猪蓝耳病诊断技术研究进展

2017-04-05徐春志袁翠霞景书灏

兽医导刊 2017年16期

关键词：耳病敏感度研究进展

陈红方英徐春志袁翠霞景书灏

（贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550000）

猪蓝耳病诊断技术研究进展

陈红方英徐春志袁翠霞景书灏

（贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550000）

猪蓝耳病又被成为猪繁殖与呼吸障碍综合症，这种疾病在临床上能够引发发烧、耳朵发紫以及伴有咳嗽的呼吸困难等症，具有极高致死率的传染性疾病，一旦发生，危害性极大，可能导致母猪的流产、繁殖障碍，大大增加了猪仔的死亡率。目前在猪蓝耳病上，并没有有效手段与药物进行治疗，所以能够提前诊断，找到快速诊断的技术显得非常的关键。本文对猪蓝耳病病毒的分离鉴定，分子生物学等诊断方法的研究进展进行了综述，为猪蓝耳病的诊断和防控提供了一定理论依据。

猪蓝耳病；病原学诊断；血清学诊断；分子生物学诊断

由病毒引起的猪蓝耳病，会导致妊娠期母猪的早产、死胎、弱胎，导致猪的呼吸困难，不进食等问题，这种病毒被称作猪繁殖与呼吸综合征病毒。杨汉春认为我国目前流行的这种病毒属于美洲型的毒株，汤德元将美洲型的毒株分为四种亚群，我国流行其中的三种，这三种病毒的传播速度很快，在养猪密集、频繁流转的经济发达国家，这种病毒更加危险。猪繁殖与呼吸综合征病毒导致的病证较为复杂，包括病毒的继发感染等临床症状。在诊断时，应当借助实验室的诊断技术帮助，从而为猪蓝耳病提供诊断与防控的技术支持。

1 病毒的分离鉴定

病毒的分离鉴定，是一种比较切合实际的鉴定方法，能够诊断PRRSV分离细胞，例如猪肺泡巨噬细胞、HS.2H克隆细胞等。对于用欧洲株来进行分离PRRSV，只可以利用PAM细胞进行。这种细胞来源于血清、脾脏、扁桃体、肺脏。在进行PRRSV分离中，我们可以快速的从急性感染的猪身上得到。PRRSV的分布也有所不同，死胎脾脏、淋巴巨噬细胞分布多存在于流产的情况，新生的猪多分布在肺脏之中。冷藏冷冻能够在远距离运输中保证采集的样品的活性，在进行特殊处理后，使其接种在单层PAMs细胞后，等待4d左右，就可以看到细胞病变。一开始病变细胞出现膨大、圆形，而后开始脱落、皱缩。接种在CL-2621细胞后，细胞病变变得迟缓很多，需要等待6d左右出现细胞的感染。接种在Marc-145细胞2d左右，则呈现激烈的细胞病变。在进行毒株的细胞病变实验中，一些毒株不能够为实验带来理想的实验结果，不能出现明显的细胞病变。而且，还应当加强对间接免疫荧光试验、免疫过氧化物酶单层试验方法的验证。

2 血清学诊断方法

血清学试验应用广泛，是比较传统的PRRSV诊断方法。血清学试验方法可以有较为明显的特异性，但是缺乏足够的敏感度。

2.1 中和试验

通过中和试验，可以发现PRRSV抗体的特异性比较突出，但是敏感度不足，常常需要在等待将细胞感染后5周左右才能够出现VN抗体，10周之后才可以达到最多。这主要是因为中和抗体出现的时间比较晚。与IPMA、IFA、ELISA等比较，可以发现中和试验的敏感度较低，不能够很好的运用到PRRSV感染的早期诊断之中。后人对这种情况进行了研究与改进，增加20%的猪的新鲜血清，从而提高了检测的敏感程度，在10d左右的时间里得到了滴度较高的VN抗体。

2.2 间接荧光抗体试验

间接荧光抗体试验的特性与敏感度相似于免疫过氧物酶单层试验，并广泛应用在许多欧美发达国家之中。我国也在进行相应的IFA与微量IFA的试剂供应。这种试剂能够检测到受到PRRSV感染6d之后的猪的抗体。抗体在30到50d左右达到峰值，然后逐渐下降，最后再4到6个月逐渐消失。这种方法在细胞培养上比较困难，对环境和人员的水平提出了很大的要求，而且只能得到PRRSV分离株。

2.3 免疫过氧化物酶单层试验

免疫过氧化物酶单层试验在众多PPRSV抗体检测中出现的最早，广泛应用在欧洲国家，其敏感度和特异性得到了普遍认可。该方法能够在感染病毒6d后的猪身上检测到PRRSV抗体，这种方法是根据PAMs、CI-2621、Marc-145等完成的，然而这种方法的结果不能够自动显示，需要人工观察评判，其结果也容易受到背景着色的影响，出现偏差，而且还应具备较高的细胞培养环境与倒置显微镜的观测，成本较高，难以进行大范围的推广。

3 PRRSV的分子生物学诊断

3.1 RT-PCR检测

RT-PCR检测在进行PRRSV的检测中，以其较高的敏感度得到了广泛的应用。其敏感度为pg水平。Suarez研究出了敏感度较高的RT-PCR方法，达到对隐性感染进行检测的水平。赵耘等运用RT-PCR的诊断方法，能够进行更加简便的操作来增强检测的敏感性。顾海洋等通过实验发现并验证了高致病性猪蓝耳病在基因上的87bp的连续缺失，这对猪的高致病性蓝耳病的预测检验方法提供了方向，建立了区别高致病性与低致病性猪蓝耳病的一套方法。