胃癌患者血清、癌组织中炎性因子及凋亡相关因子的表达

2017-04-20刘继平

中国老年学杂志 2017年7期

关键词：试剂盒胃癌因子

董鹏刘继平

(内蒙古民族大学附属医院普外科，内蒙古通辽 028000)

胃癌患者血清、癌组织中炎性因子及凋亡相关因子的表达

董鹏刘继平1

(内蒙古民族大学附属医院普外科，内蒙古通辽 028000)

目的探讨胃癌患者血清及癌组织中炎性因子、凋亡相关因子的表达水平，为术后靶向治疗提供科学依据。方法选取该院住院手术的胃癌确诊患者68例作为受试者，术前和术后第7天受试者均空腹抽取静脉血，受试者于术后留取癌组织及癌旁正常组织(距癌组织大于5 cm)。采用实时荧光定量法检测血清、癌旁正常组织及癌组织中炎性因子和凋亡相关因子的mRNA表达水平；采用免疫组织化学染色法检测癌组织及癌旁正常组织中炎性因子和凋亡相关因子的蛋白阳性表达强度。结果与术前比较，术后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA表达水平均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA表达水平均明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与癌旁正常组织比较，癌组织中IL-2、wtP53蛋白和基因表达水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)；TNF-α、Cyclin E蛋白和基因表达水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌患者术后IL-2、wtP53的上调及TNF-α、Cyclin E的下调提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E均参与胃癌的发生发展，有望成为胃癌治疗的新靶点。

胃癌；炎性因子；凋亡因子

胃癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，中国是胃癌高发区，其发病率有逐年上升趋势。目前对胃癌的病因、发病机制的研究报道很多〔1,2〕，其中对癌基因和抑癌基因的研究甚广〔3〕，但对炎性因子、凋亡基因与胃癌发生发展关系的报道甚少。本研究通过分子水平检测胃癌患者血清及癌组织中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA水平及蛋白阳性表达强度，探讨胃癌发病机制及胃癌治疗的靶点。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集内蒙古民族大学附属医院2014年10月至2016年2月确诊胃癌的住院患者68例作为受试者，其中男36例，平均年龄(53.5±2.9)岁，女32例，平均年龄(52.6±4.1)岁。病理类型：高分化腺癌21例、中分化腺癌18例、低分化腺癌29例；无淋巴转移者33例、有淋巴转移者35例；临床分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例，Ⅳ期15例；癌症患者全部排除其他器官瘤变且术前均未接受放疗或化疗处理，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 实验试剂和仪器设备试剂：抗体IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E由美国Santa Cruz 公司提供；试剂盒SP9710和DAB由福州迈新生物技术有限公司提供；分子生物学试剂和试剂盒均由上海生物工程有限公司提供。莱卡 2245石蜡切片机(德国)；ABI7300实时荧光定量PCR仪(美国)；Biometra PCR扩增仪(美国)。

1.3 基因和蛋白检测

1.3.1 各组IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的基因表达水平 IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的引物序列由上海生物工程有限公司提供，产物分别是287 bp、 254 bp、173 bp和136 bp，采用实时荧光定量PCR检测，严格按照试剂盒操作。凝胶成像后用凝胶图像分析系统分析结果，mRNA表达水平以CT值表示。

1.3.2 各组IL-2、P53、TNF-α和Cyclin E的蛋白表达水平组织经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋，制备成3 μm的防脱切片，行免疫组织化学染色，抗体稀释比例均为1∶100，4℃过夜后连接SP试剂盒，PBS缓冲液充分冲洗后用DAB显色试剂盒显色，苏木精复染细胞核，树胶封片，光学显微镜下观察分析。

1.4 统计学方法采用SPSS16.0统计软件进行t检验及χ2检验。

2 结果

2.1 血清、癌旁正常组织和癌组织中IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E mRNA表达水平的比较见表1、表2。与术前比较，术后胃癌患者血清中IL-2、wtP53 mRNA水平均明显升高(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平均明显降低(P<0.01)。与癌旁正常组织比较，癌组织中IL-2、wtP53 mRNA水平明显降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E mRNA水平明显升高(P<0.01)。

时间IL-2wtP53TNF-αCyclinE术前1.12±0.540.93±0.158.05±0.999.38±1.03术后3.51±0.821)2.64±0.471)3.25±0.611)3.55±0.861)

与术前比较：1)P<0.01

2.2 IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E在癌旁正常组织和癌组织中的蛋白表达比较与癌旁正常组织比较，癌组织中IL-2、wtP53的蛋白阳性表达强度明显降低(P<0.01)；TNF-α和Cyclin E的蛋白阳性表达强度明显升高(P<0.01)。采用图像分析软件Motic Images Advanced 3.2检测灰度值，蛋白阳性表达强度与灰度值呈反比。见表3。

组别IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常组织4.93±0.515.62±0.892.97±0.713.45±0.83癌组织0.85±0.131)1.38±0.431)10.52±1.411)12.08±1.581)

与癌旁正常组织比较：1)P<0.01，下表同

组别IL-2wtP53TNF-αCyclinE癌旁正常组织85.62±4.3894.35±5.07130.81±8.75134.88±9.26癌组织129.08±8.911)135.67±9.061)90.74±6.321)85.25±6.311)

3 讨论

胃癌是常见消化道肿瘤之一，目前其发病机制尚未完全明确。胃癌的发生发展可分为多个阶段，同时各阶段均有多种基因参与。近年来研究证实，凋亡因子、炎性因子与肿瘤的发生发展日益密切，比如IL-1、IL-2、Bcl-2、Bax等〔4，5〕，他们参与多种恶性肿瘤的发生发展过程〔6〕。已有研究证实，白细胞介素(IL)-2具有多种生物学活性，是迄今发现的功能最为广泛的细胞因子之一，它能促进T细胞介导的免疫反应，调节T细胞的成熟活化参与机体免疫应答；TNF-α由巨噬细胞产生，是一种具有多效性的细胞因子，广泛参与机体内多种生物学效应例如组织的损伤及肿瘤坏死，同时可诱导细胞的增生、分化与凋亡；wtP53基因作为肿瘤抑制基因可抑制肿瘤生长并诱导细胞发生凋亡及捕获G1周期，通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而达到抗癌作用；Cyclin E是一种细胞周期蛋白，主要作用是促进DNA复制的起始，其表达受细胞周期调节并在G1期末达到高峰，它能与细胞周期依赖激酶(CDK2) 特异性地结合形成复合物Cyclin E/CDK2，促使底物磷酸化释放转录因子，使细胞通过起始点进入S期，从而在人类肿瘤中高表达〔7～10〕。本研究结果说明胃癌患者术后能使IL-2、wtP53上调和TNF-α和Cyclin E下调，提示IL-2、wtP53、TNF-α和Cyclin E参与胃癌的发生发展，这一研究结果有助于发现胃癌治疗新靶点。

1 程宏厚,王天明.97例早期胃癌临床病理分析〔J〕.中华综合临床医学杂志,2004;10(6):46-7.

2 谢琼,卢月月,易宏锋.Caspase-3和P53在胃癌中的表达及临床意义〔J〕.胃肠学和肝病学杂志,2014;23(11):1287-9.

3 李娜,高俊岩,刘敏.细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展〔J〕.当代医学,2009;15(16):13-4.

4 李军,石搏,黄可欣,等.葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响〔J〕.中国实验诊断学，2013;17(4):631-3.

5 于慧玲,李冬梅,孙勤暖,等.不同宫颈病变患者血清和宫颈病变组织中凋亡相关因子的表达及其临床意义〔J〕.吉林大学学报医学版,2015;41(1):129-35.

6 甘伟平,罗陈飘,陈喜志,等.抑癌基因PTEN和P53在胃癌中的表达及意义〔J〕.中华实用诊断与治疗杂志,2016;30(1):68-70.

7 周春红,蒋茜,盛月华,等.胃癌患者血清TNF、IL-2、IL-6检测〔J〕.齐齐哈尔医学院学报,2009;30(18):2237-8.

8 孙勤暖,李冬梅,吴罡,等.甲状腺乳头状癌患者血清、癌组织中P53、Fas、TNF-α和Cyclin E的表达及临床意义〔J〕.中国免疫学杂志,2014;30(10):1383-7.

9 孙勤暖,李冬梅,于慧玲,等.甲状腺乳头状癌组织中炎性因子的表达及其临床意义〔J〕.吉林大学学报医学版,2014;40(6):1261-6.

10 杨正平.Cyclin E/Cdks复合物相关调控分子与肿瘤关系的研究进展〔J〕.实用肿瘤学杂志,2008;22(2):185-8.

〔2016-10-11修回〕

(编辑郭菁)