分析检测精子来源与活力对ICSI结局的影响

张琴，苏占营，吴成亮，辜敏，巢时斌

(九江市妇幼保健院，1、检验科；2、辅助生殖科，江西九江332000)

分析检测精子来源与活力对ICSI结局的影响

张琴1，苏占营2，吴成亮2，辜敏2，巢时斌2

(九江市妇幼保健院，1、检验科；2、辅助生殖科，江西九江332000)

目的探讨常规手淫取精、经皮附睾穿刺抽吸术、睾丸活检术三种不同方式获得新鲜精子行卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection ICSI）助孕结局。方法回顾性分析2014年1月－2016年6月我科室采用ICSI助孕的103新鲜周期。将患者分为ABC三组（A组：45例严重少弱精子症患者常规手淫取精获得精子助孕、B组：23例梗阻性无精症患者经皮附睾穿刺抽吸术获得附睾精子助孕、C组：35例无精子症患者经睾丸活检获得睾丸精子助孕）女方均为年龄在25岁到37岁生育力筛查正常或单纯因输卵管因素导致的不育。比较三组的2pn受精率、优质胚胎率、着床率、临床妊娠率。结果A组、B组、C组2pn受精率、优质胚胎率、着床率、临床妊娠率为72．91%VS 76．91%VS 71．91%；42．55%VS 51．55%VS 48．55%；32．14%VS 38．14%VS 35．27%；53．33%VS 56．52%VS 54．29%(P＞0．05)。结论不同来源的精子行ICSI助孕后结局相近，来源不同精子可能不是影响ICSI妊娠结局的主要因素。

严重少弱精子症；无精子症；卵胞浆内单精子注射（ICSI）

男性不育是男科疾病中的常见病，严重影响家庭幸福，增加社会不稳定因素，特别是严重少弱精子症及无精子症是男性不育的重要发病因素[1]。随着时代的进步，卵浆内单精子显微注射（ICSI）技术自1992年首次应用于严重男性因素不育的体外受精以来获得理想的临床效果[2]，此项技术对男性精子数量要求极少，可以达到精卵一对一的关系，为严重少弱精子症患者带来了福音。近年来发展起来的经皮附睾穿刺抽吸（Percutaneous epididymalsperm aspiration：PESA)以及睾丸活检术（testicular sperm aspiration：TESA）为众多无精症患者带来了生育自己后代的希望[3]。但截至目前针对不同来源的精子进行分析检测以及实施ICSI助孕后结局分析的文献较少[4]，本文将103例患者为研究对象，通过结果分析报道如下。

1 资料与方法

1．1临床资料从2014年1月1日至2016年6月30日在本中心进行治疗的严重少弱精子症和无精子症患者中筛选103例，筛选所得患者术前染色体核型检查均未见明显异常。根据WHO第五版精液常规分析SOP文件，严重少弱精子症的诊断标准为：男方3次精液常规检查至少有2次以上符合以下标准者：一次射精的精子密度≤5×106/ ml，同时PR级运动精子＜10%。无精子症的诊断标准为3次射出的精液经离心沉淀后镜检均未见精子。103例患者中55例为女方原发不孕，48例为继发不孕；年龄25～37岁，平均(30±7．28)岁。根据不同来源精子分为3组：A组严重少弱精子症45例；B组经皮附睾穿刺抽吸术获取附睾精子23例；C组睾丸活检术获取精子35例。三组女性年龄无明显差距。所有男性患者在女性取卵当日取精进行ICSI受精。

1．2方法

1．2．1 A组精子获取严重少弱精子症患者完成各项检查后在女性取卵当日前3～5d禁欲，取卵当日手淫取精，精液洗涤、离心后取沉淀备用。

1．2．2 B组精子获取（PESA）患者取仰卧位，碘伏常规消毒、铺巾，1%利多卡因行精索神经局部麻醉。用7号针、10ml注射器吸取配子培养液1ml，左手固定一侧附睾，右手握注射器经皮穿刺入附睾头体部，将注射器拉至5ml位使针筒内形成负压，左手轻轻按压附睾的同时右手将针头缓慢抽出直至针头离开附睾。将抽吸出的附睾液连配子培养液一起注入培养皿中，在倒置显微镜下观察是否有活动精子。如有精子，将抽出液离心沉淀备用。如提取液中无活动精子，则行对侧附睾穿刺，如仍无精子，行睾丸活检取精术。此组筛选的23例患者精子均为附睾来源。

1．2．3 C组精子获取（TESA）患者取仰卧位，碘伏常规消毒、铺巾，1%利多卡因行精索神经局部麻醉。用7号针、10ml注射器吸取配子培养液1ml，左手固定一侧睾丸，右手握注射器经皮穿刺入睾丸，将注射器拉至5ml位使针筒内形成负压，左手轻轻压住睾丸的同时右手将针头在睾丸反复抽动10次以切割睾丸曲细精管，完成后右手针筒成负压状态下抽出（吸取睾丸组织液和少量曲细精管）。将抽出物注入培养皿中，用5号针头将抽出的曲细精管磨碎以达到将内部精子游离出来目的，在倒置显微镜下观察是否有活动精子。如有精子，将抽出液离心沉淀备用。如找不到精子，改行对侧睾丸活检取精术。

1．2．4卵子准备女性患者经超排卵方案用促性腺激素激动剂降调节，用FSH果纳芬或HMG超排至B超观察下卵泡发育到至少有二个直径超过18mm，肌注HCG1万单位以促进卵子成熟，34h后在B超引导下行经阴道取卵术。收集卵子后2h在透明质酸酶作用下去除颗粒细胞（拆蛋），将成熟卵母细胞（MⅡ卵子）放入配子培养液中，在6%二氧化碳浓度及37度环境下平衡2h后行卵胞浆内单精子注射（ICSI）。

1．2．5原核、胚胎卵裂观察和妊娠诊断18h观察并记录2原核形成。取卵后72h选择胚胎移植，三组移植胚胎数均为2个。胚胎评分参考文献[1]。移植后14d检验血HCG，了解是否妊娠，7周后B超观察胎心搏动和妊娠囊数目。如宫内活胚胎数目≥3个，则行选择性减胎术。

1．3统计学方法采用SPSS 18．0统计软件，计量资料组间均数比较偏态分布用秩和检验，正态分布用t检验，计数资料用卡方检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1患者女方情况此研究共记入助孕患者103例，女方年龄25～37岁，平均(30±7．28)岁。共获卵1437枚，成熟卵子数1209枚，2PN受精卵895枚，2PN受精卵卵裂860枚。优质胚胎标准为2PN来源D3天7细胞以上（含7细胞）碎片≤20%胚胎。

2．2三组治疗结果如下表临床妊娠周期56例，妊娠率54．4%；活产周期35例，其中单胎29例，双胎6例（共41位婴儿），体检39位婴儿正常，1位腭裂（单胎），1位多指（单胎）。17例待产；4例自然流产，自然流产率7．14%。

表1 不同组别助孕结局比较

3 讨论

试管婴儿技术诞生以来已为众多不孕不育家庭带去了福音，在解决女性不孕不育因素之后人们更多的关注男性不孕因素，人们视野主要集中于精子活力、数量、血清中的抗体等等[5]，对精液的处理方式和效果提出了更高的要求[6]。严重少弱精子症患者甚至是无精子症患者的精液如何使卵子受孕一直以来困扰着辅助生殖技术人员[7]，直到第二代试管婴儿技术诞生才为众多男性不孕不育患者带来了希望。1985年首次报道全麻下附睾切开取精进行体外受精获得妊娠[8]，1996年美国首次采用TESA技术获取无精症患者睾丸精子，取得了重大成功[9]。随着技术进步，男性取精技术得到不断改进。本研究中所有采取附睾及睾丸取精的患者无一例发生感染、出血、血肿及性功能障碍，上述方法足以取得供ICSI助孕的精子数量。人体正常生理状态下睾丸精子进人附睾后在附睾贮存过程中，精子发生一系列形态结构、生化代谢及其功能的变化，最终具有尾部获得运动能力、精卵识别能力及受精能力[10]。目前文献报道中对于不同精液来源患者的助孕结局是否存在差异报道较少，且报道结果往往不同，董悦芝[11]报道TESA组受精率、卵裂率比PESA组低，而优胚率、妊娠率、流产率等比较差异无统计学意义。王俊霞[12]报道TESA组与PESA组在受精率、妊娠率比较差异无统计学意义，TESA组流产率明显高于PESA组。有关不同来源的精子对胚胎早期发育的影响，部分学者认为对能在早期受精率中有影响，但依然可获得相近的优质胚胎率[13]。本研究结果提示来源不同的精子在2PN受精率、优胚率、着床率、妊娠率中结果之间无明显差异。由于该研究病例有限，有待进一步研究发现应用PESA/TESA获取精子行ICSI中，哪种方式最好，以及如何使用该方法仍需探讨[14，15]。

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Effect of the sperm source path on the pregnancy outcome of ICSI

ZHANG Qin，SU Zhanying，WU Chengliang，GU Min，CHAO Shibin.The Maternal and Child Health Center，Jiujiang Jiangxi 332000，China；1.Clinical Laboratory，2.Assisted Rreproduction Laboratory，Jiangxi Jiujiang 33200，China.

Objective To investigate the therapeutic outcome of intracytoplasmic sperm injection(ICSI)by the common masturbation sperm，percutaneous epididymal sperm aspiration and testicular biopsy．Methods The data of 103 patients received ICSI from January 2014 to June 2016 in our laboratory was retrospectively analyzed．The patients were divided into three groups of ABC (Group A：45 patients with severe oligoasthenozoospermia whose sperm were collected by conventional masturbation for sperm fertility．Group B：23 patients with obstructive azoospermia whose sperm were collected by percutaneous epididymal sperm aspiration．Group C：35 patients with azoospermia whose sperm were collected by testicular biopsy．The women aged 25 to 37 adopting fertility screening showed normal or infertility simply caused by tubal factor．A comparison of three groups of 2pn fertilization rate，high quality embryo rate，implantation rate and clinical pregnancy rate were conducted．Results Group A，group B and group C of 2pn fertilization rate，high quality embryo rate，implantation rate and clinical pregnancy rate were 72．91%VS 76．91%VS 71．91%；42．55%VS 51．55%VS 48．55%；32．14%VS 38．14%VS 35．27%；53．33%VS 56．52%VS 54．29%(P＞0．05)respectively．Conclusions The therapeutic outcomes of ICSI with different sperm sources are similar，the sperm from different sources may not be the main factor affecting the outcome of ICSI pregnancy．

Serious oligoasthenospermia；Azoospermia；Intracytoplasmic Sperm injection(ICSI)

R446．19，R698+．2

A

1674－1129(2017)02－0190－03

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．016

2016-08-23；

2016-12-23)

江西省卫生厅科技计划（20143059）

张琴，女，1987年生，检验技师，主要从事临床血液学检验及部分临床免疫、生化检验工作。