尿路感染患者Th细胞亚群的变化和临床意义

汤璐敏，车妙琳，杨海芸，上官文姬，邹寒冰，李 鹤

（上海交通大学医学院附属仁济医院，上海 200025）

尿路感染患者Th细胞亚群的变化和临床意义

汤璐敏，车妙琳，杨海芸，上官文姬，邹寒冰，李 鹤

（上海交通大学医学院附属仁济医院，上海 200025）

目的：观察研究尿路感染患者Th细胞亚群的变化探讨其临床意义。方法：采用流式细胞仪技术，检测32例尿路感染患者外周血Th细胞亚群（Th1、Th2、Treg、Th17）与10例健康者相比。结果：尿路感染患者CD3+4+T细胞（Th细胞）比例较健康者显著上升，差异有统计学意义，CD3+T细胞、CD3+8+T细胞比例较健康者无显著差异，CD4+/CD8+T细胞比例上升。Th1、Th2、Th17细胞比例较健康者显著上升，差异有统计学意义。Treg细胞比例较健康者无显著差异。Th1／Th2较健康者降低，但无统计学差异。结论：尿路感染患者T细胞亚群和Th细胞亚群的失衡，存在着免疫紊乱。

尿路感染；Th细胞亚群

尿路感染是常见的感染性疾病，大约1/3的成年女性在其一生中患过尿路感染［1］。在首次感染后，约有20%～30%的成年女性在3-4个月内会复发［2］；而6个月内有2次急性发作或在12个月内3次感染则称为复发性尿路感染［1］。我国的流行病学调查显示［3］：未婚女青年尿感的发病率为2%，而已婚女性的发病率增至5%，这与女性成年后开始月经周期、性生活和妊娠等有关。尿路感染的发病还与免疫状态有密切关系。本研究就Th细胞亚群在尿路感染中的变化进行探讨。

1 资料与方法

1.1 对象 收集2014年10月～2015年7月上海交通大学医学院附属仁济医院中医科和普内科门诊的尿路感染患者。诊断标准参照王海燕主编的《肾脏病学（第二版）》。排除标准：（1）合并心脑血管、肝、肾和造血系统等严重疾病者，合并有尿路畸形，或留置导尿管者；（2）孕妇、哺乳期、精神疾病患者；（3）年龄小于20岁，大于70岁。共收集患者32例，其中男性5例，女性27例，年龄50.9±16.9岁。健康对照组10例，男3例，女7例，年龄45.3±16.6岁，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 采用流式细胞仪检测：BD FACSCaliburTM FLOW Cytometer。 主要流式抗体：3-APC、4-FITC、8-PE、8-FITC、25-PE 、127-APC、IL-17-PE、IFNr-PE、IL-4-PE、IgG1-FITC，IgG1-PE。固定穿孔试剂盒 Beckmancoulter。裂解液（Blood Lysing Solution）BD。刺激剂、阻断剂：PMA 佛波酯Phorbol、离子霉素Ionomycin、BFA Brefeldin-A ebioscience、莫能霉素Monensin ebioscience。淋巴细胞培养液：1640/10%胎牛/1%双抗。辅助：DMSO（二甲亚枫）、无菌无叠氮钠PBS、PH7.2 PBS、乙醇。

1.2.2 实验方法 确诊尿路感染患者空腹采血，肝素钠抗凝全血4毫升。CD3+4+8+检测：抗凝血50μL+3 APC、4-FITC、8-PE10μL，Treg检测：抗凝血50μL + 4-FITC、25-PE、127-APC 各6μL，混匀避光15min，加裂解液1mL，混匀避光10 min，PBS洗2次，离心弃上清上机。Th1、Th2、Th17检测：抗凝血50μL + 含刺激剂淋巴细胞培养液450μ UL，37℃细胞培养箱孵育6h，离心，PBS洗一次，重悬。分成4管，每管加抗凝血50μL + 3-APC、8-FITC各6μL 混匀避光15 min，加裂解液1mL，避光10 min，PBS洗1次，加固定，避光15 min，PBS洗1次，加破膜剂，避光5 min，每管分别加r1-PE 6μL、IL-4-PE、INF-γ-PE、IL 17-PE，避光30 min，PBS洗1次，上机。

1.3 统计方法 采用SPSS17.0软件进行分析，数据以mean±SD表示，组间比较采用TTEST分析。

2 结果

2.1 尿路感染患者T细胞亚群的表达水平 表1可见，与健康组相比，尿路感染患者CD3+T细胞比例下降，无显著差异（P＞0.05），CD3+4+T细胞比例 有显著上升，差异有统计学意义（P＜0.05），CD3+8+T细胞比例下降，无显著差异（P＞0.05），CD4+/CD8+T细胞比例上升，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 尿路感染患者T细胞亚群的表达水平（%）

2.2 尿路感染患者Th细胞亚群的表达水平 表2可见，与健康组相比，Th1、Th2、Th17细胞比例较显著上升，差异有统计学意义（（P＜0.05）。Treg细胞比例无显著差异（P＞0.05），Th1/Th2下降但无统计学差异（P＞0.05）

表2 尿路感染患者Th细胞亚群的表达水平（%）

3 讨论

辅助性T淋巴细胞（Th细胞），在与不同的初始抗原相互作用过程中，因接受不同的信号刺激可分化为4种不同的Th细胞亚型，分别为Th1、Th2、Th17以及Treg细胞，它们通过产生各自不同的细胞因子或者通过细胞间的直接接触发挥作用，在正常情况下，Th1和Th2细胞相互影响，相互制约，使机体Th1／Th2细胞维持一定的平衡。在感染情况下Th1/Th2失衡，首先可能是Th1和Th2细胞数量分化的不平衡，使得Th1和Th2细胞所分泌的炎性细胞因子、抗炎细胞因子失衡，从而对局部炎症反应产生重要影响。Th1细胞主要分泌INF-γ、IL-2，介导细胞免疫反应，促进炎症反应，过度的炎症反应会导致不可控制的组织损伤；而Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10、IL-5、IL-13等，介导体液免疫反应，分泌炎症抑制因子，并与IgE的升高和过敏反应相关。研究表明许多疾病的发生、发展与Th1／Th2失衡有密切关系。如在HBV急性感染期，患者Th1与正常组相比有明显升高［4］，而在慢性HBV感染稳定期［5］，患者体内Th2呈优势应答，其相关的细胞因子IL-4、IL-6 和IL-10 等表达升高。在巨细胞病毒感染早期，Th1细胞比例及病毒特异性IFN-γ显著升高；Th2细胞及IL-4均无明显表达［6］。在甲型H1N1流感存活患儿中Th1逐渐升高，Th1/Th2 比例起初下降，最终升高；而死亡患儿的Th1/Th2 比例一直处于下降状态，直至死亡。［7］由此说明在感染性疾病的过程中始终存在着Th1／Th2比例失衡，并将影响疾病的转归和结果。在本研究中尿路感染急性期尿路感染患者Th1、Th2较健康组都有所升高，而Th1/Th2比例却有下降，在尿路感染中存在着一定程度的免疫紊乱。

自从上世纪末和本世纪初，先后认识Treg细胞和Th17细胞。初始CD4+T细胞在TGF-β和IL-6 的共同诱导下可分化为Th17［8］，活化后主要通过分泌IL-17、IL-22、IL-21 等细胞因子，诱导前炎症因子和趋化因子的产生，招募、活化、迁移中性粒细胞，使之聚集于炎症部位，从而加重局部或全身的炎症反应。Th17细胞参与了多种自身免疫性疾病的发病，在幽门螺旋杆菌感染［9］、肺炎［10］等感染性疾病中也有重要作用。而Treg细胞拮抗炎症反应，并且在维持自身免疫耐受以及调节炎症细胞中起着关键作用。它一方面避免了过强的炎症反应对机体的损伤，另一方面可能会引起感染的持续存在。在本研究中，Th17细胞在感染后明显升高，而Treg细胞虽有升高，但无统计学意义，这说明在尿路感染的急性期促炎反应占据优势地位，抑炎反应不明显。

综上所述，Th细胞亚群的失衡对尿路感染的发病、病程和预后有重要意义。

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The clinical research of T help cell subsets in Urinary Tract Infection patients

Tang Lu-min, Che Miao-lin, Yang Hai-yun, Shangguan Wen-ji, Zou Han-bing, Li He
(Renji Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China)

Objective To study the change of T help cell subsets in Urinary Tract Infection(UTI)patients. Methods Peripheral blood mononuclear cells were collected from 32 Urinary Tract Infection patients and 10 healthy persons. The percentage of Th subsets were detected by Flow Cytometry analysis. Results The percentage of CD3+4+T cells in UTI patients was significantly higher than healthy persons as well as the ratio of CD4+/CD8+T cells. No obvious alteration was observed in CD3+8+T cell. The percentage of Th1, Th2, Th17 cell in UTI patients increased compared to healthy persons, while the percentage of Treg cell and the ratio of Th1／Th2 cell were no significant difference. Conclusion There is disorder of T help cell subsets in Urinary Tract Infection patients.

urinary Tract Infection; Th subsets

R691.3

A

1673-016X（2017）01-0037-03

2016-12-21

上海市科委中医引导项目（13401905900），上海市“杏林新星”人才计划（ZYSNXD011-RC-XLXX-20130014）

李鹤，E-mail：lihe1972@hotmail.com；邹寒冰，E-mail：coolice0917@sina.cn