鸡源和鸽源基因Ⅵ型新城疫病毒对鸽的致病性比较

胡新岗+吴双+黄银云+郭广富

摘要：为了比较鸡源、鸽源VIb亚型新城疫病毒（NDV）对鸽的致病性差异，选取鸡源毒株ZJ3和鸽源毒株 WX-10-07-Pi，分别人工感染2月龄试验鸽。接种后，观察试验鸽的临床症状、病理剖解变化、喉气管和泄殖腔排毒以及组织学病变情况，结果发现，2株NDV均能导致接种鸽发病，发病率为100%，死亡率为0;WX-10-07-Pi感染组鸽泄殖腔排毒时间长，而且病毒检出率比其他组高;此外，在接种组鸽的多种组织器官中均可检测出病毒。试验结果表明，不同基因型NDV对鸽均有致病性，但致病力强弱与 NDV毒株特性有关;鸽源基因Ⅵb亚型NDV在鸽体内可长期带毒与排毒，且更易在鸽群中传播。

关键词：新城疫病毒;基因Ⅵ型;鸽;致病性;鸡源

中图分类号： S855.3 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）04-0208-03

收稿日期：2014-05-09

基金项目：国家自然科学基金（编号：31440083）;江苏省科技支撑计划（编号：BE2012366）;江苏农牧科技职业学院科研项目（编号：YB201006）。

作者简介：胡新岗（1974—），男，安徽宿州人，硕士，副教授，从事动物医学专业的教学、科研及高职教育管理研究。Tel：（0523）86158089;E-mail：gxh008@qq.com。

通信作者：吴 双，博士，副教授，研究方向为动物传染病防控与流行病学。E-mail：jswushuang@sina.cn。

新城疫（Newcastle disease，ND）是一种急性、高度传染性疾病，已知能自然或人工感染新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的鸟类超过了250种，现在已经被国际兽疫局（OIE）列为法定应报告的传染病[1]。鸽子是介于家养和野生中间状态的禽类，在新城疫传播中起到重要的桥梁作用，而鸽新城疫是由鸽Ⅰ型副黏病毒（pigeon paramyxovirus type 1，PPMV-1）引起的一种高度接触性传染病，是严重危害养鸽业的主要疫病之一[2]。大多数学者认为，PPMV-1是鸡NDV的一种变异株[3]，该病毒首次于1981年在鸽体内被分离到，其中基因Ⅵ型NDV被认为是引起20世纪80年代初期新城疫第3次大流行的主要毒株，并在世界范围内陆续在鸽系野禽中流行[4]。

诸多分子流行病学研究表明，基因Ⅵ型NDV主要在鸽群中分离到，并且鸽群中分离到的NDV主要是基因Ⅵb亚型，与当前世界上流行的优势基因Ⅶd亚型并不一致[5-6];此外，对鸡而言，鸽体内分离的强毒NDV一般被认为是中等毒力病毒，这在一定程度上表明基因Ⅵb亚型NDV对其他家禽的传播能力相对有限[7-8]。因此可以认为，基因Ⅵb亚型NDV非常特殊、生物学意义重大，但是目前对基因Ⅵb亚型病毒的研究开展得还不够深入，多局限于基因组序列测定、分析和主要蛋白的表达等层面。本试验研究鸽源、鸡源基因Ⅵ型NDV对鸽的致病性，并分析鸽感染2种病毒后的临床诊断症状、病理变化、排毒规律等差异，以期了解它们在病毒携带和传播中的作用，对于基因Ⅵ型NDV的研究和控制具有一定的现实指导意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 毒株 基因Ⅵb亚型鸡源NDV ZJ3、基因Ⅵb亚型鸽源NDV WX-10-07-Pi均由农业部畜禽传染病学重点开放实验室分离、纯化和保存。ZJ3、WX-10-07-Pi均为对鸡中等毒力毒株，鸡胚半数致死量ELD50（0.1 mL接种剂量）毒价分别为108.50、108.14。

1.1.2 鸡胚及试验动物 非免疫鸡胚购自扬州市某非免疫鸡场，自行孵化到所需日龄。2月龄非免疫美国白羽王鸽，购自江苏省江都市飞亚肉鸽养殖基地。经测定，试验前所有试验动物体内均无NDV和禽流感病毒抗体。

1.1.3 运输液 运输液的配制是根据OIE推荐的配方[9]并稍作调整：用pH值为7.2的磷酸缓冲盐（PBS）溶液配制运输液，溶液中各种抗生素的剂量分别为青霉素10 000 U/mL，链霉素 10 mg/mL，庆大霉素250 μg/mL，卡那霉素250 μg/mL;最后用10mol/L浓度的NaOH溶液调节pH值，使运输液的pH值为7.2。

1.2 试验方法

1.2.1 分组设计 将20羽2月龄的美国白羽王鸽分成2组，每组10羽，另取5羽作为阴性对照组隔离饲养，专人负责。试验组鸽每羽滴鼻、点眼接种含1×106个ELD50病毒尿囊液。阴性对照组鸽接种同剂量的PBS。

1.2.2 临诊症状 接种后每天早晚定时观察2次，持续观察30 d，记录试验鸽的临床症状及发病死亡情况。

1.2.3 喉头和泄殖腔排毒检测 接种后每天定时采集泄殖腔棉拭子及喉头棉拭子，将棉拭子放入四抗PBS中，保存于-20 ℃。每份棉拭子接种3枚9～11日龄非免疫鸡胚，每 12 h 观察1次鸡胚，观察120 h。弃去24 h内死亡的鸡胚，将24 h以后死亡及120 h以后未死亡的鸡胚置4 ℃冰箱过夜后收集尿囊液，测定其血凝价。

1.2.4 病理切片 分别于接种后4、7、14 d，每组随机取2羽鸽子（对照组取1羽），进行病理解剖，记录剖解变化情况。采集气管、肾脏、脾脏、肺脏、肝脏、胰腺、回肠、十二指肠、胸腺9种组织，用10%福尔马林固定，按常规制作石蜡组织切片，苏木精-伊红（HE）染色，在光学显微镜下观察病理组织学变化。

2 结果与分析

2.1 临诊症状

病毒接种后3 d，WX-10-07-Pi、ZJ3感染组仅表现出轻微的精神状态不佳。WX-10-07-Pi组于接种后4 d粪便呈现墨绿色;接种后6 d精神不振、食欲减退，大部分病鸽表现出翅膀悬垂或向两侧分开，两脚麻痹、不能站立;接种后10 d出现眼睑发炎、呼吸困难、咳嗽;在观察期后期，出现轻微的震颤神经症状。ZJ3组在感染后7 d粪便呈水样稀粪;接种后9 d粪便呈墨绿色黏性稀粪;接种后12 d眼睑发炎、眼睛半睁半闭，呼吸困难，出现神经症状;接种后15 d左右，出现典型的神经症状，呈“观星姿势”;接种后20 d起神经症状有所缓解。在1个月的试验期内，试验组鸽发病率为100%，WX-10-07-Pi、ZJ3组均未见死亡，所有耐过的病鸽精神尚好，但明显消瘦;阴性对照组鸽无异常表现。endprint

2.2 病理解剖学变化

WX-10-07-Pi感染组在接种后5 d脾脏轻微肿大，肝边缘有出血点，气管环轻微出血;鸡接种后11 d气管环严重出血。ZJ3感染组鸽在接种后3 d脾脏肿大，表面有针尖至粟粒大的灰白色的坏死结节或伴有出血点，肝脏稍肿;接种后 4 d 胰腺萎缩，肝脏边缘、表面及心叶有出血点和出血纹，气管充血、出血;接种后6 d肝脏呈土黄色。

2.3 泄殖腔和喉头排毒检测

每个泄殖腔棉拭子接种3枚9～11日龄非免疫鸡胚。结果发现，ZJ3感染组的泄殖腔棉拭子中没有检测到病毒，而WX-10-07-Pi感染组的泄殖腔棉拭子中病毒分离率较高，结果见表1。由结果还可见，ZJ3组在接种后的1～4 d能检测到喉头间断性排毒，WX-10-07-Pi组在接种后1至 5 d 检测到喉头持续排毒。

表1 病毒 WX-10-07-Pi感染后3～17 d泄殖腔棉拭子分离病毒结果

接种时间（d） 阳性鸽数（羽） 幸存鸽数（羽）

4 0 10

5 5 8

6 4 8

7 3 8

8 4 6

9 5 6

10 4 6

11 4 6

12 5 6

13 2 6

14 1 6

15 2 4

16 0 4

17 0 4

注：由于ZJ3感染组的泄殖腔棉拭子中未检测出病毒，因此未在表中列出。

2.4 病理组织学变化

接种后，WX-10-07-Pi组鸽的脾脏、肺脏、十二指肠发生了明显的病理组织学变化，ZJ3组的组织学病变主要为脾动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数量减少、十二指肠绒毛黏膜层及固有层局部坏死脱落;对照鸽未见异常变化。具体组织病变详见图1至图6，图7至图9为对照组肺、十二指肠、脾脏组织切片。

3 结论

不同宿主源基因Ⅵb亚型NDV同时感染鸽的试验研究数据目前还比较缺乏，在本试验中，用鸡源毒株ZJ3、鸽源毒株WX-10-07-Pi分别感染美国白羽王鸽，均未引起感染鸽的死亡;ZJ3感染组出现疾病症状比WX-10-07-Pi感染组晚，但是临床症状比WX-10-07-Pi严重许多，尤其是相关的神经症状更为明显，试验结果与相关文献报道鸡源强毒

NDV感染鸽未表现出任何临床症状不一致[10]。大体病变结果表明，肝脏和脾脏是最先观察到的病变部位，随着病程发展，更多的脏器出现病变，但其出现比例和严重程度都不算很高。大体病变最明显的区别是ZJ3感染组中肝脏呈现土黄色的病例较多，有个别病鸽虽然临床诊断症状相当严重，但大体病变却并不显著，与文献报道的一致[11]。

尽管2株病毒对鸽的致病性相当，但是ZJ3感染组泄殖腔却没有检测到排毒，WX-10-07-Pi感染组的泄殖腔棉拭子中病毒分离率较高;喉头排毒检测结果表明，鸽源毒株WX-10-07-Pi带毒时间长且排毒率明显高于ZJ3感染组。这在一定程度上表明，鸽源NDV更容易在鸽群中传播。此外，病鸽多种组织器官出现明显的组织损伤，主要见于消化系统和免疫系统，但是出现病变的比例和严重程度都不高。WX-10-07-Pi组的肺脏发生组织学病变，而ZJ3组的肺脏正常，在一定程度上说明WX-10-07-Pi对鸽的呼吸道亲嗜性较强。

从临床症状、泄殖腔的排毒时间以及泄殖腔的病毒检出率可以部分看出，同为基因Ⅵb亚型，鸽源NDV比鸡源NDV更易在鸽群中传播。这些结果一定程度上验证了目前在我国，Ⅵb亚型是鸽群中所特有的基因型，且鸽源分离株绝大多数属于该亚型的结论。

参考文献：

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[11]万洪全，刘海侠，吴力力，等. 鹅副黏病毒对鸽的致病性研究[J]. 中国兽医科技，2002，32（5）：5-8.endprint