脾阳虚大鼠腹腔消化吸收结构表面微循环血流量变化及其机制研究

乔海峰++刘文俊++刘旭东++王凌志++刘慧慧++王德山++单德红

[摘要]目的 研究脾阳虚模型大鼠腹腔主要消化吸收结构表面微循环血流量的变化，并从血栓素A2（TXA2）/前列环素2（PGI2）（T/P）比值方面探讨其发生机制。方法 选取16只SPF级雄性SD大鼠，随机分为对照组和脾阳虚组（模型组），每组8只。采用激光散斑技术检测大鼠肝、胰腺、胃、小肠和小肠系膜等表面微循环的实时血流量，采用ELISA法检测血清TXA2和PGI2水平。结果 与对照组相比，模型组大鼠肝左叶、肝右侧叶、胰腺、胃和小肠的血流量及T/P比值均显著增加（均P<0.01），但小肠系膜血流量和血清PGI2浓度却明显减少（均P<0.01）。结论 脾阳虚时腹腔主要消化结构存在血流增加现象，其机制与T/P比值升高有关。

[关键词]脾阳虚；血流量；肝；胰腺；胃；小肠；血栓素A2；前列环素2

[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）02（c）-0109-03

Study of blood flows in main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency and its underlying mechanism

QIAO Hai-feng1，2 LIU Wen-jun1 LIU Xu-dong1 WANG Ling-zhi1 LIU Hui-hui1 WANG De-shan1 SHAN De-hong1▲

1.Center Hospital of Chaoyang City in Liaoning Province，Chaoyang 122000，China；2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，China

[Abstract]Objective To study blood flow changes of main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency and its possible mechanism from the ratio of thromboxane A2 （TXA2） and prostacyclin （PGI2）.Methods 16 SPF rats were randomly divided into the control and the spleen yangdeficiency group （the model group），8 rats in each group.Laser speckle was used to detect blood flow changes in liver，pancreas，stomach，small intestine （SI） and its mesenterium.ELISA was employed to measure serum thromboxane A2 （TXA2） and prostacyclin （PGI2） concentrations.Results Compared with those in the control group，blood flows inliver left and right lobes，pancreas，stomach and small intestine and TXA2/PGI2 （T/A） value were significantly increased in the model group （all P<0.01），but blood flow of SI mesenterium and serum PGI2 level were decreased obviously in the model group （all P<0.01）.Conclusion There is enhancement of blood flows in main visceral organs of digestion and absorption in spleen yang deficiency，and its underlying mechanism might be attributed to the increase of T/P value.

[Key words]Spleen yang deficiency；Blood flux；Liver；Pancreas；Stomach；Small intestine；Thromboxane A2；Prostacyclin 2脾陽虚证是临床常见证候，常是脾气虚的进一步发展，既有食少、腹胀、便溏等脾气虚的表现，又有脾阳温煦作用减弱所导致的脘痛喜温喜按、形寒肢冷等虚寒症状。中医认为脾为气血生化之源，气为血之帅，脾阳虚时不仅气血化生不足，同时还会出现阳气虚衰所致血行不利的情况。研究显示，脾阳虚患者存明显的甲襞与舌微循环的血液流速减慢、异形管襻增多[1]，提示机体表层血流减少，但内脏血流是否也存在异常尚不清楚。为此，本研究主要利用激光散斑技术，观察脾阳虚大鼠腹腔主要消化吸收结构表面微循环的血流量变化，并从血栓素A2（thromboxane A2，TXA2）/前列环素（prostacyclin，PGI2）（T/P）比值方面探讨其可能机制。

1材料与方法

1.1实验动物与分组

16只SPF级雄性SD大鼠，购自辽宁省本溪巿实验动物中心[SCXK（辽）-2010-0001]，体质量（200±10）g，随机分为对照组和脾阳虚组（模型组），每组8只。饲养于辽宁中医药大学实验动物中心[SYXK（辽）-2013-000-9]，室温18～23℃，相对湿度45%～55%，自由饮水进食，适应性饲养1周后，开始实验。

1.2脾阳虚模型的复制及评价

按文献方法[2-3]复制大鼠脾阳虚模型并评价，即模型组大鼠首先在15 d内，先饱食1 d，再禁食2 d，共5个循环，同时每日35～37℃游泳至力竭；然后每日灌服20%番泻叶水浸剂（2 ml/100 g），早晚各1次，连续7 d。模型评价标准及方法为：消瘦，检测体质量；食少，代谢笼检测24 h进含水量；神疲，旷场实验法；乏力，检测双前肢抓力；畏寒，检测肛温；便溏，检测大便含水率。

1.3血流量檢测方法

10%水合氯醛（0.35 ml/100 g）麻醉大鼠后，仰卧位固定，从下腹部正中逆时针方向沿左、右肋下缘依次剪开皮肤和肌层，充分暴露肝左叶和右侧叶、胰腺、胃、小肠和小肠系膜等部位后，放置于恒温箱内10 min以上。打开FLPI2-MOOR型激光散斑实时成像系统（英国Moor公司），调整焦距至图像清晰，检测上述结构单位面积平均血流灌注量（BPU，数码信号）。记录参数：像机增益为128；曝光时间为20 ms；滤波为25帧；采样间隔为1000 ms；记录时间为5 min；图像分辨率为752×580。

1.4 TXA2和PGI2含量检测

采用ELISA法检测。取完成血流检测大鼠，于腹主动脉取血，放置20 min后3000 r/min离心25 min，取血清冻存备用。应用Bio-Rad美国伯乐iMark酶标仪，严格按照试剂盒说明书操作（试剂盒购于武汉默沙克生物科技有限公司，批号：69-21720，69-21834）。

1.5统计学分析

利用激光散斑实时成像系统的图像处理程序对各结构表面散斑血流图进行分析，计算每只动物同一结构同一部位的平均血流灌注值。采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

模型组前5个部位（肝左叶、肝右侧叶、胰腺、胃、小肠）的血流及T/P比值均高于对照组，小肠系膜血流和PGI2浓度低于对照组，差异有统计学意义（均P<0.01）（表1）。

3讨论

中医认为脾能够消化吸收食物，又能将营养物质及时外运，以供机体所需。脾失健运，则会导致气血化生不足，如迁延不愈则可转为脾阳虚，进而出现虚寒症状。由于寒象是鉴别脾气虚证与脾阳虚证的重要依据，因此从寒象入手研究脾阳虚证的发生机制更有针对性。脾阳虚的寒象主要有脘痛喜温喜按、形寒肢冷等，因其均为患者主观感受，难以再现于大鼠，特别是无较为客观的评价手段，因此多认定肛温下降为脾阳虚证大鼠的虚寒表现[4-6]。本研究前期工作也采用类似方法，显示脾阳虚证大鼠出现了虚寒表现[3]。

脾阳虚的虚寒症状主要原因是气血化生不足，气虚难以行血，从而导致机体失去气血的温煦和濡养。中医认为“气为血之帅，血为气之母”，这是说气血的相互依赖关系；而“血为气之配，气升则升，气降则降，气凝则凝，气滞则滞”，则着重指出气为血行之动力。尽管对中医“气”的物质基础还没有统一认识[7-9]，但可以通过观察血行情况反推“气”的状态。临床报道显示，脾阳虚患者的甲襞与舌微循环的血液流速减慢、异形管袢增多，提示机体末梢血流障碍减慢[1]，推测是阳气虚衰导致了血行不利，但这种情况是否也发生在内脏目前还无相关报道。

中医“重道轻器，重神轻形”，对脾的实体认识较为淡化，其定位至今仍存争议，但至少涉及现代医学的消化系统[10-13]。本研究利用激光散斑技术检测肝、胰腺、胃、小肠和小肠系膜等部位表面微循环血流情况。由于上述结构均位于腹腔内，传统的激光多普勒技术难以一次性精确测量所有部位的微循环情况，因此本研究采用了激光散斑成像技术。该技术为非接触和无创伤的检测技术，能够一次性对大范围组织或器官表面血流情况进行快速采样，又因为采样过程中无需使用染料或示踪剂，几乎对局部微循环血流无任何影响，结果更为真实可靠，所以该技术已逐渐取代激光多普勒，成为微循环研究领域的新兴技术。激光散斑技术的基本原理是：激光照射粗糙组织表面（高度变化大于激光的波长）后产生散射，由于到达相机成像面的光程差不同，不同散射光之间会在成像面形成随机干涉现象，从而在空间分布上出现明暗变化的颗粒图样，即散斑。由于激光散斑技术的图像分辨率更高、时间分辨率更灵敏，其在中医药科研中的应用逐渐增加[14-18]。

本研究结果显示，模型组小肠系膜血流量明显下降，而其他部位血流却显著增加，存在分化现象。由于肝、胰腺、胃和小肠等器官表面微循环血流增加，提示脾阳虚时血液更多地停留于腹腔内，出现血滞现象。结合前述肢体末梢血流减少的现象，推测脾阳虚发生时血液因阳气虚损而难以充分外运，造成血聚于内脏，进而造成肢体失于气血的温煦和濡养，而出现形寒肢冷等寒象。至于模型组小肠系膜血流减少的原因，可能主要是脾失健运所导致的气血化生不足。从能量代谢的角度来说，脾阳虚属于机体产热不足的一种状态。对于恒温动物来说，体温的维持依赖于产热与散热的平衡，产热大于散热则体温升高，反之下降。安静状态下，机体产热主要依赖内脏，特别是肝脏，而散热主要由皮肤完成。皮肤散热的多少与局部微循环的血流量关系密切，增加血流量能够促进散热，反之则减少散热。脾阳虚时机体因饮食减少而出现产热不足，为了维持体温，机体就会减少散热，主要途径就是调整全身血液分布，即减少皮肤表层微循环血流量，在抑制散热的同时，又减少了血液中营养物质的消耗，而内脏部分因为血液内运而呈现血流量增加的情况，也因此强化了相关内脏功能活动，如肝脏内各种生化反应旺盛，产热增加，从而达到维持体温的目的。

机体血流分布受多种因素影响，其中TXA2和PGI2的关系较受重视[19-21]。TXA2是前列腺素转化过程中所产生的一种不稳定中间产物，具有强烈收缩血管的作用。PGI2主要产生于血管内皮细胞，因其脂溶性较好，可以穿过血管内膜直达肌层，引起血管舒张。通常认为，T/P比值增大可收缩血管，增加血流阻力，而比值变小则舒张血管，降低血流阻力[22-23]。TXA2、PGI2及其比值在脾阳虚中的作用目前还较少报道。研究结果显示，模型组TXA2水平变化不明显，但PGI2浓度显著下降，而T/P比值明显增加，提示脾阳虚时血管舒张程度下降，收缩相对增强，从而导致内脏血液外流困难，这可能就是脾阳虚时腹腔主要结构血流增加的重要之一，但详细机制还需深入探讨。

综上所述，脾阳虚时腹腔主要消化结构存在血流增加现象，这可能是气虚行血不利的客观表现，其发生机制与T/P比值升高有关。

[参考文献]

[1]马宗林，包力，刘翠霞，等.脾虚证外周微循环对比观察[J].辽宁中医杂志，1995，22（10）：437-438.

[2]刘旭东，刘文俊，孙大宇，等.脾气虚证模型大鼠神疲乏力的客观化评价[J].中华中医药杂志，2015，30（3）：699-701.

[3]刘洋，刘旭东，刘文俊，等.基于脾气虚的脾阳虚大鼠模型的复制方法及评价标准研究[J].中国医学创新，2016，13（3）：25-28.

[4]王晓明，易杰，廖世新，等.脾虚证动物模型的客观评估[J].中华中医药杂志，2006，21（7）：406-408.

[5]王颖，郑小伟，李秀月.模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究[J].中华中医药学刊，2012，30（1）：104-107.

[6]唐汉庆，卢兰，李晓华，等.附子注射液对冠心病心脾阳虚证模型大鼠离体心肌的影响[J].中国中医基础医学杂志，2015，21（8）：933-935，976.

[7]梁忠，黄波，陈军.中医之经气与氧代谢相关性研究[J].中国针灸，2012，32（2）：183-186.

[8]张海生.揭示中医学说中“气”概念的本质——古代文献的理解及生理学的事实[J].光明中医，2013，28（12）：2470-2481.

[9]刘艳丽，王秀秀，韩金祥.中医“气”学说研究60年[J].辽宁中医杂志，2014，41（11）：2299-2303.

[10]张启明，张毅，解君，等.中医五藏系统的功能定位[J].北京中医药大学学报，2014，37（7）：437-442.

[11]章莹，吴承玉.中医脾系病位特征及脾系相关疾病之初探[J].江苏中医药，2011，43（2）：6-7.

[12]唐元瑜，纪立金，王尔宁.从中医脾的实体解剖学研究探微脾主运化功能[J].浙江中医药大学学报，2011，35（6）：821-823，833.

[13]何劲，周莉，陈家旭，等.中医脾虚证实质研究进展[J].吉林中医药，2015，35（1）：103-107.

[14]冷雪，张立德，贾连群，等.人参皂苷Rb1对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血影响的作用机制[J].中国实验方剂学杂志，2015，21（24）：104-108.

[15]李迎红，李敏，刘崴，等.从皮肤微循环血流灌注量看身柱穴特异性[J].上海针灸杂志，2016，35（2）：199-201.

[16]周陈陈，石玉婷，于世家，等.补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值影响的观察[J].中华中医药学刊，2016，34（3）：712-714.

[17]臧安缘，贾连群，冷雪，等.电针刺激合用人参皂苷素Rb1对大鼠急性心肌缺血血流及血清酶学的影响[J].吉林中医药，2016，36（10）：1029-1032.

[18]魏锡文，郑曙琴.利用激光散斑成像技术观察2型糖尿病合并动脉硬化症患者舌象微循环变化的临床研究[J].辽宁医学杂志，2015，29（4）：214-215.

[19]丁连翠，路新国.药膳“益脾饮”对脾气虚证大鼠血液流变学及血浆TXB2、6-keto-PGF1α的影响[J].西部中医药，2012，25（5）：33-35.

[20]沙盈盈，梁超，朱晓明，等.活血清解汤早期干预对重症急性胰腺炎患者血液流变学及D二聚体、血栓素A2、前列环素Ⅰ2的影响[J].临床肝胆病杂志，2016，32（4）：678-681.

[21]康群甫，刘卫红，任攀，等.活血解毒中药对动脉粥样硬化小鼠血清PGI2/TXA2及DNA甲基化水平的干预作用[J].北京中医药，2016，35（4）：309-314.

[22]Kasza Z，Fetalvero KM，Ding M，et al.Novel signaling pathways promote a paracrine wave of prostacyclin-induced vascular smooth muscle differentiation[J].J Mol Cell Cardiol，2009，46（5）：682-694.

[23]Wiktorowska-Owczarek A，Berezińska M，Nowak JZ.PUFAs：structures，metabolism and functions[J].Adv Clin Exp Med，2015，24（6）：931-941.

（收稿日期：2017-01-10 本文編辑：祁海文）