高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量

曹喜红

摘要：目的 HPLC及UV测定阿莫西林胶囊的含量对比。方法 高效液相色谱法选择色谱柱为Agilent C18（4.6×250 mm，5 μm）， 流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=5）-乙 腈 （97.5：2.5），流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm，紫外法选择254 nm波长测定含量。结果 HPLC法中阿莫西林在2.56 ～56.15ug/ml范围内线性关系良好，回归方程：Y=65257X-3244531（r=0.9996），加样回收率平均值为100.68%，RSD 1.7%。结论 HPLC法对比紫外分光光度法测定阿莫西林含量更为准确，重复性高，专属性强

关键词：阿莫西林；高效液相色谱法；紫外分光光度法

阿莫西林因其耐酸、口服吸收快、生物利用度高等特点，使其在临床上深受医生和患者的厚爱[1]。2015版药典中推荐使用高效液相色谱法来分析本品[2]，但相对来说紫外分光光度法仪器设备要求简单，检测时间快捷，该法是否可以作为本品基层药物监测的备选方法值得考察。本文由此出发，对比分析高效液相及紫外分光光度法测定阿莫西林含量。

1临床资料

岛津 LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；岛津UV-2450型紫外分光光度计；乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；氢氧化钾、磷酸二氢钾、N-溴代丁二酰亚胺均为色谱纯；阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130409-201011，纯度85.80%）；阿莫西林胶囊（武汉健民集团随州药业有限公司）。

2实验方法

2.1高效液相色谱法

2.1.1色谱条件[2] 色谱柱选择Agilent C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液 （用 2 mol/LKOH调节pH值5.0）-乙 腈 （97.5：2.5），检测波长：254 nm， 进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）。

2.1.2溶液的制备

2.1.2.1供试品溶液的制备 精密称取10颗阿莫西林膠囊，混合均匀，采用十万分位天平精密称定0.100g供试品，转移入50 ml容量瓶中，加入20 ml流动相后，震荡至澄清，加流动相至对应刻度后，用0.2 μm有机滤膜过滤，取续滤液待用。

2.1.2.2对照品溶液制备 用十万分位天平精密称取11.23mg阿莫西林对照品，转移入100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀至澄清即得。

2.1.3高效液相色谱法

2.1.3.1精密度试验 于“2.1.1” 项色谱条件下，取对照品溶液重复进样（n=6），进样量均为10 μl，测定每次峰面积，结合所得数据计算RSD，结果RSD=1.6%<2.0%，达到药典规定，提示本法精密度良好。

2.1.3.2重复性试验 取同批次供试品6份，根据“2.1.2.1”项下供试品制备方法制备供试品溶液，采用“2.1.1” 项色谱条件，每份样品进样10 μl，采集每次峰面积，结合所得数据计算RSD，结果RSD=1.4%<2.0%，达到药典规定，提示本法重复性良好。

2.1.3.3稳定性试验 于0h、4h、8h、12h、24h取“2.1.2.1”项供试品溶液，采用“2.1.1”项色谱条件，测定不同时间点的色谱峰面积，结合所得峰面积计算不同时间供试品浓度变化，结果RSD=1.3%<2.0%，达到药典规定，提示供试品在24 h内较为稳定。

2.1.3.4回收率考察 采用5 ml移液管精密量取5 ml “2.1.2.1”项供试液（n=3），保存至3个锥形瓶内，依次加阿莫西林对照品2.42mg、5.87和10.29mg，混合均匀后取续滤液，进样10 μl，测定对应样品的峰面积，结合所得浓度计算回收率，所得回收率分别为：100.93%、100.62%和100.48%，平均100.68%，RSD 1.7%<2.0%，达到药典规定。

2.1.4 线性关系考察 采用对应刻度移液管分别量取“2.1.2.2”下对照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用0.2 um有机滤膜过滤，取对应续滤液即为系列标准溶液。采用“2.1.1” 项色谱条件，进样10 ul，测定系列标准溶液色谱峰面积，并以峰面积为横坐标和浓度纵坐标绘制标准曲线，得到方程为：Y =65257X-3244531（r=0.9996），提示，阿莫西林浓度在2.56～56.15ug/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2紫外分光光度法 参考文献[3]，平行精密称取3份阿莫西林胶囊，每份约0.1 g，置于100 ml容量瓶，加水溶解摇匀至澄清后，补充至刻度，精密量取上述溶液5 ml，稀释一倍后再精密量取该液1.0 ml，加入0.1 mol/L NaoH1.0 ml及0.05% NBS（N-溴代丁二酰亚胺）1.0 ml，加蒸馏水稀释至5 ml配成检测液，另以0.1 mol/L NaOH及0.05% NBS（N-溴代丁二酰亚胺）等体积混合溶液为空白对照于385 nm波长处测定吸光度；精密取对照品10.23 mg同上法制备不同浓度溶液，测定吸光度，并以吸光度对其浓度进行线性回归，得到线性方程为： Y =23252X-42431，（r=0.9994），结果表明，阿莫西林浓度在2.56～56.15ug/ml范围内与吸光度存在较好线性关系。参考“2.1.3.1- 2.1.3.4”项过程并结合药典，对紫外分光光度法进行精密度、重复性、稳定性、回收率实验，结果上述RSD均<2%，与药典标准相符。

2.3样品中阿莫西林含量测定 结合上述检测条件，分别测定阿莫西林对照品溶液与3批阿莫西林胶囊供试品溶液（取供试品0.1 g），高效液相色谱法及紫外分光光度法均采用自身对照法对供试品内含有的阿莫西林含量进行测定。

3结果

结果显示，高效液相法测定阿莫西林胶囊中阿莫西林平均含量（与标识量比较）为（100.49±0.14）%，而紫外分光光度法测定的平均含量为（101.55±0.47）%，两组差异具有统计学意义（P<0.05）。

4讨论

由本文结果，HPLC方法测得的阿莫西林含量低于UV方法（P<0.05），且该法测得量更为接近样品标示含量，分析原因主要是：不同物质在固定相和流动相的分配系数不同，以至通过色谱柱后，溶液中不同性质的物质得以分开，进而将阿莫西林制备过程中的有关物质、杂质等干扰有效分离，而UV法没有上述作用，故而HPLC法更为准确。

综上所述，高效液相法及紫外分光光度法测定阿莫西林含量的方法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，但高效液相所测结果更接近药物真实含量，建议考虑此种方式来测定阿莫西林胶囊中阿莫西林含量。

参考文献：

[1]陈宏，陈友存，程乐华，等.HPLC测定阿莫西林胶囊中的有效成分[J].光谱实验室，2013，30（6）：2733-2736.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京： 化学工业出版社，2015.566-567.

[3]卢海波，李航，杨莲芝.紫外分光光度法快速测定阿莫西林含量[J].四川医学，2000，21（4）：344-344.编辑/李桦