冠心病患者血清中趋化因子CXC配体5的表达及其临床意义

王环宇 张福宸 李大鹏 张立敏 张明亮

(佳木斯市中心医院心内科，黑龙江 佳木斯 154002)

冠心病患者血清中趋化因子CXC配体5的表达及其临床意义

王环宇 张福宸 李大鹏 张立敏 张明亮

(佳木斯市中心医院心内科，黑龙江 佳木斯 154002)

目的 研究不同临床类型冠心病(CHD)患者和正常人血清中趋化因子CXC配体(L)5蛋白的表达差异。方法 酶联免疫吸附法检测59例CHD患者和23例正常人血清中CXCL5蛋白的表达。结果 正常对照组、稳定型心绞痛(SAP)组、不稳定型心绞痛(UAP)组和急性心肌梗死(AMI)组血清中的CXCL5蛋白水平分别为(63.47±5.67)、(64.37±7.26)、(69.74±7.99)和(70.84±9.44)ng/ml，与正常对照组和SAP组比较，UAP组和AMI组显著增高(P< 0.05)；与血清CXCL5水平<60 ng/ml组比较，CHD组血清CXCL5水平>70 ng/ml组Gensini评分显著增高(P<0.05)。结论 血清CXCL5水平与CHD病情具有相关性，其可能作用一个经典的炎症因子参与CHD进程。检测血清CXCL5的水平和针对CXCL5相关治疗可为CHD的临床诊断和治疗提供新的标志物和靶点。

冠心病；趋化因子CXC配体(L)5；Gensini评分

研究表明〔1〕，近10年我国冠状动脉硬化性心脏病(CHD)的发病率增加了2～3倍，而急性心肌梗死(AMI)病例增加了2倍以上。CHD的发病机制至今尚未完全阐明，目前认为其发病与多种因素相关，包括遗传、环境、饮食习惯等。炎症反应在CHD的形成与发展中亦扮演着重要角色〔2〕。趋化因子属于细胞因子超家族中的一类小分子分泌性蛋白质，其可通过与其特异性的细胞膜表面G蛋白耦联受体结合，吸引、活化及调节多种白细胞的迁移而参与炎症反应和免疫应答〔3〕。本研究观察不同临床类型CHD患者和正常人血清中趋化因子CXC配体(L)5蛋白的表达差异，以期明确其在CHD的作用及其与CHD程度的相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2013年6月至2016年3月经佳木斯市中心医院冠状动脉造影确诊的CHD病例59例，男28例，女31例；其中AMI 18例，不稳定型心绞痛(UAP)21例，稳定型心绞痛(SAP)20例，年龄42～85(平均63.9)岁。排除先天性心脏病、自身免疫性疾病、风湿性疾病、感染性疾病及肿瘤患者。同期的体检健康者23例作为正常对照组，男10例，女13例；年龄44～83(平均62.6)岁。各组年龄、性别构成无显著差异(P>0.05)。

1.2 酶联免疫吸附(ELISA)法检测CXCL5的表达 受检者清晨空腹抽取静脉血5 ml，3 000 r/min离心5 min，小心吸取上层血清，并于-80℃冰箱冻存备用。待所有样本收集完毕后，用ELISA法检测血清中CXCL5的表达情况，具体操作如下：将不同浓度的重组人CXCL5标准品0.1 ml依次加入96孔板中，同时将各样本0.1 ml也分别加96孔板中，37℃孵育90 min；甩去板内液体，对着吸水纸拍几下，勿洗；将兔抗人CXCL5一抗(1∶10 000)0.1 ml加入96孔板中，37℃孵育60 min；0.01 mol/L,磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3×3 min；加入生物素标记小鼠抗兔IgG 0.1 ml，37℃孵育20 min；0.01 mol/L PBS洗涤3×3 min；加入二抗工作液，37℃孵育20 min，0.01 mol/L PBS洗涤5×3 min；每孔加入37℃平衡显色液，37℃避光显色20 min；每孔加入100 μl TBS终止液；酶标仪在450 nm处读取OD值；绘制标准曲线，利用公式计算出各样本浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件进行方差分析和q检验。

2 结 果

2.1 CHD患者血清高表达CXCL5 与正常对照组〔(63.47±5.67)ng/ml〕和SAP组〔(64.37±7.26)ng/ml〕比较，UAP组〔(69.74±7.99)ng/ml〕和AMI组CXCL5蛋白表达〔(70.84±9.44)ng/ml〕显著增高(P<0.05)。

2.2 CHD患者血清CXCL5浓度与Gensini积分呈正相关 CHD患者血清中CXCL5浓度与年龄不具有相关性，但与Gensini评分具有相关性，与血清CXCL5浓度<60 ng/ml亚组比较，CHD患者血清CXCL5浓度60～70和>70 ng/ml亚组的Gensini评分显著增高(P< 0.05)。见表1。

CXCL5浓度(ng/ml)n年龄(岁)Gensini评分<601662.69±13.5952.19±10.6360～701762.47±13.1467.18±20.931)>702665.62±11.6065.72±18.861)

与<60 ng/ml比较：1)P<0.05

3 讨 论

目前普遍认为CHD的发生与吸烟、高血压、高血脂、糖尿病、肥胖等因素密切相关〔4，5〕。但也有研究表明动脉粥样硬化也与炎症反应有关，是一种慢性炎症性疾，在动脉粥样硬化斑块中有包括巨噬细胞、淋巴细胞和肥大细胞等大量炎性细胞的浸润，这些炎性细胞可通过分泌的各种细胞因子，参与动脉粥样硬化的发展与演进过程〔6〕。根据羧基端两个保守的半胱氨酸残基的位置，趋化因子可被分为4个高保守的亚家族，它们分别为CXC、CC、C和CX3C等(C为半胱氨酸，X为任意氨基酸)。另外，依据是否存在谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(ELR)结构，CXC亚家族可被进一步分为ELR+CXC和ELR-CXC两类〔7〕。关于趋化因子与CHD的关系，国内外学者已经进行了大量研究，结果表明各类趋化因子在CHD形成和发展中的作用不尽相同〔8〕。作为一种多效性趋化因子，CXCL12可直接抑制血小板活化，而后者可加重动脉粥样硬化的形成〔9〕。Yamaguchi等〔10〕研究显示，CXCL12可经PI3K/Akt 信号通路参与心血管疾病的修复过程，其中包括心肌细胞修复、新生血管的形成和心肌梗死后心功能的恢复。由此可见，CXCL12可通过抑制血小板活化、促进新生血管的形成及恢复梗死后心脏功能等途径，来抑制CHD的发展、改善CHD的症状。同样，CCL21及其受体CCR7在动脉粥样硬化斑块的形成中也发挥抑制作用〔11〕。但与CXCL12和CCL21不同的是，CXCL16在CHD中可促进斑块形成及不稳性，甚至诱发斑块出血和斑块破裂〔12〕。CXCL5属于ELR+CXCL类趋化因子，作为炎性因子，CXCL5可以参与先天性和后天性免疫应答，并在动脉粥样硬化中发挥重要作用〔13，14〕。研究表明，CXCL5可通过调节巨噬细胞活化，增加胆固醇外流调节蛋白ABCA1的表达及增强巨噬细胞的胆固醇外流活性来调节泡沫细胞的形成，最终参与动脉粥样硬化的发展〔13〕。另外，作为CXCL5的唯一特异性受体，CXCR2也已被报道在动脉粥样硬化损伤进程中，参与巨噬细胞积蓄〔15〕。本研究结果提示，血清CXCL5的浓度与CHD病情具有相关性，其可能作用一个经典的炎症因子参与了CHD的进程。检测血清CXCL5的水平，可为CHD的临床诊断和病程评估提供参考依据。

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7 Douglas MR，Morrison KE，Salmon M，etal.Why does inflammation persist：a dominant role for the stromal microenvironment〔J〕?Exp Rev Mol Med，2002；4(25)：1-18.

8 Burke-Gaffney A，Brooks AV，Bogle RG.Regulation of chemokine expression in atherosclerosis〔J〕.Vasc Pharmacol，2002；38(5)：283-92.

9 Stellos K，Bigalke B，Langer H，etal.Expression of stromal-cell derived factor-1 on circulating platelets is increased in patients with acute coronary syndrome and correlates with the number of CD34+progenitor cells〔J〕.Eur Heart J，2009；30(5)：584-93.

10 Yamaguchi J，Kusano KF，Masuo O，etal.Stromal cell-derived factor-1 effects on ex vivo expanded endothelial progenitor cell recruitment for ischemic neovascularization〔J〕.Circulation，2003；107(9)：1322-8.

11 Nickel T，Pfeiler S，Summo C，etal.OxLDL downregulates the dendritic cell homing factors CCR7 and CCL21〔J〕.Mediators Inflamm，2012；2012(2)：320953.

12 Huang M，Han Y，Zhang X，etal.An intron polymorphism in the CXCL16 gene is associated with increased risk of coronary artery disease in Chinese Han population：a large angiography-based study〔J〕.Atherosclerosis，2010；210(1)：160-5.

13 Rousselle A，Qadri F，Leukel L，etal.CXCL5 limits macrophage foam cell formation in atherosclerosis〔J〕.J Clin Invest，2013；123(3)：1343-7.

14 Sepuru KM，Poluri KM，Rajarathnam K.Solution structure of CXCL5-a novel chemokine and adipokine implicated in inflammation and obesity〔J〕.PLoS One，2014；9(4)：e93228.

15 Boisvert WA，Santiago R，Curtiss LK，etal.A leukocyte homologue of the IL-8 receptor CXCR-2 mediates the accumulation of macrophages in atherosclerotic lesions of LDL receptor-deficient mice〔J〕.J Clin Invest，1998；101(2)：353-63.

〔2016-03-17修回〕

(编辑 苑云杰)

张明亮(1977-)，男，硕士，副主任医师，主要从事心血管介入研究。

王环宇(1976-)，男，硕士，副主任医师，主要从事心血管介入研究。

R541.1

A

1005-9202(2017)07-1640-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.030