山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

2017-04-19王晓艺李涛吕新新张敏

家禽科学 2017年4期

关键词：沙门氏菌琼脂硫酸

王晓艺，李涛，吕新新，张敏

（1.烟台市牟平区姜格庄街道畜牧兽医工作站，山东烟台 264114；2.青岛润达生物科技有限公司，山东青岛 266200）

山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

王晓艺1，李涛2，吕新新2，张敏2

（1.烟台市牟平区姜格庄街道畜牧兽医工作站，山东烟台 264114；2.青岛润达生物科技有限公司，山东青岛 266200）

为了解山东地区鸡沙门氏菌的流行及耐药情况，本文对山东部分市县的病死鸡只进行沙门氏菌的分离培养鉴定，最终得到12株致病性沙门氏菌菌种，并对分离菌株进行耐药性试验，结果鉴定12株沙门氏菌对沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素等均产生了一定的耐药性，对润达炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和强力霉素有一定的敏感性。

沙门氏菌；分离；药敏试验

沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性。鸡源沙门氏菌是鸡场的重要病原菌，可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒[1]，其典型症状为脾脏或肝脏表面密布黄白色坏死灶，心脏出现心肌炎症状，部分肠道或肺脏长有白色肉芽。鸡源沙门氏菌在鸡群中能垂直感染，被感染成鸡生长性能或产蛋下降，雏鸡大批死亡，死亡率高达80%，已成为危害养禽业的首要传染病之一[2]。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒，人畜感染后它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。沙门氏菌不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失，而且会严重威胁人类的健康，沙门氏菌病已成为一种常见多发的人畜共患病[3]。

对山东部分养鸡场的鸡源沙门氏菌病的流行情况进行调查，发现沙门氏菌广泛存在于鸡场中，由于沙门氏菌可以通过生殖道污染禽蛋，造成种蛋的孵化率降低和污染以及鸡只的大规模发病和死亡，引起严重的经济损失，极大困扰着养禽业的发展[4]。此外，滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病的治疗越来越困难，给养鸡业造成了严重的经济损失。在这种背景下，快速、准确地检出病原体和体外药敏分析结果就成为必要。本文从病死鸡中分离培养沙门氏菌，用纸片法对分离菌株进行药物的敏感性研究，分析鸡源沙门氏菌对各类药物的敏感性情况，为当前流行的鸡源沙门氏菌的合理用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 培养基营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，肉汤培养基，三糖铁培养基，蛋白胨水培养基，赖氨酸铁琼脂培养基。

1.1.2 菌株试验菌株来自山东部分市县养鸡场的病死鸡只，分离自病鸡内脏，共12株。

1.1.3 药敏纸片硫酸安普霉素（Apramycin Sulfate），硫酸新霉素（Neomycin Sulphate），氟苯尼考（Florfenicol），强力霉素（Doxy），替米考星（Tilmicosin），阿米卡星（Amikacin），林可霉素（Lincomycin），阿莫西林（Amoxicillin），硫酸黏菌素（Colistin Sulfate），磷霉素钠（Fosfomvcin Sodium），头孢噻肟钠（Claforan）（注：以上药敏片均购自杭州滨和生物试剂有限公司），呼治常安，润达炎迪克（注：以上二种药敏片为实验室自制）。

1.2 试验方法

1.2.1 鸡源沙门氏菌的分离试验将病料肝脏组织无菌条件下接种于普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h。

1.2.2 鸡源沙门氏菌的鉴定试验将分离到疑似沙门氏菌的菌株进行编号，按常规方法进行三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质(吲哚)试验和赖氨酸脱羧酶试验。结果见表1。

表1 12株鸡源沙门氏菌生化鉴定结果

1.2.2.1 将被检菌穿刺接种三糖铁琼脂，36±1℃培养18～24h后，观察结果。

1.2.2.2 将被检菌接种到尿素酶肉汤中，于36±1℃培养18～24h，观察结果。变红色为阳性，不变色或者变黄色为阴性。

1.2.2.3 将被检菌接种到蛋白胨水培养基中，36± 1℃培养18～24h后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。

1.2.2.4 将被检菌接种到赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化管中，于36±1℃培养18～24h后，观察结果。赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照均变黄为阴性，赖氨酸脱羧酶肉汤变紫，氨基酸脱羧酶对照变黄为阳性。

1.2.3 鸡源沙门氏菌的药敏试验采用世界卫生组织 (WHO)推荐的Kirby-Bauer纸片法进行耐药沙门氏菌对抗菌药物的敏感性测定。用灭菌棒将LB培养物涂抹于LB琼脂平板，将药敏纸片贴压于该平板上，然后37℃培养24h，观察结果。判定标准：抑菌圈直径＞15mm为高度敏感；10mm＜抑菌圈直径＜15mm为中度敏感；抑菌圈直径＜10mm为低度敏感；无抑菌圈为不敏感。结果见表2。

表2 鸡源沙门氏菌药敏试验结果

2 结果

2.1 鸡源沙门氏菌的分离鉴定结果

2.1.1 培养特性将病料接种普通琼脂和SS琼脂培养基，37℃培养18～24h，在普通琼脂平板，形成均一、无色、半透明、表面光滑、隆起、边缘整齐的针尖大小的菌落，在SS琼脂培养基上呈灰色、圆形、中心带黑色的可疑菌落，染色镜检挑取单个菌落进行革兰氏染色，在光学显微镜下观察细菌的形态及染色特点，呈现革兰氏阴性、无芽孢的中等大小杆菌。

以上结果符合沙门氏菌的生长特性。

2.1.2 生化鉴定结果 ①三糖铁试验：沙门氏菌反应为：斜面产碱，底层产酸，产 H2S；②尿素酶试验：沙门氏菌反应为阴性；③靛基质(吲哚)试验：沙门氏菌反应为阴性；④赖氨酸脱羧酶试验：沙门氏菌反应为阳性。

结合以上结果，确定12株菌种均为沙门氏菌。

2.2 沙门氏菌的药物敏感性试验采用世界卫生组织 (WHO)推荐的Kirby-Bauer纸片法进行敏感性测定。测试沙门氏菌对硫酸安普霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、强力霉素、替米考星、阿米卡星、林可霉素、阿莫西林、硫酸黏菌素、磷霉素钠、头孢噻肟钠、呼治常安、润达炎迪克的敏感性。

根据试验结果分析可知：分离得到的12株沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素的敏感率为0，说明沙门氏菌对这三种药的耐药性高，呈现多重耐药；沙门氏菌分离株对润达炎迪克、硫酸黏菌素、呼治常安和强力霉素的敏感率高达80%以上，以上这几种药可作为临床用药。