转赖氨酸基因鼠奶对哺乳期小鼠生长成绩的影响

2017-11-17字如燕

兽医导刊 2017年16期

关键词：赖氨酸限制性哺乳期

字如燕

（兰坪县兔峨乡人民政府农业综合服务中心，云南怒江 671407）

转赖氨酸基因鼠奶对哺乳期小鼠生长成绩的影响

字如燕

（兰坪县兔峨乡人民政府农业综合服务中心，云南怒江 671407）

为确定赖氨酸转基因奶对哺乳期小鼠的生长成绩的作用，本研究选取92只转基因后代，经PCR检测，其中阳性转基因小鼠为56只，剩余的为同窝阴性小鼠，并取25只野生型小鼠为对照，进行后代体重测定。结果表明：饮用赖氨酸鼠奶小鼠生长明显快于野生型对照组（P<0.05），说明赖氨酸鼠奶对哺乳期小鼠生长具有进作用。同时，来源促于同窝的转基因非转基因小鼠之间没有观察的明显差异，说明导致小鼠体重增长差异的主要因素是饮用高赖氨酸奶，而不是转基因本身。

转赖氨酸基因鼠；PCR检测；体重

1 前言

1.1 赖氨酸重要性

对于动物体来说，蛋白质是一种必需的营养物质，它不仅是维持和合成体蛋白的原料，同时还可以增强仔畜免疫力，提高成活率。氨基酸是蛋白质的基本组成单位，蛋白质营养的本质是氨基酸营养，并且主要是限制性氨基酸营养。限制性氨基酸是指动物需要量大且一般日粮容易缺乏的氨基酸，根据其相对缺乏的程度，又可分为不同序列的限制性氨基酸。一般认为，赖氨酸是玉米-豆粕型日粮的第一限制性氨基酸，赖氨酸是影响机体代谢、生产性能和饲料成本的核心因素之一，其需要量是建立理想蛋白质的基础。因此，赖氨酸的营养一直是较为活跃的研究领域。

1.2 赖氨酸对生长成绩的促进作用

赖氨酸是一种α-氨基酸。它的化学式表示为：HO2CCH（NH2）（CH2）4NH2，是人体必需氨基酸之一，就像精氨酸和组氨酸一样，赖氨酸属于碱性氨基酸，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。必需氨基酸是指人体需要，但自身不能合成或合成速度不能满足身体需要，必须从食物中获得的氨基酸。在必需氨基酸中，赖氨酸是最受关注的，因为它是谷物的第一限制性氨基酸，而谷物是人和动物的主要食物。

1.3 研究的目的与意义

为了对转赖氨酸基因鼠奶功能进行初步测定，我们以引用非转基因鼠奶小鼠为对照，来分析转赖氨基因鼠奶对哺乳期小鼠生长成绩的促进作用。

2 材料方法

2.1 实验动物

昆明白（KM）小鼠购自长春市高新实验动物中心；ICR小鼠购自吉林大学实验室动物中心。小鼠均饲养于光控条件（14h光照/10h黑夜）。

2.2 实验方法

2.2.1 体重测定

本实验共选取共92只转基因后代和25只野生型小鼠后代进行体重测定。转基因母鼠为8～10周龄，体重24～26 g，均为第一泌乳期。为保证实验的同源性，分别于小鼠出生后第3d调整每窝小鼠数量至8～10只，并进行转基因鉴定，调整公母比例接近1：1。每窝小鼠每天上午9点都进行体重测定，直至泌乳期第22d。

2.2.2 小鼠尾部组织基因组DNA的提取

利用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（天根），对转赖氨酸基因小鼠基因组进行提取。

（1）剪鼠尾加入 300μl 的缓冲液 ACL，加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液（100mg/ml），混匀，水浴锅中55℃消化1～3h。

（2）加入缓冲液AB 300μl，混匀，静置5min，10000转离心3min。

（3）将上清转移至吸附柱中，12000rpm离心30s，并弃去废液。

（4）向吸附柱中加入漂洗液WB 500μl，（实验前加入无水乙醇），室温 12000rpm 离心 30s，弃废液。重复此步骤一次。

3 实验结果

3.1 小鼠尾部组织基因组DNA提取

本研究分别提取转基因及非转基因小鼠后代尾部基因组DNA，结果如图所示（图1），基因组各项指标均达到要求，可以用于后续实验。

图1 转基因小鼠基因组提取结果。

3.2 转基因小鼠PCR筛选

利用特异性引物扩增高赖氨酸基因LR、乳蛋白启动子、NEO基因及内参基因β-actin，内参基因β-actin在转基因阳性小鼠和野生型小鼠均有条带扩增，说明PCR体系合理模板质量良好，高赖氨酸基因LR、乳蛋白启动、NEO基因，有转基因阳性小鼠有扩增条带，野生型无扩增条带，检测与预期结果一致，部分转基因小鼠扩增。