灵，反应敏捷，毛发有光泽，体质量明显增加；模型对照组大鼠精神亢奋，毛硬粗糙且竖起无光泽，易激惹，饮食量有所减少，消瘦；各中药组和阳性药组大鼠精神状态、活动及反应情况不如空白对照组大鼠。

在给药结束后，进行戊巴比妥翻正试验注射戊巴比妥后，部分组别出现大鼠死亡和翻正反射未消失，具体为：空白对照组死亡1只，1只翻正反射未消失；模型对照组死亡1只；地西泮组1只翻正反射未消失；夜交藤组死亡1只，1只翻正反射未消失；郁金组死亡1只，2只翻正反射未消失；石菖蒲组死亡1只，1只翻正反射未消失。以上大鼠均不计入试验结果。

2.2 体质量增加量

结果显示，与空白对照组比较，模型组和各给药组大鼠体质量增加量均低于空白对照组，其中模型对照组与空白对照组差异显著(P＜0.01)；与模型组比较，各给药组大鼠体质量增加量均高于模型组，但差异无统计学意义。详见表2和图2。

表2 各组大鼠试验结束时体质量增加情况（±s，g）

表2 各组大鼠试验结束时体质量增加情况（±s，g）

组别空白对照组（n＝9）模型对照组（n＝9）地西泮组（n＝9）酸枣仁组（n＝11）夜交藤组（n＝9）百合组（n＝11）郁金组（n＝8）石菖蒲组（n＝9）体质量增加量59.89±5.78 38.33±8.35*48.56±15.11 47.36±12.67 51.33±14.15 41.73±21.74 42.50±23.54 53.22±18.55

2.3 睡眠潜伏期、总睡眠时间

结果表明，与模型对照组比较，地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组、郁金组、石菖蒲组的睡眠潜伏期均缩短，其中地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组有显著性缩短（P＜0.01）；与模型对照组比较，地西泮组、酸枣仁组、百合组、郁金组的睡眠持续时间均延长，其中地西泮组延长最显著（P＜0.01）。详见表3和图3。

表3 各组大鼠给药结束后戊巴比妥钠翻正试验结果比较（±s，min）

表3 各组大鼠给药结束后戊巴比妥钠翻正试验结果比较（±s，min）

注：与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组相比，＃P＜0.01。

组别空白对照组（n＝9）模型对照组（n＝9）地西泮组（n＝9）酸枣仁组（n＝11）夜交藤组（n＝9）百合组（n＝11）郁金组（n＝8）石菖蒲组（n＝9）睡眠潜伏期2.67±0.71 3.67±1.23**2.44±0.53＃2.36±0.51＃2.56±0.53＃2.45±0.69＃3.25±0.89 3.11±0.78睡眠持续时间106.89±12.23 81.44±13.22*115.89±13.72＃109.00±48.21 83.00±14.90*107.09±28.08 102.88±31.17 76.56±7.54**

3 讨论

对氯苯丙氨酸大鼠失眠模型是目前公认的经典动物失眠模型。造模过程主要是给大鼠连续2 d腹腔注射一定量的PCPA混悬液，PCPA为5-羟色胺(5-HT)合成抑制剂，可选择性地作用于色氨酸羟化酶，抑制酶活性，足量给予时所致失眠可持续2周之久[1]。因此，PCPA混悬液的制备决定造模的成败。

有研究显示，用弱碱性生理盐水溶解PCPA可得PCPA混悬液[2]。但本课题组在试验过程中发现，用弱碱性生理盐水溶解PCPA后，PCPA完全浮在生理盐水上层，生理盐水中只有极少量的PCPA悬浮，达不到腹腔注射要求。分析原因，可能是在本研究条件下，PCPA在弱碱性生理盐水溶解性不够，需添加助溶剂帮助溶解PCPA。因此，本课题组先用二甲基亚砜（DMSO）溶解PCPA，后用生理盐水溶解，得到了PCPA悬浮液，达到了腹腔注射的要求。

图2 各组大鼠试验结束时体质量增加量

图3 各组大鼠给药结束后戊巴比妥钠翻正试验柱状图

本研究中，预试验测得引起100.00%大鼠睡眠的最小阈剂量为50 mg／kg，但给药结束后进行戊巴比妥翻正试验时，部分组别大鼠出现翻正反射未消失及死亡现象。通过注射预试验测定的戊巴比妥剂量(50 mg／kg)，仍有部分大鼠翻正反射未消失，可能与大鼠第1次注射戊巴比妥后出现戊巴比妥耐药有关；部分大鼠出现死亡现象，可能与大鼠个体差异相关。因此，以后再进行此类研究时，最好将每组大鼠预设只数多出几只，以免样本数量达不到预先设定数量，导致因样本量较少而产生试验误差。

酸枣仁，味甘、酸，性平，归心、肝、胆经，有养心益肝、安神、敛汗之功效[3]，属于养心安神药。在治疗失眠的中药中排名第一，其用药频次和频率远高于其他中药，是失眠治疗的代表中药，为多数医家在处方时选用[4]。本研究结果显示，酸枣仁可显著缩短睡眠潜伏期（P＜0.01），且有延长睡眠持续时间趋势。

夜交藤，也叫首乌藤，味甘、微苦，性平，归心、肝经，有养血安神、祛风通络之功效[3]，属于养心安神药。因为夜交藤善于养血，故最宜于血虚所致失眠。国医大师朱良春认为，安神中药以夜交藤的催眠作用最佳[5]。本研究中，夜交藤可显著缩短睡眠潜伏期（P＜0.01）。

百合，味甘，性微寒，归肺、心、胃经，具有养阴润肺、清心安神之功效[3]。百合临床常作为主要药物组方治疗各种类型的失眠症状[6-8]。本研究结果显示，百合可显著缩短睡眠潜伏期（P＜0.01），且有延长睡眠持续时间趋势。

郁金，味辛、苦，性寒，归肝、胆、心经，有活血止痛、行气解郁、清心凉血之功效[3]。有医师将郁金作为主药进行组方治疗失眠[9-10]，效果明显。本研究中，郁金对睡眠潜伏期无明显作用，但有延长睡眠持续时间趋势。

石菖蒲，味辛、苦，性温，归心、胃经，有开窍醒神、化湿和胃、宁神益志之功效[3]。有学者选取失眠作为研究病种，利用“中医临床科研信息共享系统”数据仓库存储的辨证论治失眠实际诊疗数据，采用复杂网络等数据挖掘方法，开展多医师辨证论治失眠的有效治疗中药的研究，发现失眠有效核心药物的主体构成有酸枣仁、石菖蒲等[11]。本研究中，郁金对睡眠潜伏期和睡眠持续时间均无显著作用，可能与本试验条件、试验样本数量较少及试验误差有关。

综上所述，酸枣仁、夜交藤、百合、郁金等单味药对改善失眠模型大鼠的睡眠作用具有一定效果，或可缩短睡眠潜伏期或延长睡眠持续时间，对治疗失眠有一定效果，尚需进一步深入研究。

[1]金世建，林杏娥，刘 妮.PCPA大鼠失眠模型的症候属性研究[J].中医药学刊，2006，24（3）：450-451.

[2]张亚宁，张军武，张胜威，等 .PCPA基于步态分析系统的DL-4-氯苯基丙氨酸致大鼠失眠模型的研究[J].现代中医药，2014，34（2）：80-83.

[3]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2002：798-1011.

[4]雷 捷.失眠文献用药规律分析及临床研究[D].济南：山东中医药大学，2013.

[5]徐 冰，阎咏梅，冯卫星，等.交藤龙牡二仁汤加味治疗老年性失眠35例[J].北京中医药，2008，27（2）：121-122.

[6]张 苗，谢琼燕.百合地黄汤合越鞠丸加减治疗围绝经期失眠36例[J].浙江中医杂志，2015，50（9）：668.

[7]利顺欣.百合地黄汤合酸枣仁汤加味治疗老年失眠[J].中国中医药现代远程教育，2014，12（20）：48-49.

[8]黄 韬，陈青锋.百合温胆汤治疗痰热内扰型失眠症的随机单盲对照试验研究[J].上海中医药杂志，2006，40（5）：15-16.

[9]胡学军，朱红霞，曲 靖，等.柴胡郁金汤对失眠症患者睡眠质量和生活质量影响的临床观察[J].中国临床医生，2010，38（9）：43-45.

[10]李智杰，谢 谢.加味菖蒲郁金汤联合艾司唑仑片治疗失眠症[J].神经损伤与功能重建，2014，9（1）：47-49.

[11]江丽杰.多医师辨证论治失眠有效治疗方药的发现研究[D].北京：中国中医科学院，2014.

Effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the Sleeping of Insomnia Rat M odels

Li Fengjie，He Ping，Zhao Le，Hao Wei，Li Yikui
（The Academician Research Laboratory of Li Lianda，Xiyuan Hospital CACMS，Beijing，China 100091）

Objective To explore the effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the sleeping of insomnia rat models.M ethods Intraperitoneal injection of PCPA was applied to establish the model of insomnia rats.The successful model rats were randomly divided into the model control group，the positive control group，the Diazepam group（1 g／kg），the Ziziphi Spinosae group（18 g／kg），the Acorus Tatarinowii group（12 g／kg），the Caulis Ploygoni Multiflori group （18 g／kg），the Bulbus Lilii group（14.4 g／kg），and the Radix Curcumae group（12 g／kg）.In addition，a blank control group was set.The rats of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group，Radix Curcumae group were given corresponding concentration solution for 7 d，and the blank control group and the model control group were given normal saline for 7 d.During the administration period，the rats were observed.After the administration，the changes of body weight，sleep latency and total sleep time were observed.Results Compared with the model control group，the sleep latency of every drug administration group reduced；and the sleeplatency of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group reduced obviously（P＜0.01）.The total sleep time of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group increased.And tatarinowii group increased obviously（P＜0.01）.Conclusion Single medication of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae has a certain effect on improving sleep function in insomnia rats，but further study is sill needed.

insomnia；rat；Semen Ziziphi Spinosae；Acorus Tatarinowii；Caulis Ploygoni Multiflori；Bulbus Lilii；Radix Curcumae；PCPA

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2017)06-0001-04

2017-01-08)

10.3969／j.issn.1006-4931.2017.06.001

国家自然科学基金面上项目[81573958]。

李峰杰，男，博士研究生，助理研究员，研究方向为中药药理学，（电子信箱）lfj1210＠126.com。△

李贻奎，男，研究员，主任医师，研究方向为中药药理学，（电子信箱）lyikui＠163.com。